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提高外源蛋白在特定目标组织器官中的表达量是转基因植物研究与开发的核心技术之一。谷蛋白是水稻种子中最主要的贮藏蛋白,其表达具有严格的时空特异性。为进一步研究谷蛋白信号肽序列在指导基因表达中的作用,本研究克隆了水稻谷蛋白Glu A-2基因的启动子及其信号肽编码序列,并与GUS报告基因编码区融合,构建了分别含有和不含有信号肽的表达载体p13GG和p13GSG;经农杆菌介导法分别转入同一水稻品种中,获得了20多个独立转化子,PCR证明外源基因都已整合进了水稻基因组中。Northern杂交结果表明,融合Glu A-2信号肽编码序列可显著提高GUS基因在水稻胚乳中的转录;利用GUS特异的抗体进行Western杂交分析,显示该信号肽序列可显著提高外源蛋白在转基因水稻胚乳中的积累,但是其所指导表达的GUS蛋白在水稻胚乳中并没有表现出相应的活性,其机制有待进一步深入解析。相关结果对于水稻品质改良基因工程研究以及以水稻种子作为生物反应器高效表达外源蛋白具有重要的指导作用。 相似文献
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1我国水稻生产现状水稻是世界上最重要的农作物,全球年种植面积约占谷物种植总面积的23%,年产稻米约占谷物总产量的29%,产量次于玉米、小麦。稻米是全球近一半人口(25亿以上)赖以生存的基本食粮。中国有60%的人口以稻米为主食,中国是世界上最大的稻米生产国和消费国,水稻播种面积3000万公顷,占世界的20%;产量1.85亿吨,占世界的近1/3,单位面积产量每公顷6.35t,比全球平均产量3.85t高65%。水稻在我国谷物产量中始终保持在总量的40%左右,占据了近半壁江山。 相似文献
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大豆品种的再生性能及对EHA 101农杆菌的敏感性 总被引:3,自引:0,他引:3
大豆转化可利用农杆菌和子叶节转化系统,bar基因作为选择标记,草丁膦作为选择试剂.用5-6 d发芽的种子的子叶节作外植体,在子叶节处划5-6下,用含pPTN 140的农杆菌EHA 101感染后,共培养3 d,用含抗生素的洗液洗去外植体上的农杆菌,将外植体放入5 mg/L草丁膦的长芽培养基,两周后统计不同大豆品种的再生率,4周后做GUS染色对含pPTN1 相似文献
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转Bar基因抗除草剂两系杂交早稻恢复系Bar 68-1的培育研究 总被引:9,自引:1,他引:8
通过基因枪转化方法将抗除草剂基因Bar转入早籼稻两系恢复系D68中,育成了转基因抗除草剂恢复系Bar 68-1和杂交早稻组合香125S/Bar 68-1;Southern杂交检测和除草剂抗性鉴定结果显示,它们具有抗除草剂特性并能稳定遗传。转基因抗除草剂杂交稻组合香125S/Bar 68-1和对照香两优68(香125S/D68)相比,株高显著降低,直链淀粉含量极显著降低,其它农艺、品质和产量性状没有明显变化。 相似文献
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研究饲喂用40%、100%高赖氨酸转基因水稻替代玉米配制的日粮对肉仔鸡生长及器官发育的影响。150羽1日龄AA鸡随机分成3组,对照组饲喂玉米-豆粕型基础日粮,Ⅰ、Ⅱ组分别用40%、100%转基因水稻替代玉米。结果表明,前期Ⅰ、Ⅱ组单位增重耗料显著降低,嗉囊、腺胃、肌胃、回肠指数显著提高,各免疫器官指数均极显著提高;后期两试验组胰脏指数显著降低,Ⅰ组小肠总长、胸腺、肾脏指数分别显著提高5.59%、31.25%和17.50%,Ⅱ组小肠总长、脾脏指数分别显著降低4.50%、38.46%,肾脏指数极显著提高57.50%,Ⅰ组后期腹脂沉积显著增加,其他器官无显著变化。说明以40%、100%高赖氨酸转基因水稻替代玉米能促进肉仔鸡早期消化及免疫器官的生长发育,显著降低后期胰脏指数,显著提高肾脏指数。 相似文献
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水稻异淀粉酶基因ISA1及其启动子的表达特性分析 总被引:1,自引:1,他引:0
