水稻OsLEA5c基因的克隆、表达和抗逆性分析

为了研究水稻胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA5c 的抗逆性,利用 RT PCR技术从水稻中克隆到OsLEA5c的 cDNA。序列分析表明,OsLEA5c基因的读码框为456 bp,编码1个由151个氨基酸残基组成的蛋白。蛋白分子量为16.55 kD,等电点为5.07。OsLEA5c蛋白的平均亲水系数（GRAVY）为0.020,为疏水蛋白。OsLEA5c蛋白的44－140位氨基酸残基形成 LEA_2结构域。进化树分析表明,OsLEA5 c属于第5组LEA蛋白的C亚组。OsLEA5 c与5 C亚组LEA蛋白的氨基酸一致性为45.14％～61.59％。利用基因重组技术构建的原核表达载体 pET32a Os-LEA5c,转化到E．coli BL21 pLysS菌株中,诱导得到34 kD的融合蛋白。OsLEA5c在大肠杆菌中的表达增加了大肠杆菌对高温、高盐、高渗透压和反复冻融的抗性。OsLEA5c 基因在水稻抗逆和种子成熟脱水过程中发挥重要作用。     

辣椒CaCOI1 基因的克隆、表达及其序列分析

 利用RT-PCR技术从辣椒中克隆到基因CaCOI1,该基因编码的蛋白质由603个氨基酸残基组成,蛋白质的分子量为68.35 kD,等电点是6.32。在蛋白质N–端有1个F-box结构域,C–端有6个富含亮氨酸结构域。二级结构分析表明,CaCOI1蛋白分子中,α–螺旋、β–折叠、β–转角和不规则卷曲分别为51.41%、13.76%、5.80%和29.03%。CaCOI1蛋白的平均亲水系数为–0.143,为亲水蛋白。蛋白质序列比对和进化树分析表明,CaCOI1与番茄LeCOI1蛋白的一致性最高（94%）,进化距离最近。实时定量RT-PCR分析表明,CaCOI1在辣椒的根、茎、幼叶、成熟叶、花、青熟期果实、成熟红果等不同生长发育时期的组织中都能表达,在花中表达水平最高,是其他组织的2.8 ~ 5.4倍,表明CaCOI1在花的发育过程中起重要作用。     

盐胁迫对水稻萌芽中酶活性的影响

为了观测种子在萌芽过程中酶的动态变化规律,对水稻种子萌芽过程中在5个NaCl浓度(0、50、100、150、200 mmol/L)胁迫下的发芽率、淀粉酶、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和硝酸还原酶活性的变化进行测定.结果表明:在萌芽过程中随着盐胁迫程度加重,水稻种子发芽率、淀粉酶、SOD、CAT和硝酸还原酶活性均呈下降趋势.NaC1 150、200 mmlo/L处理的发芽率极显著低于空白对照,变幅在39％～100％;NaC1 100、200 mmol/L淀粉酶活性显著低于对照,NaC1 100 mmol/L处理的降幅在4.34％～49.13％,NaC1 200 mmol/L处理的变化幅度在-89.35％～119.73％;NaC1 100 mmol/L处理SOD活性显著下降,降幅在7.5％～50.19％,NaC1 50、100 mmol/L处理CAT活性降低显著,NaC1 150、200 mmol/L处理差异极显著,变幅在1.76％～50.61％之间;4个盐胁迫处理的硝酸还原酶活性下降不明显.     

番茄果实外观性状的遗传和分子调控研究进展

番茄是一种重要的果蔬植物,属于茄属果实作物,番茄果实外观和质量等重要特征不断得到驯化和改良.与野生型近亲比较,栽培番茄的果实大,呈现一系列不同的形状,果色除了有野生型的红色外,还有绿色、浅黄色、紫色等一系列不同的颜色.就番茄驯化和品种改良过程中番茄果实重量、形状、色彩和成熟等关键性状的选择、遗传和分子调控进行了分析.     

水稻OsLEA19a基因在大肠杆菌中的表达和抗逆性分析

根据胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA19a的读码框序列设计引物,PCR扩增目的基因后,利用基因重组技术成功构建原核表达载体pET30a-OsLEA19a,并将重组质粒转化到E.coli BL21中。优化诱导OsLEA19a表达的条件,使目的蛋白可在E.coli BL21中高效表达。OsLEA19a融合蛋白的SDS-PAGE电泳分析表明,诱导蛋白表达的最适条件是37℃、4 h,融合蛋白的大小大约为30 kDa。抗逆性分析表明,OsLEA19a的表达能增强大肠杆菌对高盐、高渗透压、高温和低温等非生物胁迫的抗性。     

