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1.
随着全球经济一体化进程的加速 ,国际贸易和国际交往日趋频繁 ,动物海绵状脑病在全球扩散的危险性大大增加 ,疯牛病 (BSE)、羊痒病(Scrapie)等在世界范围内呈蔓延的趋势。现在除欧洲外 ,其它各洲也有报道 ,BSE、羊痒病等动物海绵状脑病在我国周边国家也呈流行趋势 ,严重威胁着我国的畜牧业生产。我国虽然至今尚未发现BSE ,但因我国幅员辽阔 ,传入的可能性较高 ,因此 ,我们必须提高警惕 ,建立严密的BSE监测系统 ,采取主动检测和报告制度。我国政府高度重视对BSE、羊痒病等疫病的检测和监测工作 ,本实验室于2001年被认定为国家动物海绵…  相似文献   
2.
实时荧光定量PCR构建绵羊PrP基因标准品质粒和标准曲线   总被引:1,自引:0,他引:1  
羊痒病是一种传染性的致死性神经退行性疾病,常引起绵羊和山羊发病,该病在欧洲流行了大约250年,但是它的流行病学和传播机制还不是很清楚.正常的朊蛋白(PrPc)不能引起神经退行性病变,虽然目前已经对许多组织的PrP mRNA进行了检测,但是对它的生物学功能还知之甚少,对PrP基因表达的机制尚不清楚.研究显示,不同组织来源的细胞中朊蛋白的表达程度差异很大,主要出现于神经细胞中.PrPc在细胞中的高水平表达可促使PrPc向PrPsc转变,目前的研究中,对绵羊PrP mRNA的转录机制尚未阐释清楚.因此,对绵羊外周和中枢系统PrP mRNA的表达进行定量,有助于探讨各组织器官中的PrP在羊痒病的发生过程中的作用.  相似文献   
3.
小脑颗粒神经元是动物传染性海绵状脑痛发生、发展过程中的主要反应性细胞之一,小脑颗粒神经元的体外分离、纯化和鉴定是建立动物传染性海绵状脑痛细胞作用模型的关键步骤。根据大鼠小脑颗粒神经元的生存特性,按照抑制筛选的原理.对小脑颗粒神经元进行了体外分离和培养,经神经元特异性的烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色,表明体外培养的小脑颗粒神经元细胞纯度较高,可以用于细胞作用模型的建立。  相似文献   
4.
自从1906年Alzheimer首先报道Alzheimer病病例后,直到近10年才将早老年痴呆和老年期痴呆归为一类痴呆,称为Alzheimer’s病(AD)或Alzheimer型老年性痴呆(SDAT)。AD病是一种以进行性痴呆为特征的神经慢性脑变性疾病,神经病理的改变为弥漫性大脑皮质萎缩,皮质神经细胞减少,而大脑皮质中的新、旧老年斑、  相似文献   
5.
用实时荧光定量RT-PCR方法定量绵羊PrP基因的表达   总被引:4,自引:0,他引:4       下载免费PDF全文
为快速、准确定量绵羊PrP基因的mRNA,建立了绵羊PrP基因实时荧光定量聚合酶链反应检测方法。根据已报道的绵羊PrP基因序列,设计合成引物;采用RT-PCR方法扩增目的片段;构建标准重组质粒制备标准曲线,用于样品检测。结果发现,中枢神经系统组织PrP基因的表达量(copies/ng总RNA,39420)比外周组织(为7845)的高;在中枢神经系统中,脑干的PrP基因的表达量最高(为67020);外周器官中,淋巴结PrP基因的表达量最高(为29086),肾脏的表达量最低(为125)。建立绵羊PrP基因实时荧光定量PCR方法,对PCR扩增反应中每一个循环的产物进行定量分析,为进一步研究绵羊组织器官的PrP表达在传染性海绵状脑病发生中的作用提供基础数据。  相似文献   
6.
