印记基因SNRPN、NDN和UBE3A在初生仔猪及胎盘中的表达谱分析

[目的]分析印记基因SNRPN、NDN和UBE3A在初生仔猪中的表达情况,从而探讨它们和猪生长发育的关系。[方法]采用荧光定量PCR方法,检测SNRPN、NDN、UBE3A基因在出生3 d仔猪的13种组织(心、肝、脾、肺、肾、肌肉、大脑、垂体、小肠、胃、膀胱、脂肪、下丘脑)及不同时期的胎盘中的表达水平。[结果]SNRPN、NDN、UBE3A基因在13种组织中都有表达,SNRPN和NDN基因在下丘脑中表达量极显著(P<0.01)高于其他被测组织,UBE3A基因在肺、小肠和下丘脑中的表达量显著(P<0.05)高于其他被测组织,SNRPN基因在下丘脑中的表达量极显著(P<0.01)高于NDN、UBE3A基因,在梅山猪和杜洛克猪不同时期胎盘中稳定表达。[结论]SNRPN、NDN和UBE3A基因都在下丘脑中高表达,对神经系统的生长发育有重要的影响;同时该研究为这3种基因在猪中的功能研究提供了基础。     

不同添加物和密度对杂交狼尾草青贮效果的影响

本研究采用四因素三水平正交设计试验,探讨了玉米粉(A) (0、3%、6%)、尿素(B) (0、0.3%、0.6%)、乳酸菌(C) (0、5、10 g·t?1)、密度(D) (700、800、900 kg·m?3)对高水分杂交狼尾草(Pennisetum americanum × P. purpureum)青贮品质及营养价值的影响,筛选出最佳的青贮密度以及玉米粉、乳酸菌和尿素添加量,以提高杂交狼尾草的青贮品质。结果显示：1) 6个处理组感官评定综合评分9～15分,等级为二级以上。2)随着玉米粉剂量的增加,极显著地提高了青贮料粗蛋白(crude protein, CP)含量和相对饲用价值(relative feeding value, RFV) (P < 0.01),极显著地降低了中性洗涤纤维(neutral detergent fiber, NDF)、酸性洗涤纤维(acid detergent fiber, ADF)、粗灰分(crude ash, Ash)含量、pH以及氨态氮的水平(P < 0.01)。3)尿素极显著地提高了青贮料中CP含量与RFV (P < 0.01),显著地降低了NDF和ADF含量(P < 0.05),当尿素的添加量为0.6%时,CP含量提高了7.05%,NDF和ADF含量分别降低了1.38%和1.45%。4)当乳酸菌剂添加量和青贮密度分别为5 g·t?1和700 kg·m?3时,RFV最高,NDF含量最低,干物质(dry matter, DM)含量介于其他处理之间。上述结果表明,3种添加物均能显著改善杂交狼尾草青贮发酵效果,其主次影响顺序分别为玉米粉 > 尿素 > 乳酸菌剂,且密度为700 kg·m?3时效果最好。最优配比为6%的玉米粉、0.6%的尿素、5 g·t?1的乳酸菌、700 kg·m?3的密度。     

不同添加物和密度对杂交狼尾草青贮效果的影响

本研究采用四因素三水平正交设计试验,探讨了玉米粉(A)?(0、3％、6％)、尿素(B)?(0、0.3％、0.6％)、乳酸菌(C)?(0、5、10?g·t?1)、密度(D)?(700、800、900?kg·m?3)对高水分杂交狼尾草(Pennisetum americanum?×?P.purpureum)青贮品质及营养价值的影响,筛选出最佳的青贮密度以及玉米粉、乳酸菌和尿素添加量,以提高杂交狼尾草的青贮品质.结果显示:1)?6个处理组感官评定综合评分9～15分,等级为二级以上.2)随着玉米粉剂量的增加,极显著地提高了青贮料粗蛋白(crude?protein,?CP)含量和相对饲用价值(relative?feeding?value,?RFV)?(P??尿素?>?乳酸菌剂,且密度为700?kg·m?3时效果最好.最优配比为6％的玉米粉、0.6％的尿素、5?g·t?1的乳酸菌、700?kg·m?3的密度.     

DNA标记与动物杂种优势的关系研究进展

传统的杂种优势预测方法和杂种优势理论的缺陷限制了杂种优势的进一步利用。分子标记为杂种优势的预测和理论发展开辟了新领域。本文论述了分子标记的种类和影响分子标记预测杂种优势的因素及其在动物杂种优势研究中的应用。     

