甘蓝型油菜oleosin基因片段的克隆及序列分析

以油菜（Brassica napus）基因组DNA为模板，通过设计一对特异性引物，利用多聚酶链式反应（PCR）扩增获得oleosin基因片段。将其克隆到E.coli质粒上进行序列分析。结果表明，该基因由878个碱基组成，含一个内含子，编码193个氨基酸。不计附加的18 bp凝血酶切割序列,与已报道的序列相比较，核苷酸序列及推导出的氨基酸序列的同源性分别为79.20%和91.21%。推测的氨基酸序列构成的蛋白质具有oleosin的基本结构特点，包含3个结构区域：两性N末端区（an amphipathic N-terminal region），中心疏水区（a central hydrophobic domain），两性C-末端区（an amphipathic C-terminal domain）。     

甘蓝型油菜oleosin基因片段的克隆及序列分析

以油菜(Brassica napus)基因组DNA为模板,通过设计一对特异性引物,利用多聚酶链式反应(PCR)扩增获得oleosin基因片段。将其克隆到E.coli质粒上进行序列分析。结果表明,该基因由878个碱基组成,含一个内含子,编码193个氨基酸。不计附加的18bp凝血酶切割序列,与已报道的序列相比较,核苷酸序列及推导出的氨基酸序列的同源性分别为79.20%和91.21%。推测的氨基酸序列构成的蛋白质具有oleosin的基本结构特点,包含3个结构区域:两性N末端区(anamphipathicN-terminalre鄄gion),中心疏水区(acentralhydrophobicdomain),两性C-末端区(anamphipathicC-terminaldomain)。     

桑白皮的鉴别及蜜炙炮制对其主要成分桑根酮C含量的影响

研究桑白皮的各种理化鉴别方法,蜜炙炮制后分离和精制有效成分桑根酮C,并分析蜜炙炮制对其的影响。方法:对桑白皮性状、显微结构、主要的化学成分进行鉴别,采用传统工艺和干燥箱蜜炙炮制法分别炮制桑白皮,利用桑白皮的特性分离并纯化桑根酮C,用红外光谱和紫外光谱分析有效成分的组成。结论:鉴别结果证明实验用桑白皮为正品桑白皮,干燥箱蜜炙炮制法优于传统工艺法,通过分析光谱,纯化后药物中含有葡萄糖,蜜炙炮制对有效成分桑根酮C没有影响。     

SARS病毒S蛋白S1和S2片段的合成及在大肠杆菌中的表达

[目的]通过拼接完成对SARS S蛋白的上下游序列S1和S2的合成,并在大肠杆菌中表达,获得具活性的S1和S2蛋白。[方法]利用不对称PCR方法以及采用设计酶切位点将2个片段连接的方法合成SARS香港株S蛋白上下游2个片段S1和S2;构建S1和S2这2个基因片段的原核表达载体,pET28a-S1和pET28a-S2,并转化BL21表达菌株,然后用IPTG诱导目的基因的表达并提取纯化目的蛋白。[结果]连接得到S1和S2这2个基因片段,并成功地在大肠杆菌中得到表达。[结论]该研究为后续SARS疫苗研究提供检测抗原奠定了基础。     

高温催青中湿度和时间对家蚕性别控制的调查

<正> 1 材料与方法 1.1 蚕品种 夏芳×sch,使用即时浸酸种。在解剖鉴定胚子前,先刮除不良卵和死卵,保护于25℃,80％RH环境下。夏芳原种由重庆市蚕研所提供,赤蚁原种由鲁成老师提供,夏芳×sch杂交种由陈萍老师提供。 1.2 催青处理条件 利用自动控制日光培养箱(ZRO510型)控制各气象条件,以25℃、80％RH作对照催     

