利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联技术构建产肠毒素大肠杆菌LT敲除菌株

本研究旨在利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联的技术对产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）K88的热不稳定性肠毒素（heat-labile toxin，LT）基因进行无痕敲除并获得K88 LT^-缺陷菌株。通过序列比对获取LT两端同源序列，并构建包含LT边界、氯霉素筛选标记、sgRNA和LT同源臂的供体片段；将供体片段转化至ETEC K88，同时分别利用λ-Red同源重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统，对LT基因进行敲除；通过PCR验证获得了K88 LT^-缺陷菌株，并通过试验测定了敲除菌株的溶血能力和生长曲线。结果显示，λ-Red同源重组系统可成功地将LT基因替换为相应的供体片段，CRISPR/Cas9基因编辑系统可高效地对筛选标记进行删除，最终通过λ-Red和CRISPR/Cas9结合的基因编辑系统可成功对ETEC K88的LT基因进行无痕敲除。体外试验结果表明，K88 LT^-缺陷菌株的溶血能力丧失，并且生长速度比野生型菌株减缓，LT可能和ETEC K88的致病能力和生长性能有关。表明λ-Red和CRISPR/Cas9级联的基因敲除方法可用于LT毒素基因及其他一些大肠杆菌基因的敲除。K88 LT^-缺陷菌株的构建为下一步研究LT毒素的致病机制奠定基础。     

石榴果实的糖酸组成及风味特点

采用高效液相色谱法测定4种石榴成熟期果实中糖和酸的组成,并对其味感值和糖酸组分与果实风味指标间的相关性进行分析。结果表明,石榴果实中可溶性糖组分有蔗糖、葡萄糖、果糖和山梨醇,其中葡萄糖和果糖含量最高,分别占总糖含量的43.84%~48.36%和49.18%~50.67%。4个品种中,"玉石籽"的总糖含量最高,"白皮"的最低。石榴果实中主要有机酸是奎宁酸、琥珀酸、草酸、L-苹果酸、莽草酸、柠檬酸和D-苹果酸,其中"玛瑙籽"的总酸含量最高,"青皮"的最低。石榴果实中果糖的味感值最大、其次是葡萄糖;味感值最大的酸是奎宁酸,其次为柠檬酸。相关性分析结果表明,石榴果实的糖酸比与甜味/酸味比值之间呈极显著正相关,各品种间糖酸比(甜味/酸味比值)的差异主要取决于有机酸的含量,与糖含量无关。综合其风味特点,"青皮"和"玉石籽"是甜味较浓的品种,"白皮"和"玛瑙籽"则是酸味较浓的品种。     

餐厨废弃物饲料化技术及其在动物生产中的应用

餐厨废弃物(food waste,FW)的资源利用受到广泛关注。FW焚化、填埋、堆肥、厌氧消化等技术因其面临的环境可持续性问题而受到越来越多的批评。饲料化技术可以将FW转化为高价值的饲料,从而减少固体废物的排放、养殖成本和环境污染,但该技术应符合减少、再利用和回收有机废物的处理原则。作者综述了FW的饲料化技术及其在动物生产中的应用。FW饲料化技术主要包括热处理、酶处理、藻类培养、昆虫过腹、发酵技术。其中热处理可以确保微生物安全性,是其他技术的预处理技术。藻类培养和昆虫过腹技术可以将FW转化为植物和昆虫蛋白,避免同源污染,但尚不清楚藻类和昆虫在FW利用过程中是否会造成污染物积累。酶处理和发酵技术可以将FW中大分子转化为小分子。酶的催化性能和稳定性容易受外界条件的影响,需要考虑特殊的酶制剂。发酵技术的机械化程度和资源利用率高,其核心是微生物,需要筛选有效的、能充分利用FW的微生物。目前FW在畜牧业中的应用较少,在其生产和应用中要特别注意用量和使用时间。为了使FW饲料真正作为动物饲料进入食物链,研究人员必须对不同动物(含不同生长阶段)的生长性能和产品特性进行研究,以确保动物健康及动物产品对人类健康没有负面影响。     

