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1.
[目的]当前,新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)导致的疫情在全球大流行,严重危害人类的生命健康.研究拟制备并鉴定针对SARS-CoV-2核衣壳蛋白(nucleocapsid,N)的单克隆抗体,为SARS-CoV-2新型快速检测方法的创制奠定基础.[方法]纯化原核表达的SARS-CoV-2 N重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,经过4次免疫后将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,并通过western blot和间接免疫荧光试验鉴定抗体的反应性.[结果]经3次亚克隆,试验获得了2株能够稳定分泌抗原特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2D11和8G6;并且制备的抗体与真核表达的SARS-CoV-2 N蛋白反应原性良好.[结论]研究制备的单克隆抗体能够用于SARS-CoV-2的检测.  相似文献   
2.
[目的]非洲猪瘟(african swine fever,ASF)是一种以猪急性发病、高死亡率为典型特征的病毒病,其病原非洲猪瘟病毒(ASF virus,ASFV)在中国的暴发给中国养猪业造成重大损失.p72蛋白是ASFV的主要衣壳蛋白,能够有效诱导机体产生特异性抗体,常被利用于检测试剂盒的备成.[方法]构建了p72全长(pET-28a-ASFV-p72)及1-171aa截短突变体(pET-28a-ASFV-p72-(1-171))原核表达质粒,通过E.coli原核表达系统表达并纯化了p72全长及1-171aa融合蛋白.该2种蛋白经过4次免疫日本大耳白Balb/C兔后,获得效价皆为大于1:819200的多抗血清.[结果]通过间接免疫荧光实验和Western blot检测2种多抗均能与真核表达的p72蛋白发生特异性反应.[结论]制备的针对p72多克隆抗体为后续诊断试剂盒的研发提供依据.  相似文献   
3.
为了解近年来江西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)分子流行病学和其遗传变异情况,本次调查于2016-2017年从江西省各地区规模化猪场采集453份疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病料,采用RT-PCR方法对所有病料进行检测。结果发现,其中321份病料为PRRSV阳性,阳性率为70.86%,各地区的阳性率在19.15%~84.85%之间。挑选14份阳性样品测序后,经ORF5基因序列分析,江西地区各PRRSV毒株ORF5基因的核苷酸同源性为83%~100%,PRRSV流行毒株与参考毒株的同源性在59.9%~98.5%之间。基于ORF5基因的进化树分析表明,14个测序毒株均为美洲型毒株,其中有4株为基因亚型Ⅰ,即高致病性毒株(HP-PRRSV);3株为基因亚型Ⅱ,即经典毒株;3株为基因亚型Ⅲ,即NADC30-like毒株;4株为新出现的基因亚型Ⅳ。氨基酸序列比对分析表明,基因亚型Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ毒株ORF5基因编码的GP5蛋白氨基酸在3个表位及2个重要的抗原相关区域存在较大变异,其中以NADC30毒株为代表的基因亚型Ⅲ毒株和以GD1404毒株为代表的基因亚型Ⅳ毒株均表现出独有的氨基酸变异,这些变异可能会影响GP5蛋白的免疫原性。本次调查结果表明,2016-2017年江西地区PRRSV流行出现了新形势,美洲型毒株出现了多基因亚型共同存在的局面,以高致病性毒株(HP-PRRSV)为主,NADC30-like毒株和新基因亚型等新毒株的比例较高,同时还存在经典毒株;持续实时监测PRRSV的毒株流行和变异情况,可为临床诊断、药物和疫苗开发及PRRS的科学防控提供依据。  相似文献   
4.
为解决发酵床垫料部分区域积水导致的烂床等问题,试验确定了"热气脉动法"的垫料水分调控方法,并设计了一套发酵床垫料水分调控设施设备以 STC89C52单片机为核心,WL433A无线通讯模块进行数据的传输,使用 VB.NET进行上位机的开发, Access为后台数据库,实现了对发酵床垫料内部信息的实时采集、无线传输、自动存储以及远程实时监测等,为发酵床垫料水分调控的研究提供了设施基础,在一定程度上推动了养殖设施设备的发展。  相似文献   
5.
为实现江苏地区设施蔬菜安全、高效、优质生产建设,本文以农业机械化工程技术与农艺栽培技术融合模式创新为途径,围绕茄果类机械化种植关键环节,进行了机械装备选型和关键实施要点的阐述,探索构建可复制的8m跨连栋大棚茄果类蔬菜高效机械化高效生产技术模式,以推进全省设施茄果类蔬菜种植全程机械化进程。  相似文献   
6.
