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[目的]研究植物病毒表达载体pC1YVV/CP/W的构建及用pC1YVV/CP/W表达绿色荧光蛋白(GFP),为植物反应器生产有用蛋白、开发有效的植物病毒载体提供参考。[方法]用三叶草黄脉病毒侵染性全长cDNA克隆pC1YVV基因组的Mb/CP基因之间的一段多克隆位点和两侧含有病毒蛋白酶NIa切割识别序列的多聚脱氧核糖核苷酸接头,构建pC1YVV/CP/W载体,并将绿色荧光蛋白基因插入pC1YVV/CP/W中构建pC1YVV/CP/W/GFP载体,用反转录PCR对重组病毒克隆转录情况进行检测,并用Western杂交对重组病毒克隆表达的目的基因产物进行测定。[结果]pC1YVV/CP/W/GFP接种的蚕豆幼苗表现出与野生型C1YVV相同的症状,发病率达100%,表明重组病毒克隆pClYVV/CP/W/GFP有侵染性,外源基因的插入没有破坏载体pClYVV/CP/W的开放阅读框;外源基因在F_4子代病毒基因组中稳定存在;重组病毒克隆pC1YVV/CP/W/GFP至少到F_4子代病毒能稳定表达GFP。[结论]该研究结果为用植物表达有用蛋白提供了有用的植物病毒载体。 相似文献
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[目的]研究了植物病毒表达载体pCIYVV/CP/W的构建及用pClYVV/CP/W表达绿色荧光蛋白(GFP),为植物反应器生产有用蛋白、开发有效的植物病毒载体提供参考。[方法]用三叶草黄脉病毒侵染性全长cDNA克隆pCIYVV基因组的NIb/CP基因之间的一段多克隆位点和两侧含有病毒蛋白酶NIa切割识别序列的多聚脱氧核糖核苷酸接头,构建pCIYVV/CP/W载体,并将绿色荧光蛋白基因插入pCIYVV/CP/W中构建pCIYVV/CP/W/GFP载体,用反转录PCR对重组病毒克隆转录情况进行检测,并用Western杂交对重组病毒克隆表达的目的基因产物进行测定。[结果]pCIYVV/CP/W/GFP接种的蚕豆幼苗表现出与野生型CIYVV相同的症状,发病率达100%,表明重组病毒克隆pCIYVV/CP/W/GFP.有侵染性,外源基因的插入没有破坏载体pCIYVV/CP/W的开放阅读框;以感染叶总RNA为模板,对pCIYVV/CP/W/GFP表达GFP外源基因的稳定性进行了检测,从F0(重组病毒质粒最初转录出的病毒)一直检测到Fd子代病毒。检测结果表明,外源基因在L子代病毒基因组中稳定存在;以从感染叶中提取的总蛋白为抗原,以GFP抗体为第1抗体,以碱性磷酸酶标记抗体为第2抗体,用Western杂交对重组病毒克隆pCVYVV/CP/W/GFP表达外源蛋白进行了定性检测。从F0一直检测到F4子代病毒。检测结果表明,重组病毒克隆pCIYVV/CP/W/GFP至少到F4子代病毒能稳定表达GFP。 相似文献
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畜牧总站事业单位人事制度改革首次岗位聘用工作已基本结束,这次改革关系总站长远的发展和职工的切身利益。本文介绍了畜牧总站事业单位人事制度改革的准备、开展全过程,重点谈了首次岗位聘用工作中的一些做法,供大家讨论和借鉴。 相似文献
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试验 3试验 3进行于 2 1~ 4 2日龄 ,所设的处理与前两个试验相似 :采用一种NRC日粮饲喂试验全期 ;另设三种日粮用于阶段饲喂处理 ,分别饲喂于 2 1~ 2 8日龄、2 8~ 35和 35~ 4 2日龄。为了更精确地测定氨基酸需要量 ,试验 3另外增设了两个系列日粮 :一个是 1 0 %日粮系列 ,其与上述阶段饲喂日粮系列相同 ,但将赖氨酸、蛋氨酸、胱氨酸和苏氨酸的最低量减低了 1 0 %。增设的另一个日粮处理系列为 1 5 %日粮系列 ,该系列用于 2 1~ 2 8日龄期间的日粮相同于上述阶段饲喂处理中同一日龄期间的日粮 ,而其后两个时期的日粮 (用于 2 8~ 35日… 相似文献
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前言
近年来,许多猪场为了提高母猪的生产率(增加每头母猪的年产仔数)、改善母猪断奶时的体况以及改善改善断奶仔猪的性能(减少仔猪接触母猪病原体的机会),实行了仔猪21日龄断奶的做法.然而,如此早期进行断奶,仔猪的营养和管理都很成问题,因为这时它们的消化系统和免疫系统都还没有成熟.…… 相似文献
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