康宁木霉固态发酵改善茶渣营养价值

本试验旨在研究康宁木霉固态发酵茶渣,提高茶渣营养价值,并筛选出最佳的发酵条件。用单因素试验优化发酵茶渣的基质比例（茶渣∶玉米粉=6∶4、7∶3、8∶2、9∶1）、料液比（3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3）、接种量（2%、4%、6%、8%、10%）、发酵温度（25、28、31、34、37 ℃）和发酵时间（0、2、4、6、8、10、14、22 d）。以基质比例、发酵温度、接种量和发酵时间为影响因素,进行L9（3⁴）正交试验确定茶渣最优发酵条件。测定各组发酵产物粗蛋白质、粗脂肪、还原糖、黄酮、皂苷和咖啡因含量,计算各组合的综合评分。确定最优条件后进行对比试验,比较了发酵前后茶渣的营养成分、活性物质和游离氨基酸含量。结果表明：1）单因素试验中,以下条件的综合评分最高：基质比例为7∶3,料液比为5∶5,接种量为8%,发酵温度为31 ℃,发酵时间为6 d。2）正交试验表明,康宁木霉发酵茶渣（料液比为5∶5）的最佳条件是：基质比例为7.0∶2.5,发酵温度为31 ℃,接种量为7%,发酵时间为6或7 d。3）与未发酵茶渣相比,最优条件下发酵茶渣的粗蛋白质、还原糖、黄酮、咖啡因、多种游离氨基酸含量和必需氨基酸/总氨基酸、风味氨基酸/总氨基酸均显著提高（P<0.05）,皂苷含量显著降低（P<0.001）,粗脂肪含量与未发酵茶渣无显著差异（P>0.05）。发酵6和7 d的茶渣营养成分和活性物质含量无显著差异（P>0.05）。由此可见,康宁木霉发酵茶渣能够改善茶渣的营养价值。     

肌肉糖原代谢调控对猪肉品质的影响

肌肉糖原酵解潜能对肌肉品质有比较重要的影响,国内外学者对此做了大量的研究工作,本文从糖酵解潜能与肌肉品质的关系、影响糖原代谢的因素及通过糖酵解途径提高肌肉品质等方面进行综述,为探讨糖原代谢规律及未来实现优质风味猪肉的选育与营养调控提供重要理论依据。同时也为人类运动生理学及糖原代谢相关疾病的理论研究具有借鉴意义。     

普通百里香的组织培养和快速繁殖

试验建立了一种普通百里香的快速繁殖方法.以带腋芽的茎段为外植体,比较了不同浓度的IAA和6-BA组合对不定芽的诱导和增殖的效果,以及不同浓度的IBA和多效唑组合对枝条生根的影响.结果表明.不定芽的增殖和诱导以MS+IAA 0.25 mg·L-1+6-BA 0.25 mg·L-1为宜,生根以1/2MS+IBA0.50mg·L-1+PP333 0.75 mg·L-1为宜.     

糠麸营养价值及其发酵饲料在动物生产中的应用

中国的谷物糠麸产量巨大,但未被充分利用,附加值低。小麦麸的粗蛋白质(CP)、粗纤维(CF)含量较高,吸水性较强,易霉变,易被呕吐毒素污染。米糠CP、粗脂肪(EE)含量较高,但易发生酸败。黑麦麸、燕麦麸、高粱糠的CP含量较高,而玉米皮CP、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)含量较高。糠麸矿物质丰富,还含有多种活性物质。而微生物发酵能够分解有害物质,增加食品、饲料中活性成分。通过微生物发酵能降低糠麸抗营养因子含量,将无法利用、利用率低的成分分解为易消化的小分子物质,提高蛋白质含量及消化率。目前糠麸发酵使用的微生物主要为霉菌、酵母、乳酸菌、芽孢杆菌,少部分使用食用真菌。研究表明,发酵糠麸富含有益代谢产物,能够为动物提供良好的抗氧化剂、益生菌来源,在合理利用糠麸的同时减少抗生素使用。发酵利用糠麸饲料能够达到一物多用,既降低生产成本,又解决废物排放造成的环境污染问题。作者综述了糠麸的营养价值、发酵菌种、发酵前后变化及其发酵饲料在动物生产的应用,以期为发酵糠麸的应用提供一定依据。     

