乳酸克鲁维酵母乳糖酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质

通过PCR扩增从乳酸克鲁维酵母基因组获得乳糖酶基因lac4,将其克隆至大肠杆菌表达载体pET-28a(+),并在大肠杆菌BL21中获得表达,酶活性达(44.78±2.84)U/mL。利用Ni-ResinHP亲和层析技术纯化该酶,SDS-PAGE分析表明,重组酶分子质量约为122ku。酶学性质研究表明,该酶最适反应温度为43℃,37℃时半衰期为30min,最适反应pH为7.0,在pH4.0～10.0范围内有良好的稳定性,Ca2+、Zn2+、Fe2+、Co2+、Mg2+、Mn2+对酶有非常明显的激活作用,比酶活性为(255.55±2.32)U/mg,酶反应常数Km为3.49mmol/L,最大反应速率vmax为4.22mmol/(min.mg)。     

黑水虻抗菌肽对曲霉和沙门氏菌的抑制作用及其营养成分研究

为研究黑水虻抗菌肽对曲霉和沙门氏菌的抑制作用及其营养成分，本试验通过微量肉汤稀释法和分光光度计法对最低抑菌浓度和抑菌曲线进行了比较。结果表明：抗菌肽对沙门氏菌的最低抑菌浓度为2.5 mg/mL，在此浓度下黑水虻抗菌肽对黑曲霉也有较强的抑制效果，处于最低的抗菌肽对沙门氏菌的抑制时间为32 h(P <0.01)；使用场发射扫描电子显微镜对黑水虻抗菌肽作用前后病原菌形态进行观察，证明抗菌肽作用于病原菌膜结构，在膜上形成离子通道，造成病原菌内容物流出，从而导致病原菌死亡;采用酸水解和2,4二硝基氟苯柱前衍生高效液相色谱法对抗菌肽氨基酸组成进行分析，结果显示必需氨基酸含量占比约为50%。抗菌肽粗提物具有抑菌作用强，对环境友好，无富集无残留，营养全面等优点，十分适宜作为饲用抗生素的替代物。