从桑白皮中提取药物成分桑根酮C及质量分析

桑白皮具有降血压、利尿利泻、杀菌消炎、止咳、抗浮肿、镇静抗惊厥的作用,中医主治肺热喘咳吐血、水肿、脚气,小便不利、糖尿病、传染性肝炎、产后出血不止,具有很好的药用价值。桑根酮C具有明显的降血压作用。通过提取桑白皮中的有效成分桑根酮C,对提取出来的浸膏得率为10.6%,先后用丙酮,苯,乙醚萃取,得率分别为:62.7%、45%、20%。然后将乙醚萃取后的初产品过聚酰胺层析柱,得到比较纯的桑根酮C的初产品,将桑根酮C粉末与FeCl3,乙醇溶液反应显紫红色,测得桑根酮C的红外吸收光谱图,显示有羟基(3369cm-1),共轭羰基(1629cm-1),环氧键(1261cm-1,796.5cm-1),双键(1680～1620cm-1)等特征吸收峰。测得桑根酮C的紫外吸收光谱图显示在220nm,230nm,280nm,310nm有最大吸收,说明有共轭体系,其中283～288nm的紫外吸收验证分子中有共轭羰基,分子中有苯环。测得的官能团结构与桑根酮C的结构式基本一致。     

SARS病毒S2蛋白基因重组腺病毒的构建与分析

编码SARS冠状病毒S蛋白(Spike protein)的C端序列S2较为保守,可作为SARS病毒疫苗研究的候选抗原基因.该研究拟构建基于SARS病毒S2蛋白的重组腺病毒疫苗并对其进行免疫学初步分析.首先通过非对称PCR方法,将人工合成的S2蛋白基因的两个片段f3和f4进行拼接得到完整的S2片段,利用Ad5腺病毒系统构建S2蛋白基因的重组腺病毒并在AD293细胞中包装成病毒颗粒,采用间接免疫荧光和蛋白免疫印迹法对S2蛋白基因的表达进行鉴定,然后用此重组腺病毒免疫小鼠对其抗体生长情况进行分析.免疫荧光和蛋白印迹分析结果显示,携带SARS病毒S2蛋白基因的重组腺病毒rAd-S2能在细胞中成功表达,表达的S2蛋白能被马抗SARS血清所识别.ELISA分析结果表明,用表达SARS病毒S2蛋白的重组腺病毒rAd-S2免疫小鼠,能有效刺激小鼠机体产生抗体,重组腺病毒免疫小鼠后所产生的抗体水平最高能达到104以上.可见通过对SARS病毒S2蛋白基因重组腺病毒的成功构建与免疫学初步分析,能为SARS疫苗研究奠定基础.     

松茸0288的人工培养及鉴定

以菌丝的生长速度为指标,筛选松茸0288的人工培养最佳培养基,采用食用菌的CTAB法提取出松茸的DNA,分析其核糖体ITS序列,对人工培养获得的松茸子实体与天然松茸子实体进行同源性鉴定.结果表明:松茸0288菌丝体在培养基A[葡萄糖10 g、琼脂10 g、马铃薯(去皮)100 g、酒石酸铵0.75 g、磷酸二氢钾(KH2 PO4)0.5 g、硫酸镁( MgSO4)0.25 g、蛋白胨1.5 g]中生长速度最快,平均菌丝生长量可达0.575 mm/d,菌丝经人工驯化获得子实体;经核糖体ITS序列分析,人工培养获得的子实体与天然松茸子实体的ITS序列具有高度同源性,其同源性达99％.     

不同产地连翘中连翘苷含量差异比较

[目的]对不同产地连翘中的主成分连翘苷的含量进行比较。[方法]用薄层色谱法对连翘中主成分进行定性分析并用高效液相色谱法对不同产地的连翘中连翘苷含量进行测定。[结果]从连翘中分离得到一种化合物,经鉴定为连翘苷,并测定到来自山西的连翘中连翘苷含量接近河南的2倍,来自云南的连翘中连翘苷含量略低于河南,说明不同产地的连翘中连翘苷含量有明显的差别。其主要原因是由于连翘生产地生态环境的影响以及栽培管理措施的不同。[结论]试验结果对扩大连翘产区,保证连翘的质量和提高连翘临床应用等有着重要的意义。