番茄脂肪氧化酶D基因的克隆分析和植物表达载体的构建

利用RT-PCR方法从番茄中克隆了TomloxD的cDNA。采用生物信息学,ChloroP,SMART方法对TomloxD分析与研究,结果表明,TomloxD基因编码是一个由908个氨基酸残基组成的蛋白,蛋白分子量为102.31 kD。在蛋白的N-端有77个氨基酸组成的叶绿体信号肽。TomloxD是一种植物脂肪氧化酶,具有两个保守结构域:在靠近N-端区域有PLAT/LH2结构域,在C-端有pfam:lipoxygenase结构域。TomloxD蛋白与大豆LOX3蛋白三维结构高度重叠。TomloxD与来自马铃薯、烟草、油橄榄、拟南芥和玉米的脂肪氧化酶的一致性分别为96%、90%、82%、72%和67%。系统进化关系分析表明TomloxD与来源于双子叶植物的脂肪氧化酶蛋白的亲缘关系更近,而与单子叶植物的相对较远。构建植物高效表达载体TomloxD-pBIN19,并导入根癌农杆菌LBA4404中,得到植物转化工程菌,这为下一步用于番茄等作物的转基因操作,进一步研究TomloxD基因的功能,获得高抗逆性的转基因作物奠定了基础。     

高等植物的胚胎发育后期丰富蛋白研究进展

植物的胚胎发育后期丰富蛋白(LEA)是在植物胚胎发育后期种子中大量积累的一系列蛋白质。LEA蛋白存在于细胞质和细胞核中,具有很高的亲水性和热稳定性,即使在煮沸条件下也能保持水溶状态,能保护细胞免受环境胁迫,特别是干旱脱水的损伤。根据氨基酸序列的同源性及一些特殊的基元序列,LEA蛋白可分为6组。LEA基因的表达受发育阶段、激素、离子变化、脱水等多种因素的诱导,没有组织特异性。LEA基因表达调控的研究是目前植物分子生物学研究的热点之一。     

番茄转录因子基因SlYAB2a的克隆、表达及亚细胞定位分析

为了研究番茄SlYAB2a基因的功能及其在番茄生长发育中的分子机理,以番茄的cDNA为模板,利用RTPCR技术从番茄中克隆到SlYAB2a基因,该基因编码的蛋白质由192个氨基酸残基组成,蛋白质的分子量为21.35k Da,等电点是8.79,平均亲水系数是-0.487。SlYAB2a蛋白质的6~165位氨基酸残基形成Pfam:YABBY结构域,在20~47位有1个C2C2锌指结构域,在122~181位有1个螺旋-环-螺旋结构域。二级结构分析表明SlYAB2a蛋白分子中,α-螺旋占19.79%、β-折叠占14.06%、其余66.15%为不规则卷曲。蛋白多序列比对表明SlYAB2a与马铃薯、林烟草、酿酒葡萄、大豆、拟南芥、甘蓝型油菜、花药野生稻、玉米和小麦YABBY2的一致性分别为98%,78%,71%,65%,64%,64%,58%,57%,57%,说明SlYAB2a蛋白与来源于双子叶植物的YABBY2一致性较高,而与来源于单子叶植物的一致性较低。通过聚类分析发现YABBY2蛋白明显分为单子叶和双子叶2个亚类,SlYAB2a蛋白属于双子叶亚类,与马铃薯、潘那利番茄、绒毛状烟草、林烟草等的YABBY2蛋白序列亲缘关系较近。实时定量RT-PCR分析结果表明,在番茄植物的不同生长发育时期,根、茎、叶、花、果实中,都有SlYAB2a基因表达;并且在花和青熟果实中,SlYAB2a基因表达水平远远高于其他组织。说明SlYAB2a基因在花和果实的发育过程中起着重要作用。洋葱表皮细胞瞬时表达结果表明SlYAB2a蛋白定位于细胞核中。     

家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)对三峡库区菜青虫(Pieris rapae)的感染性研究

本试验用不同浓度的家蚕微孢子虫感染三峡库区菜青虫,结果表明:家蚕微孢子虫对菜青虫感染性较强,致死率高,其致死中量(ID50)为:1.5×104个/m l。当微孢子虫浓度为1.0×107个/m l时,菜青虫死亡率高达87.8%,校正死亡率也高达86.4%,体现了家蚕微孢子虫对菜青虫的显著致病能力,由此探索了家蚕微孢子虫作为生物农药的可行性。     

水稻OsLEA19a基因的克隆、表达及生物信息学分析

半定量RT-PCR分析表明,水稻胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA19a在水稻幼苗中的表达受干旱和高盐的诱导,说明OsLEA19a可能在水稻抗旱和抗盐中发挥作用.利用RT-PCR方法成功从水稻中克隆了OsLEA19a的cDNA.生物信息学分析表明,OsLEA19a基因编码一个由200个氨基酸残基组成的蛋白,蛋白分子量为...