CRISPR/Cas9靶向敲除番茄SNAC4/9突变体的构建、鉴定及分析

NAC转录因子参与植物生长发育、果实色素积累、细胞壁形态形成和植株衰老等过程。为系统研究SNAC4(SlNAC48,基因ID:101247735)和SNAC9(SlNAC19,基因ID:101248665)在番茄成熟衰老进程中的精准功能,本试验设计SNAC4/9敲除靶点,通过重叠聚合酶链式反应（overlapping PCR）法构建单引导RNA(sgRNA)表达盒,采用金门分子克隆（golden gate）方法将单个或多个sgRNA表达盒组装至pYLCRISPR/Cas9载体。PCR和测序结果表明,SNAC4/9敲除载体构建成功,通过农杆菌转化法将编码Cas9蛋白和sgRNA的基因导入Micro-Tom番茄细胞,对阳性苗进行靶点和脱靶位点检测,结果表明番茄成功突变且未脱靶,通过鉴定T1代突变体进一步证明,CRISPR/Cas9基因编辑番茄的靶点在代际之间可以稳定遗传。与野生型相比,SNAC4/9敲除果实色素积累减少,成熟延迟,表明SNAC4/9在番茄果实成熟中发挥重要作用。本研究为进一步探究SNAC4/9调控番茄果实色素代谢和胞壁代谢机制提供了遗传材料和试验基础。     

重组葡萄球菌肠毒素SEQ的生物活性及其结构关系分析

采用原核表达系统表达、亲和纯化重组蛋白、Western-blot、MTT比色法及同源模建的方法,分析了新型葡萄球菌肠毒素SEQ的生物学活性及其与结构的关系,预测了发挥超抗原活性的功能位点.结果表明,表达纯化的可溶性重组GST-SEQ、His-SEQ蛋白表达量分别占菌体蛋白的20%和25%,且均具有良好的免疫原性以及诱导小鼠脾淋巴细胞分化增殖的能力,SEQ成熟肽中α-螺旋、β-折叠、无规则蜷曲分别约32,68,116 aa;SEQ毒素潜在的与MHCⅡVβ链结合的关键位点为H169、H207、D209,而与TCR的结合域位于α3-β8环区域.2种重组SEQ肠毒素均具有超抗原活性,这与其存在于细胞MHCⅡ Vβ链及TCR作用的结合域有关.     

杏鲍菇粗多糖的提取及其保湿性能研究

采用超声波法提取杏鲍菇(Pleurotus eryngii)粗多糖,通过单因素和正交试验确定提取的最佳条件为超声波功率70 W、时间40 min、料液比1∶40 (w/v),粗提物中的多糖量为71.2 mg/g;对杏鲍菇粗多糖保湿性能初步研究表明:1%杏鲍菇粗多糖在6 h内保湿性能优于5%甘油.     

提高菜子分离蛋白得率的研究

针对目前菜子分离蛋白生产得率偏低的现状,通过对等电点沉淀法和饱和硫酸铵法的研究和分析,探讨了提高菜子分离蛋白各组分蛋白得率及蛋白含量的途径.     

菜籽多酚级分-2的体外抗氧化作用及其机理

测定了菜籽多酚级分-2在化学模拟体系、小鼠线粒体、小鼠血清与肝匀浆中的抗氧化作用.结果表明: 在化学反应体系中, 菜籽多酚级分-2具有还原能力,能清除活性氧,抑制脂肪氧合酶的活性.在体外试验中,菜籽多酚级分-2能抑制线粒体膜的肿胀,增加小鼠血清抗活性氧能力,抑制小鼠肝线粒体与小鼠肝组织匀浆MDA(丙二醛)的生成.以上试验表明: 菜籽多酚级分-2在生物体内具有明显的抗氧化作用,高的还原能力与抑制生物体内氧化酶是菜籽多酚级分-2抗氧化的机理.     

碱性蛋白酶(alcalase)水解菜籽清蛋白的工艺优化

采用响应曲面法对碱性蛋白酶(alcalase)水解菜籽清蛋白工艺进行系统地研究。确定最佳水解条件如下：温度50℃、酶浓度0.38 AU/g、底物浓度4.87%。同时,葡聚糖凝胶(Sephadex G-25)柱层析显示水解物较原清蛋白分子量变小。氨基酸组成分析结果表明菜籽清蛋白水解物可作为一种营养丰富的食品添加剂加以广泛利用。     

油菜花粉谷蛋白酶解物的制备

以陈放1年的油菜蜂花粉为原料,对破壁脱脂后的花粉中各组分蛋白含量进行了研究,其中谷蛋白的含量约占总蛋白含量的55.7%,清蛋白为39.O%,球蛋白和醇蛋白只有3.2%和2.1%.以谷蛋白为原料,在单因素试验的基础上,利用响应面分析法对油菜花粉谷蛋白最佳酶解条件进行了研究.结果表明,Alcalase碱性蛋白酶水解油菜花粉谷蛋白的最佳水解条件为底物浓度6%,pH值9.0,水解温度60℃,酶底比1460U/g,水解时间2h,谷蛋白酶法改性后抗羟基自由基的活性能达到70.0%.     

植物抗病反应中的信号物质

植物在受到病原物侵染时 ,常表现出一系列的防卫反应 :活性氧的释放、防卫基因的表达、过敏反应（ＨｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅＲｅ ｓｐｏｎｓｅ，ＨＲ）和系统获得抗性（ＳｙｓｔｅｍｉｃＡｃ ｑｕｉｒｅｄＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＳＡＲ）等。许多研究表明 ,这些反应是由于在植物体受病原菌侵染后 ,体内产生一些信号物质 ,这些物质能够诱发以上反应的产生。早在６０年代 ,Ｒｏｓｓ就假设植物体内存在一种能诱发ＳＡＲ的系统性信号。８０年代 ,Ｄｅａｎ和Ｋｕｅ进一步证实了这个假设。近年来对植物抗病反应中信号物质的研究主要集中在一氧…     

新疆两种粉虱的酯酶和过氧化物酶同工酶的比较研究

应用电泳分析方法 ,对乌鲁木齐地区所发生的温室白粉虱和烟粉虱进行了酯酶同工酶、过氧化物同工酶的比较研究。结果表明 :两种粉虱的酶谱有明显的种间差异。温室白粉虱的酯酶酶谱可分 2组区带 ;过氧化物酶酶谱可分 5组区带。烟粉虱的酯酶酶谱可分 5组区带 ;过氧化物酶酶谱可分 4组区带     

油菜花粉谷蛋白酶解物的制备(英)

以陈放1年的油菜蜂花粉为原料，对破壁脱脂后的花粉中各组分蛋白含量进行了研究，其中谷蛋白的含量约占总蛋白含量的55.7％，清蛋白为39.0％，球蛋白和醇蛋白只有3.2％和2.1％。以谷蛋白为原料，在单因素试验的基础上，利用响应面分析法对油菜花粉谷蛋白最佳酶解条件进行了研究。结果表明，Alcalase碱性蛋白酶水解油菜花粉谷蛋白的最佳水解条件为底物浓度6%，pH值9.0，水解温度60℃，酶底比1460 U/g，水解时间2 h，谷蛋白酶法改性后抗羟基自由基的活性能达到70.0%。