舍饲藏猪血浆生化指标、胴体性能及肉品质的分析

藏猪是重要的经济动物,其肉制品越来越受到消费者欢迎.本试验对舍饲藏猪的血浆生化指标、胴体性能及肉品质进行分析,以便为藏猪的规模化养殖提供理论依据.利用全自动生化仪分析舍饲藏猪血浆生化指标,利用行业标准描述其胴体性能及肉品质,利用常规方法测定其肌肉营养成分及脂肪酸组成.结果 表明:舍饲藏猪血浆生化指标、胴体性能及肉品质指标在正常范围内;舍饲藏猪背肌(鲜样)水分、干物质、粗蛋白质、肌内脂肪、灰分和有机物的含量分别为69.89％、30.11％、33.30％、5.20％、2.62％、40.65％;背肌(鲜样)含有9种饱和脂肪酸、5种单不饱和脂肪酸、7种多不饱和脂肪酸,共21种脂肪酸,主要脂肪酸是油酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸和棕榈油酸.     

柑橘提取物对肥育猪后肠食糜蛋白质代谢产物的影响

【目的】通过研究柑橘提取物对肥育猪后肠食糜蛋白质代谢产物的影响,旨在为柑橘提取物从源头调控臭气的产生提供依据。【方法】选取108头56日龄（19.73±0.39）kg杜×长×大猪,公母各半,随机分为3组,每组分6栏,每栏6头猪。对照组饲喂基础饲粮,抗生素组在基础饲粮中添加75 g/t金霉素,柑橘提取物组在基础饲粮中添加柑橘提取物（56~112日龄添加250 mL/t柑橘提取物,113~194日龄添加200 mL/t柑橘提取物）。194日龄时收集肥育猪盲肠和结肠食糜,测定食糜中游离氨基酸、酚和吲哚类物质、生物胺的含量。【结果】①在盲肠食糜中,与对照组相比,柑橘提取物组和抗生素组牛磺酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、吲哚和甲胺含量均显著降低（P＜0.05）。与对照组相比,柑橘提取物有降低苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、瓜氨酸、异亮氨酸、脯氨酸和粪臭素含量的趋势（0.05≤P＜0.10）,苯酚、腐胺、酪胺和精胺含量均显著降低（P＜0.05）。与抗生素组相比,柑橘提取物组腐胺和酪胺含量均显著减少（P＜0.05）。②在结肠食糜中,与对照组相比,柑橘提取物组和抗生素组天冬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸、胱硫醚、亮氨酸、γ-氨基丁酸、总氨基酸、苯酚、对甲酚、粪臭素和甲胺含量均显著降低（P＜0.05）,脯氨酸和吲哚含量均有降低的趋势（0.05≤P＜0.10）。柑橘提取物组丝氨酸、异亮氨酸、胱硫醚、亮氨酸、总氨基酸和对甲酚含量均显著低于抗生素组（P＜0.05）;与对照组相比,柑橘提取物组苏氨酸、谷氨酸、甘氨酸、鸟氨酸和酪胺含量均显著降低（P＜0.05）,亚精胺含量有降低的趋势（0.05≤P＜0.10）;与对照组和抗生素组相比,柑橘提取物组苯丙氨酸、色氨酸和赖氨酸含量均显著降低（P＜0.05）。【结论】柑橘提取物降低了肥育猪后肠食糜蛋白质代谢产物的含量,可减少臭气的产生。