猪COPG2和MEST克隆、印记状况和组织表达分析

【目的】为了在猪中找到更多新的候选印记基因并分析它们在哺乳动物之间的保守性,以期为猪分子遗传育种提供基础分子生物学信息和分子标记。【方法】以长白与荣昌猪杂交F1 代一月龄个体为研究对象,通过比较生物学的方法,克隆COPG2和MEST全长cDNA,并分析基因的序列特点,然后利用 IMpRH(法国农业科学院的辐射杂种克隆板)分析COPG2和MEST在猪染色体上定位信息。通过RT-PCR产物直接测序方法分析了这些基因在一月龄F1代个体11个不同组织(心、胃、肌肉、肾脏、肺、肝、小肠、膀胱、舌头、脾和脂肪)的印记状况,并进一步利用Real-time PCR方法,分析其在一月龄F1代个体11个不同组织的表达情况。【结果】克隆得到2 817 bp COPG2和2 219 bp MEST序列。其中COPG2 包括2 616 bp 完整CDS(coding sequenc,编码序列)区域,分析表明其编码含871个氨基酸的蛋白质,MEST包括981 bp完整CDS区域,编码326个氨基酸的蛋白质。IMpRH分析结果表明,猪COPG2和MEST都位于猪18号染色体上并且与标记CL365941紧密连锁,LOD值分别为14.32和8.5。印记分析表明COPG2在11个组织中呈双等位表达,MEST在心脏、胃、肌肉、肾、肺、膀胱、舌头和脂肪中表达父方等位基因,但在肝脏、小肠和脾脏中呈双等位表达。荧光定量结果显示COPG2 和MEST总的表达量在一月龄个体各组织间存在着显著性差异(P＜0.01),其中COPG2和MEST在肾脏中表达量均高于其它各组织(P＜0.01)。【结论】在哺乳动物之间,COPG2序列较为保守但是印记状况却缺乏保守性;MEST序列和印记状况均较为保守,但MEST在猪中印记状况具有组织特异性。此外,染色体定位信息和印记状况证实了在猪的18号染色体上有由COPG2和MEST构成的新的印记域。     

利用牛乳腺细胞和小鼠乳腺组织分析异绿原酸C通过NF-κB信号通路对乳腺炎症反应的抑制效应

旨在探究异绿原酸C(ICAC)对乳腺炎及NF-κB炎性通路的抑制作用。本研究以脂多糖(LPS)分别刺激牛乳腺上皮细胞(MAC-T)和小鼠乳腺组织建立体外和体内炎性模型，采用MTT方法筛选ICAC处理MAC-T细胞的适宜浓度，ELISA检测炎性因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)和炎性介导因子(COX-2和iNOS)的表达水平，Western blot方法检测NF-κB信号通路关键蛋白(IκB和p65)的表达水平和磷酸化水平。结果发现：1)ICAC在20～100 mg·L^-1的浓度下对MAC-T细胞没有显著的生长抑制作用(P>0.05);2)1 mg·L^-1的LPS处理引起MAC-T细胞中IL-1β、IL-6的蛋白质表达量极显著高于对照组(P<0.01),ICAC处理(20、50、80 mg·L^-1)极显著下调了MAC-T细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2和iNOS的表达量(P<0.01);3)小鼠腹腔注射的ICAC(60、80、100 mg·kg^-1)均降低了L...     

大梅组合中亲子代甲基化差异及其与生产性状的关系

为了探讨DNA甲基化对杂种优势的影响,采用了甲基化敏感随机扩增PCR技术(methylation-sensitiveAP-PCR,MS-AP-PCR),利用40条随机引物对大梅组合亲子代基因组DNA进行了扩增.结果在RsaⅠ+HpaⅡ酶切扩增片段中,有19个位点在亲子代出现差异;在RsaⅠ+HpaⅡ酶切扩增片段中,有14个位点在亲子代出现差异.亲子代间甲基化状况可归纳为4种类型(1)亲子代甲基化水平相同;(2)单亲与F1代甲基化水平相同;(3)同亲代相比,F1代发生甲基化;(4)同亲代相比,F1代去甲基化.5个甲基化变化位点对7个生产性状产生显著的影响(P＜0.05).通过对生产性状产生显著影响的片段序列分析发现,这些序列在GenBank中有同源序列(同源性高于87%);3个片段G+C%大于50;所有片段CpG岛观测值/期望值都大于0.6;而且,有一个片段含有G/C盒.表明基因启动子区域CpG岛甲基化在亲子代出现差异;不同甲基化位点对杂种生产性状的作用方向不同,说明杂种优势的表现既与有些基因的表达有关,也与有些基因的表达抑制有关.     

分子生物学创新实验教学模式的探索

分子生物学是一门实践性很强的学科。分子生物学实验复杂而细腻,技术性很强,是理论和实践相结合的典型课程。如何改进实验体系,提高学生实验动手能力、设计能力、分析能力和创新能力是分子生物学实验教学中重要的研究课题。文中通过优化实验教学内容、建立开放性实验和改进实验成绩考核方式和内容等方面着手进行改革,从而提高分子生物学实验教学质量,培养学生综合素质。     

DNA甲基化差异对猪生长性状的影响

测定和计算了大白×梅山F1 个体180日龄活重、料肉比、日增重、90 kg日龄、相对生长率和(KR)Kleiber5个性状,应用甲基敏感扩增多态技术(MSAP)分析了DNA甲基化与以上生长性状的关系。共扩增出 1 274 个位点,其中在252个多态性位点中,有81个甲基化位点对生产性状产生显著的影响。整体上,亲子代间甲基化差异不显著。但是,经配对数据t检验分析,每对引物在亲子代间扩增的带数表现出一定的差异:梅山猪与F1 代的差异接近显著性标准,大白猪与F1 代的差异达到极显著(P<0 .05)。个体一般甲基化百分差异和个体中性甲基化百分差异对所研究的6个生长性状均无显著的效应(P>0. 05)。除180日龄活重外,个体特殊甲基化百分差异对其余5个性状均产生显著的效应(P<0 .05)。从有利于养猪生产力这一角度讲,5 个生长性状表现都随个体特殊甲基化百分差异的增加而下降。回归分析表明,个体特殊甲基化百分差异与 5 个性状回归关系显著(P<0. 05)。结果显示,DNA甲基化是影响杂种表现或杂种优势的因素之一,可以作为分子标记用于杂种优势的预测和相关的研究;对性状产生显著影响的甲基化位点在预测杂种表现中要优于其它甲基化位点。