富硒女贞子粗多糖对小鼠免疫功能的影响

从富硒女贞子及女贞子中提取粗多糖,探讨其对小鼠免疫功能的影响。将90只小鼠随机均分为3组:对照组、富硒女贞子粗多糖组、普通女贞子粗多糖组。对照组灌服生理盐水,试验组小鼠灌服粗多糖液,灌服2次,每次连续5 d。2次灌胃的第3天注射卵清蛋白,二免后测定胸腺脾脏指数;MTT法检测脾淋巴细胞增殖水平;ELISA试剂盒检测血清中IL-2、IL-4、IFN-γ生成水平及相应抗体生成水平。结果显示:与对照组相比,试验组脾脏和胸腺指数明显升高,脾淋巴细胞增殖作用显著提高;IL-2、IL-4、IFN-γ生成水平明显提高,其中IFN-γ与对照组存在显著差异;而对特异性卵清抗体生成影响不大。这表明富硒女贞子粗多糖较普通女贞子粗多糖能更好地促进机体非特异性免疫及细胞免疫,从而增强机体免疫功能,在特异性体液免疫的作用方面则没有表现出明显的规律性,还需进一步研究。     

一株中华鳖气单胞菌噬菌体的分离及功能鉴定

中华鳖是我国主要的名优淡水养殖品种,但病害频发严重影响了鳖养殖业的可持续发展。特别是滥用抗生素造成食品安全和生态安全问题,已引起人们高度关注,寻找替代抗生素对中华鳖疾病进行预防及治疗迫在眉睫。从中华鳖养殖塘中分离得到气单胞菌噬菌体1株,经透射电子显微镜观察确定为肌尾噬菌体科噬菌体。该噬菌体为宽噬噬菌体,对中华鳖及对虾发病养殖塘中分离得到的嗜水气单胞菌及副溶血弧菌均有明显的抑制效果,该噬菌体浸染的细菌培养基能形成明显的噬菌斑。此外,经体外试验,发现该噬菌体能够有效治疗中华鳖的腐皮病。本研究分离得到的噬菌体能够有效抑制水产常见致病菌,为后续抗生素代替治疗方法的研发提供了一定理论依据。     

温和气单胞菌TL97528株丝氨酸蛋白酶基因片段克隆与序列分析

中华鳖(Trionyx sinensis)细菌性疾病主要由气单胞菌感染引起的,通过脱脂奶平板检测及酶活性试验得出温和气单胞菌TL97528株分泌的胞外蛋白酶为丝氨酸蛋白酶,而丝氨酸蛋白酶是气单胞菌的主要毒力因子。根据已发表的嗜水气单胞菌的丝氨酸蛋白酶基因序列保守区域设计引物,PCR扩增出一长度为809 bp大小的特异片段,该序列在Genbank上的登录号为FJ357446。对该序列进行分析发现,已发表的温和气单胞菌(Aeromonas sobria)丝氨酸蛋白酶基因(GenBank登录号为AF253471)同源性为98%、与其他几株已发表的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)丝氨酸蛋白酶基因(GenBank登录号分别为AF126213、AY841795、DQ127822、CP000462、CP000644、AF159142)同源性分别为98%、82%、82%、82%、81%、81%,与杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)丝氨酸蛋白酶基因(GenBank登录号为X67043)同源性为80%。用DNAstar软件分析,与鳖源温和气单胞菌TK961010株的同源性为98%,...     

富硒女贞子水提物、粗多糖对小鼠免疫的影响

将100只小鼠随机分为5组(雌雄各半),在第1~5天、第8~12天给药组予以相应药物灌服,对照组给予生理盐水,第3、10天用鸡卵清蛋白给小鼠注射免疫,第24天检测相应抗体生成水平和血清中IFN-γ、IL-2、IL-4水平,探讨富硒女贞子水提物、粗多糖对小鼠免疫的影响。结果表明:各给药组的IFN-γ、IL-2、IL-4生成水平均高于对照组,其中组Ⅲ显著高于组Ⅰ、组Ⅱ(P0.05);组Ⅳ公鼠的IFN-γ水平显著高于组Ⅴ(P0.05);与组Ⅰ相比,各给药组卵清蛋白抗体生成水平差异不显著(P0.05)。证明富硒女贞子粗多糖、普通女贞子水提物对小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-4的生成有明显促进作用,对小鼠的特异性体液免疫作用不明显。     

光合细菌的鉴定、生长特性及其应用

光合细菌HZPSB株分离自淡水养殖池塘底泥,经富集与纯化培养,菌落形态、培养特征和菌体形态学观察,细胞吸收光谱及生理生化特性测定,鉴定为类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides).测定了HZPSB株的最佳培养条件,其最佳培养条件为29℃、3000Lux、pH7.0和1‰盐度.测定了光合细菌对池塘水质(溶氧、pH、氨氮、亚硝酸盐氮、COD)影响;添加于饲料后对鱼血清中溶菌酶活力的影响;同时进行了光合细菌的大田应用试验.结果表明:光合细菌对池塘水的溶解氧、pH没有影响;降低水中氨氮、亚硝态氮、有机物(COD);饲料中添加光合细菌饲喂鲫鱼、罗非鱼,鱼血清中溶菌酶的活性明显高于对照组.光合细菌分别在湖州、绍兴、杭州、嘉兴、上海等进行大田应用试验,取得了较好的应用效果.养殖虾蟹的发病率有明显的减少,与不使用光合菌的池塘相比,发病率降低了25%以上,提高了虾蟹产量.     

