野生银杏资源群体遗传多样性的RAPD分析

用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对浙江西天目山、贵州务川、湖北大洪山区、重庆金佛山区和福建武夷山区等5个群体150个银杏Ginkgo biloba个体进行了遗传多样性分析。12个寡核苷酸引物共检测到194个位点，多态位点130个，多态位点百分率66．67％。用PopGen 32软件对数据进行了分析，结果显示：Nei’s基因多样性指数（h）的群体水平是0．4317，Shannon信息指数（I）的群体水平是0．6211，基因分化系数（Gst）是0．2882。Shannon信息指数（I）分析揭示的银杏群体遗传分化水平[（Isp-Ipop）／Isp]=0．1903，AMOVA分析结果得出银杏群体间的分化占36．7％。RAPD数据显示．5个银杏群体遗传多样性较高，其中浙江西天目山、贵州务川和湖北大洪山区有可能是野生银杏冰川期避难所。图4表5参22     

银杏ISSR-PCR扩增反应体系的优化

为了对影响银杏戗ngkobiloba简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应（ISSR-PCR）扩增反应体系的因素进行优化，采用[SSR-PCR扩增技术和UVP凝胶电泳成像技术对模扳DNA浓度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火温度等因素进行筛选和优化筛选优化后的反应条件：Taq酶0．3μg，2μL10×Buffer（含15mmol·L^-1 MgCl2），模板DNA40ng，dNTP0．2mmol·L^-1，引物0．5μmol·L^-1，Mg^2＋，5nmol·L^-1。PCR扩增程序：94℃变性5min，然后进行38个循环：94℃变性30S，48～53℃（根据引物而定）退火30s，72℃延伸1min；最后72℃延伸10min，4℃终止反应。上述反应条件可广泛应用于银杏的遗传多样性分析、遗传育种和转基因等方面的研究。图6表1参19