本研究旨在检测绵羊组织中朊病毒受体37kDa/67kDa LRP/LR mRNA水平并探讨其与朊病毒组织嗜性的关系.选用背景相似的6只内蒙绵羊,提取组织RNA.反转录RT-PCR构建cDNA模板;利用本研究前期构建的标准质粒及标准曲线,对组织中该受体mRNA水平进行Real-time(实时)荧光定量PCR检测.结果表明,大脑皮质中的受体表达水平最高(P<0.05),其次为心脏和脑干,中等表达的器官依次为海马、小脑、脾脏、丘脑、肠系膜淋巴结、肝脏和肾脏,表达量最低为肺脏(P<0.05).结果提示,朊病毒受体--37kDa/67kDa LRP/LR在绵羊各组织中的表达量高低与朊病毒的复制程度有一定的相关性,受体LRP/LR表达量较高的区域朊病毒复制水平相对较高.结果提示朊病毒入侵机体后,组织器官PrPsc聚集程度可能与受体37kDa/67kDa LRP/LR表达水平相关.  相似文献   
7.
目前检测口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)常用技术主要有动物接种、病毒分离和血清学试验等[1,2],但这些方法存在费时、敏感性低等缺点。近年来,随着分子生物学的发展和PCR技术的建立,许多学者又将PCR技术应用于FMDV的检测[3~8],该方法克服了目前常规方法的某些缺点,具有良  相似文献   
8.
以去势雌兔作为对照,用高胆固醇饮食法复制动脉粥样硬化(AS)模型,研究了利维爱(Livial)在防治兔动脉粥样硬化过程中对雌激素受体和低密度脂蛋白受体mRNA表达的影响。应用RT-PCR方法,β-actin做内参照,对各组去势雌兔心脏、肝脏组织内雌激素受体和低密度脂蛋白受体mRNA的表达进行了检测。结果,2种受体在兔心脏和肝脏内均有表达。对照组,雌激素受体在心脏、肝脏内的相对表达量分别为0.43±0.12、0.39±0.20;低密底脂蛋白受体在心脏、肝脏内的相对表达量分别为0.27±0.05、0.86±0.12,差异显著(P<0.001)。AS模型组,雌激素受体和低密度脂蛋白受体在心脏、肝脏内的相对表达量分别为0.29±0.03、0.27±0.06和0.04±0.01、0.17±0.02,2种受体的mRNA表达均比对照组降低,差异显著(P<0.001)。利维爱组(饲喂高胆固醇饲料同时给予利维爱),雌激素受体在心脏、肝脏内的相对表达量为0.41±0.09、0.36±0.06,与模型组相比表达量显著提高(P<0.001),与对照组表达量接近;低密度脂蛋白受体在心脏、肝脏内的相对表达量为0.04±0.02、0.18±0.04,与模型组比较未见显著变化。由此认为,组织内2种受体的mRNA表达量降低可促进动脉粥样硬化的发生;利维爱通过提高组织内雌激素受体mRNA的表达可防治AS的发生与发展,对低密度脂蛋白受体的mRNA表达影响较小。  相似文献   
9.
对金黄地鼠P rP基因序列进行分析,选择其高度保守区域设计引物,对金黄地鼠各组织提取mRNA,经RT-PCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选后得到重组标准品质粒,对重组标准品质粒进行酶切、PCR和测序鉴定,表明P rP基因保守区段已经成功克隆。将107~102拷贝/反应的重组标准品质粒进行荧光定量PCR,10次重复C t值平均分别为17.50±0.5、21.38±0.2、25.29±0.7、29.12±0.7、31.34±0.4、33.89±0.1,系统自动分析软件显示C t值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系,回归系数为0.998。对动力学曲线分析表明,在该反应体系和反应条件下,该标准曲线的灵敏度为102拷贝/反应。荧光PCR P rP基因表达检测标准品质粒和标准曲线的建立,为检测P rP基因的组织特异性表达和动物传染性海绵状脑病发生的分子机理奠定了基础。  相似文献   
10.
为了给更好地研究神经元病理变化提供物质材料,对新生大鼠大脑皮质神经元进行体外分离和培养。无菌操作取新生大鼠的大脑皮质,采用机械法和胰蛋白酶消化法相结合的方法分离细胞,制备单层细胞悬液接种培养板;5-氟脱氧尿嘧啶处理等方法纯化神经元,甲苯胺蓝染色法及抗NSE单克隆抗体对纯化后的神经元进行鉴定。结果表明,培养的神经元生长良好,形态正常,纯度高达90%以上。采用本方法培养的神经元可作为深入研究中枢系统疾病的细胞模型材料。  相似文献   
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