罗氏沼虾野田村病毒3种检测方法比较

胶体金免疫层析技术、RT-PCR、RT-LAMP采用的抗体和特异性引物均针对罗氏沼虾野田村病毒的衣壳蛋白和编码基因RNA2。采用这3种方法分别检测罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV),结果表明,免疫胶体金检测试纸能快速检测感染罗氏沼虾野田村病毒的幼虾,但灵敏度较低,能用来检测具有疑似病症的样品;RT-PCR和RT-LAMP检测灵敏度都优于免疫胶体金检测试纸,但RT-PCR方法操作步骤繁琐,所耗时间较长,而RT-LAMP方法操作简便、用时短、不需要特殊仪器,在产物中加入核酸染料后检测结果可用肉眼直接判定。因此,RT-LAMP方法更适合基层和现场检测,其相关试剂盒的研发更具有应用前景。     

红螯螯虾弗氏柠檬酸杆菌病病原的分离与鉴定

从濒死的红螯螯虾(Cheraxquadricarinatus)的肝胰脏中分离得到可疑病菌L1和L2,经细菌学鉴定2株细菌均为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii);经人工感染试验证实L1和L2均导致健康虾发病死亡,其LD50分别为2 2×105CFU/ind、7×105CFU/ind;2株细菌对14种药物的敏感性相似,对9种抗生素敏感,对5种抗生素有抗性。从中筛选出有效药物,应用于生产中取得了较好效果。     

中华鳖胚胎组织原代细胞培养技术的研究

基于当前市场上中华鳖商业化细胞缺乏,不利于开展其病害防控研究的现状,以中华鳖胚胎为对象,采用组织块原代培养技术,从孵育15～20 d的受精卵中获得适宜的胚胎组织,经抗生素、乙醇消毒,通过无菌条件下将组织块均匀分散贴壁在细胞瓶中,然后于30℃恒温培养箱中贴壁培养4 h后加入无血清M199培养基多次清洗,从而获得了中华鳖胚胎组织原代细胞;在此基础上分别对中华鳖胚胎细胞传代培养条件、冻存与复苏等进行系统性研究,初步确定中华鳖胚胎细胞培养温度为26℃,M199或L-15培养基,血清浓度为15%(体积分数),通常7 d传代1次;二甲亚砜冻存保藏后,细胞复苏生长状况正常。     

罗氏沼虾苗种肌肉白浊病诺达病毒的分离和特性研究

本实验在以往罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)苗种肌肉白浊病病毒致病性的基础上对病毒特性进行深入研究。病虾除菌过滤液以1：50和1：250浸泡感染可复制出典型的症状，病毒对氯仿抵抗；用PEG法浓缩病毒后，35000r／min超速离心部分纯化病毒，在电镜下可观察到大量直径24nm的球形病毒颗粒，无囊膜，此外还观察到大小为14nln的病毒粒子；采用Trizol试剂对病毒进行了核酸提取，电泳结果发现有4条核酸条带，分别为3．0kb、1．3kb、0．8kb、0．75kb，对RNA核酸酶、S1核酸酶敏感，对DNA酶抵抗．为单链RNA病毒。用罗氏沼虾诺达病毒核酸探针进行分子杂交，探针可与提纯核酸及病虾样品匀浆液反应，Southern杂交表明3．0kb、1．3kb条带分别属于诺达病毒的RNAl和RNA2。对不同的发病样品进行了核酸电泳，4个典型症状的样品均存在诺达病毒条带，2个样品还存在小病毒核酸。上述结果表明，诺达病毒是引起罗氏沼虾苗种肌肉白浊病的主要病原。14nm小病毒与罗氏沼虾肌肉白浊病中的关系有待进一步的研究。     

影响枯草芽孢杆菌B115抗茵物质产生的条件

产生抗菌物质的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B115能较强地抑制鲫细菌性败血症病原嗜水气单胞菌(BSK-10)及其它水生动物的致病菌，对金黄色葡萄球菌也有抑制作用．测定了不同培养基(NYDA、BPY、LB)、通气量、pH、接种浓度、营养物质及氯化钠对B115的生长及抗菌物质产生的影响和抗菌物质的稳定性，结果显示：B115培养于BPY培养基抗菌物质抑制BSK—10的作用最强；250mL三角瓶加80mL培养液。最适抗菌物质的产生；0．5％～1％的接种量，抗菌物质产生最佳；培养基初始pH7时，抑菌效价最高为18mm；葡萄糖能诱导抗菌物质的产生，镁离子、氨离子及柠檬酸钠对抗菌物质的产生没有影响，而磷酸钾和氯化钠抑制抗菌物质的产生。抗菌物质对热不稳定，其抗菌活性随着煮沸时间的延长而减弱，高压灭菌后，抗菌活性完全消失：在4℃冰箱放置15d后．活性完全消失：搞菌物后对PH不敏感．但酸性环境能使它沉淀析出。