小麦全蚀病菌重组酶聚合酶检测方法的建立及应用

由禾顶囊壳小麦变种Gaeumannomyces graminis var.tritici引起的小麦全蚀病是危害极大的小麦土传真菌病害。本研究以小麦全蚀病菌β-tubulin为靶标基因设计重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)引物Gg-RPA-F/Gg-RPA-R和RPA探针Gg-LF-Probe,结合侧流层析试纸条,建立了小麦全蚀病菌RPA快速检测方法,该方法在38℃恒温条件下30 min内完成可视化检测,摆脱PCR仪等仪器设备的限制。小麦全蚀病菌RPA快速检测方法具有较高的检测特异性,其检测极限为10 pg/μL,与普通PCR一致。此外,小麦全蚀病菌RPA快速检测方法可从土壤中快速检测到小麦全蚀病菌,具有较强的实用性。因此,本研究建立的小麦全蚀病菌RPA快速检测方法具备简便高效、实用性强的特点,为小麦全蚀病菌的快速检测和病害早期诊断提供新技术。     

小麦全蚀病菌拮抗细菌的筛选及生防效果

为筛选小麦全蚀病菌Gaeumannomyces tritici的拮抗细菌,从健康小麦根际土壤中分离和筛选拮抗细菌,采用对峙培养法和室内盆栽试验测定拮抗细菌对小麦全蚀病菌的抑制活性及生防效果,通过形态学特征观察、生理生化特性测定和保守序列分析确定其分类地位。结果表明,从小麦根际土壤中分离并筛选获得2株具有较好拮抗效果的菌株XJ-3和XJ-4,对小麦全蚀病菌菌丝生长的抑制率分别为64.31%和65.25%。基于菌株XJ-3和XJ-4的形态学特征、生理生化特性和gyrB基因系统进化分析结果,将其均鉴定为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis。菌株XJ-3和XJ-4的发酵液中均含有一类具抗真菌活性、耐热性的非蛋白类次生代谢产物;经菌株XJ-3和XJ-4发酵液处理小麦幼苗后,株高较对照分别显著增加了6.48%和13.12%,干重较对照分别增加了1.30%和14.29%,其中菌株XJ-4的促生效果相对较好;对小麦全蚀病的盆栽防效分别达到51.29%和52.46%。表明筛选得到的贝莱斯芽胞杆菌XJ-3和XJ-4可用于小麦全蚀病的生物防治,具有开发为生防制剂的潜力。     

小麦纹枯病菌Rc-RPA-LFD快速检测方法的建立及应用

Rhizoctonia cerealis is a soil-borne phytopathogenic fungus that causes wheat sharp eyespot, resulting in serious economic losses. In this study, the recombinase polymerase amplification combined with lateral-flow dipstick technology (Rc-RPA-LFD) was developed for the rapid and sensitivity detection of R. cerealis. The Rc-RPA-LFD assay could be completed at isothermal temperature of 38°C within 30 min without PCR thermal cyclers. The RPA primers and probe designed based on ITS region, showed high specificity to R. cerealis. The detection limit of Rc-RPA-LFD assay was 1 pg·μL^-1 fungal genomic DNA, showed an equal sensitivity to that of conventional PCR. In addition, the Rc-RPA-LFD assay could detect R. cerealis from field soil samples, showing no significant differences compared to conventional PCR assay. The simplicity, rapidly and practicability all indicated that Rc-RPA-LFD assay will be a promising molecular diagnosis for the accurate and rapid detection of R. cerealis.     

小麦纹枯病菌Rc-RPA-LFD快速检测方法的建立及应用

正近年来,随着气候条件、耕作制度的变化和水肥条件的改善,小麦纹枯病在我国危害日趋严重,现已成为长江中下游麦区和黄淮麦区主要病害,每年造成严重经济损失[1]。小麦纹枯病常与小麦根茎部病害如根腐病、茎基腐病混合发生,发病早期症状相似,影响病害的早期诊断和防治。目前,小麦纹枯病菌快速检测方法主要基于常规PCR和Real-time PCR [3,4]。常规PCR和Real-time PCR具备检测准确、灵敏度高的优点,但这两种检测技术对仪器设备和     

烟草黑胫病菌RPA检测方法的建立

烟草黑胫病是由烟草疫霉（Phytophthora nicotianae）引起的烟草重要土传病害。建立了烟草黑胫病菌RPA快速检测方法，结合侧流层析试纸条，该方法在38 ℃恒温条件下30 min内完成可视化检测，不需要PCR仪等仪器设备。以烟草黑胫病菌YPT1为靶标基因设计RPA引物YPT1F和YPT1R，以及RPA探针YPT1-LFD-probe，对烟草黑胫病菌具有较高的检测特异性，其检测下限为10 pg·μL^-1，与普通PCR一致。因此，建立的烟草黑胫病菌RPA检测技术具有快速、简单、实用等特点，为烟草黑胫病菌的快速检测提供了新的方法。