新现猪Delta冠状病毒RT-PCR检测方法的建立及其应用   总被引:2,自引:0,他引:2  
【目的】猪Delta冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCoV)是近年来新发现的可引起猪只,特别是新生仔猪腹泻的冠状病毒,其引发的腹泻具有较高的发病率和死亡率,是造成新生仔猪死亡的重要原因之一。试验拟建立新现PDCoV RT-PCR检测方法,并调查当前江西腹泻猪群中PDCoV的感染情况。【方法】通过对Gen Bank数据库中PDCoV全基因组序列的比对分析,找出保守序列,用Primer 3.0在线软件设计1对扩增PDCoV核衣壳(N)蛋白基因片段的特异性引物,基于该引物建立PDCoV RT-PCR检测方法;用建立的方法检测腹泻猪粪便及肠道样品,挑选阳性扩增产物进行克隆、测序;用本试验获得的PDCoV序列与其他国家或地区的PDCoV序列以及猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)共同构建进化树,分析PDCoV各毒株及其与PEDV和TGEV之间的进化关系;以PEDV、TGEV、猪库布病毒(PKoV)、猪星状病毒(PAstV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及猪瘟病毒(CSFV)RNA为模板验证引物的特异性;构建PDCoV核衣壳蛋白基因片段重组质粒,并以系列稀释的重组质粒为模板确定所建立的PDCoV RT-PCR方法的敏感性;应用建立的RT-PCR方法调查249份2012—2015年江西省猪群腹泻样品中PDCoV的存在情况,随机抽取一定数量的RT-PCR阳性扩增产物进行克隆、测序进一步验证反应的特异性。【结果】1以腹泻猪粪便样品RNA为模板,应用所设计的特异性引物扩增出了329 bp的单一条带,与预期目的片段大小一致,扩增产物经克隆后测序,将获得的序列与NCBI Gen Bank数据库序列进行比对,比对结果表明试验所获得的序列与数据库中PDCoV序列的同源性高达99.1%,证明所扩增的序列属于PDCoV;2将8条本试验获得的PDCoV N基因片段序列与18株其他国家或地区的PDCoV毒株以及PEDV、TGEV的相应N基因片段序列构建进化树,结果表明26条PDCo V序列属于同一个分支,而PEDV和TGEV则分别属于不同的分支。试验获得的PDCoV序列与韩国PDCoV毒株KNU14-04亲缘关系最近,同源性高达99.1%;与两株香港毒株HKU 15-44和HKU 15-155亲缘关系相对较远;3本试验建立的RT-PCR方法特异性强,仅能扩增出PDCoV,而对PEDV、TGEV、PKoV、PAstV、PRRSV及CSFV核酸无交叉扩增现象;4所建立的RT-PCR方法灵敏度高,将含扩增片段的重组质粒以1.0×106拷贝/μL为起始浓度依次10倍稀释至1.0×101拷贝/μL作为模板验证方法的灵敏度,结果表明所建立的方法对PDCoV最低可检出量为1.0×103拷贝/μL;5应用建立的RT-PCR方法检测了249份2012—2015年采集自江西省各地区的腹泻母猪粪便及腹泻仔猪粪便/肠道样本,结果显示腹泻样本中PDCoV的检出率为31.33%(78/249),母猪粪便中PDCoV的检出率(27.78%)稍低于仔猪粪便及肠道样品PDCoV的检出率(31.92%),最早可从2012年的样品中检测出PDCoV。【结论】试验成功建立了检测新现PDCoV的RT-PCR方法;应用所建立的RT-PCR方法检测了249份2012—2015年江西地区猪群临床腹泻样品中PDCoV存在情况,结果表明PDCoV是一种普遍存在于腹泻猪群中的病毒;研究建立的RT-PCR方法对猪群PDCoV的临床诊断和流行病学调查等具有应用价值。  相似文献   
7.
为了探索鼠李糖乳杆菌的生长特性和最适培养条件,研究采用单因素试验设计,分别考察了温度、培养基初始p H值、供氧水平和培养周期等参数对鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)菌体生长的影响。结果表明鼠李糖乳杆菌的最适生长温度为39℃、最适p H为6.0,适宜在低溶氧量的环境中培养。研究证实鼠李糖乳杆菌适宜在偏酸性的厌氧环境中生长,在39℃下培养6 h活菌量可达108.5cfu/m L,上述结果对于鼠李糖乳杆菌的规模化生产具有一定的指导意义。  相似文献   
8.
经济实用型发酵床生猪养殖设施的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
发酵床生猪养殖技术是一种低成本、高产出、无污染的生态养猪模式.要将发酵床养殖方法在江苏省全面推广,建立一套适应江苏省气候特点并与发酵床养猪技术相配套的经济实用型养殖设施体系十分重要.本研究介绍的半塔式的大棚结构、环境因子的监控设施、智能灭蚊驱蝇系统等发酵床养殖设施装备与调控技术体系建设成本低,实用性强,能基本解决发酵床...  相似文献   
9.
以快餐式鸭血粉丝汤为材料,研究了鸭血粉丝汤辐照杀菌效果及储藏3个月后微生物(菌落总数、霉菌、大肠菌群和沙门氏菌)的生长情况.结果表明,辐照前粉丝和蔬菜包的卫生质量较好,鸭血包和辣酱包的含菌量较高,粉包的含菌量最高,放置3~5 d鸭血包中微生物繁殖的速度快于粉丝、蔬菜包等,辣酱包中的沙门氏菌检测为阳性.辐照杀菌效果明显,当辐照剂量为2 kGy时,辣酱包中的沙门氏菌检测为阴性,其他检出的微生物含量明显降低;6 kGy时鸭血包和蔬菜包中均未检出微生物;8 kGy时粉丝中也均未检出.辐照储藏3个月后,2 kGy辐照的鸭血包中的菌落总数明显高于刚辐照时,6、8 kGy辐照的鸭血包中检出了菌落,且含量较高,分别达到1×104、5.4×103 CFU/g.综合试验结果,提出了鸭血粉丝汤辐照杀菌的适宜工艺剂量范围为4.0~6.0 kGy.  相似文献   
10.
采用酶联免疫法(ELISA)检测肉制品中瘦肉精--克伦特罗γ射线辐照降解效应,结果表明:辐照可以显著降低肉制品中克伦特罗含量,降解率随辐照剂量增大而提高,当辐照剂量为3.4 kGy时,肉制品中克伦特罗的降解率在80%以上.  相似文献   
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