利用实时定量RT-PCR方法研究了水稻异淀粉酶基因ISA1在各组织及不同发育阶段籽粒中的表达模式,结果表明该基因只在发育籽粒中表达。同时,克隆了ISA1基因起始密码子上游1.1 kb和2.1 kb两个不同长度的启动子片段,并分别与GUS报告基因融合,经农杆菌介导转入水稻中。对转基因水稻植株中GUS活性的定性与定量结果表明,2.1 kb的ISA1启动子具有很好的胚乳表达特异性,与内源基因定量表达分析的结果一致;而1.1 kb的ISA1启动子则不具备该表达特性,它在胚乳、茎、茎节及谷壳中都有很高的表达。这可能是因为 2.1 kb启动子中含有抑制目的基因在茎等组织或器官中表达的顺式作用元件。 相似文献
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共转化法获得无筛选标记的转PEPC、PPDK基因水稻恢复系纯合体 总被引:4,自引:1,他引:3
用根癌农杆菌共转化的方法将pSB130/CK质粒[目的基因磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(PEPC)、磷酸丙酮酸二激酶基因(PPDK)与筛选标记潮霉素抗性基因HPT分别构建于2个T-DNA区]导入水稻恢复系R299,经PCR、Southern检测,筛选到T0代13个转基因植株。对T1~T3代转基因后代进行PCR跟踪鉴定,分离出无潮霉素抗性基因的转基因植株(PEPC PPDK HPT-),分离株系比率为15%~21%,分离株系中PEPC PPDK HPT-型单株分离频率为7.2%~10.0%。在T3代成功获得了无筛选标记的转基因纯合系3个(06D351,06D352和06D353),PEPC酶活性和光合速率分析结果表明,其PEPC活性比对照提高了1.5~4.9倍,光合速率提高了19%~40%,说明这些转基因纯系材料在水稻高光效育种上具有很大的应用价值。 相似文献
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水稻胚乳RNA定量RT-PCR分析中参照基因选择 总被引:8,自引:0,他引:8
以6个籼粳稻品种胚乳总RNA为研究材料,检测包括eEF-la、eIF-4a、UBC、GAPDH、UBQ-5、TBL和ACTl在内的7个常用管家基因的表达稳定性情况,通过geNorm软件分析选择最佳参照基因.结果表明:不同的品种间,eEF-la和ACT1的表达最为稳定,UBC的表达变化最为明显.当利用多基因作为内参基因时,使用两个最稳定表达的管家基因即可达到准确校正的目的.该结果为水稻等植物中基因表达分析时内参基因的选择提供了参考. 相似文献
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随着全球的经济发展和人口膨胀,水资源短缺现象日趋严重,干旱已成为粮食生产的主要限制因素之一。C_4植物(如玉米)具有较高的光合速率以及较高的水分利用效率,利用转基因技术将C_4植物高光合及耐旱特征引入C_3作物(如水稻),被认为是解决水资源短缺与全球粮食需求不断增长矛盾的重要手段。本研究以转PEPC+PPDK双基因水稻及其非转基因对照为材料,通过PEG6000模拟干旱条件,研究干旱胁迫下叶片叶绿素含量、叶绿素荧光参数、C_4光合酶活性、叶片抗氧化酶活性等光合生理相关参数变化。结果表明:干旱胁迫下转PEPC+PPDK基因水稻叶绿素含量、C_4光合酶活性、抗氧化能力等均有提升;干旱胁迫对转PEPC+PPDK基因水稻PSⅡ的光化学活性抑制较小,对细胞的损伤相对更低,表明转基因水稻对光合机构的保护能力明显增强。 相似文献
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转基因稻谷对肉仔鸡生产性能、免疫器官和生化指标的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
试验研究了用高赖氨酸转基因水稻分别替代40%,100%玉米配制日粮对肉仔鸡生产性能、免疫器官和部分血液生化指标的影响。150只1日龄AA鸡随机分成3组,对照组饲喂玉米-豆粕型日粮,试验Ⅰ组、试验Ⅱ组日粮用转基因水稻分别替代40%,100%的玉米。结果表明:21日龄肉仔鸡体重和体增重,3组之间均未见显著差异(P>0.05),但单位增重耗料,两试验组显著低于对照组(P<0.05);前期,两试验组胸腺指数、脾脏指数、法氏囊指数与对照组相比差异显著(P<0.05),试验Ⅱ组除碱性磷酸酶(ALP)、总胆固醇(CHO)与其他两组存在显著差异(P<0.05)外,其他生化指标均无显著差异;后期,两试验组之间除葡萄糖(GLU)差异显著(P<0.05)外,其他各项生化指标均差异不显著(P>0.05)。说明高赖氨酸转基因水稻分别替代40%,100%玉米能提高肉仔鸡早期生长,且对肉仔鸡各阶段生产性能及血液指标基本无显著影响,从而确保了肉鸡生产性能的正常发挥。 相似文献