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通过制备兔抗化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)高免血清,筛选固定方法、封闭液、洗涤液、抗体稀释度、抗体孵育时间等应用条件,建立一种检测化脓隐秘杆菌的间接免疫荧光方法。结果表明:用冷丙酮作固定剂,10%山羊血清作封闭液,0.05%Tween–20的0.01 mol/L pH 7.4 PBS(磷酸缓冲盐溶液)作洗涤液,兔抗化脓隐秘杆菌高免血清(一抗)1∶50稀释,37℃作用2 h,羊抗兔FITC(二抗)1∶100稀释,37℃作用2 h,草酸铵结晶紫衬染菌体3 min,对纯培养物化脓隐秘杆菌检测,可见清晰的特异性荧光,能区分溶血隐秘杆菌、伪结核棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌、猪链球菌;在人工感染化脓隐秘杆菌死亡小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及发病山羊临床病料中均能检出化脓隐秘杆菌。 相似文献
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为确诊重庆涪陵地区一山羊养殖场发生山羊皮下脓肿的病原,采集病料分离病原、进行药敏试验。通过生化试验和16S rRNA分子方法鉴定病原菌;PCR扩增分离株的神经氨酸酶基因(neuraminidase,NA),并利用细菌神经氨酸酶的隐马尔科夫模型(Pfam编号为PF13088)搜索自建的本地蛋白质组数据库,通过MEGA7.0构建系统进化树,从而分析神经氨酸酶基因在脊椎动物、寄生虫、真菌、细菌和病毒中的遗传进化特征,并利用PredictProtein进行分离株神经氨酸酶的点突变分析。结果表明,分离株的16S rRNA基因与JQ975932.1(中国新疆)株化脓隐秘杆菌序列同源性高达99.7%,结合生化特性确诊分离株为化脓隐秘杆菌;利用模型进行检索,共检索到214条神经氨酸酶氨基酸序列。神经氨酸酶遗传系统进化树显示,细菌神经氨酸酶主要集中在放线菌门中,脊椎动物的神经氨酸酶主要聚集在GroupⅠ和GroupⅡ,寄生虫的神经氨酸酶主要集中于GroupⅠ,真菌神经氨酸酶分布较广,存在GroupⅠ、GroupⅡ以及GroupⅣ中,而病毒神经氨酸酶主要分布于GroupⅠ和GroupⅡ。点突变分析表明,细菌神经氨酸酶不同位点的氨基酸突变对神经氨酸酶功能的影响不同。 相似文献
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为确定荣昌3个养鹅场雏鹅感染的真菌种类,本研究采集病死雏鹅肺脏病变组织样本进行病原分离,对分离的真菌进行了形态学鉴定和ITS2序列PCR扩增及测序分析。结果显示:分离的真菌菌落颜色、菌丝结构、孢子无性繁殖方式均符合烟曲霉的特征,ITS2序列与GenBank的烟曲霉AF454113、AF454114、AY660923菌株同源性均为100%。分离菌株雏鹅回归试验显示,感染雏鹅气囊有真菌结节,肺泡壁增厚,毛细血管淤血,支气管管腔有脓性纤维蛋白或粘液,肝细胞变性坏死,淋巴细胞浸润等病变。肺脏主要表现为非典型肺炎,肝脏主要表现为实质性肝炎。本研究为临床诊断曲霉病提供了实验依据。 相似文献
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采取死胚严重的三个孵育房死鸭胚120枚,用常规细胞分离方法,获得细菌137株。主要细菌为大肠杆菌占47%,克雷伯氏杆菌占34%,其次为产气杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌。用四种可用于种蛋消毒的消毒剂进行抑菌试验,结果四种消毒剂均有一定抑菌效果,但必灭杀抑菌效果最好。 相似文献
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为研究温和气单胞菌(A.sobria)溶血素基因的特性,本研究根据GenBank登录的气单胞菌属溶血素基因序列设计一对引物,经PCR扩增得到大小约1.5kb的A.sobria RC-07-KA株溶血基因片段,将该片段克隆到pGEM-T载体,测序结果显示:溶血素基因片段大小为1 467 bp,编码487个氨基酸残基,遗传进化分析结果表明该基因与气单胞菌属中的A.hydrophila菌株Sb (AY611033)、NLEPA-1607 (AF410466)、AEF (HM853019),A.sobria菌株357 (AY157998)、人源分离株(EF620533)和A.salmonicida菌株17-2 (X65048)的溶血素基因亲缘关系较近,同源性大于95%,而与其他菌株的同源性较低.通过构建溶血素重组表达质粒pET-HIy,诱导表达并通过western blot鉴定表达蛋白,结果显示重组菌能高效表达重组溶血素,而且纯化的重组溶血素具有溶解鲤鱼红细胞的活性.为该菌进一步深入研究奠定了基础. 相似文献
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采取死胚严重的三个孵育房死鸭胚120枚,用常规细胞分离方法,获得细菌137株。主要细菌为大肠杆菌占47%,克雷伯氏杆菌占34%,其次为产气杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌。用四种可用于种蛋消毒的消毒剂进行抑菌试验,结果四种消毒剂均有一定抑菌效果,但必灭杀抑菌效果最好。 相似文献
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鸭病毒性肝炎诊治及病原血清型鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
我们就四川省泸县某鸭场一次雏鸭暴发以急性死亡、肝脏出血为特征的传染病进行了流行病学调查、病原分离鉴定,确诊为雏鸭病毒性肝炎。利用鸭胚分离到的病毒株,经血清学中和试验证明为鸭病毒性肝炎Ⅰ型。 1 流行病学调查及病理剖检 泸县某养鸭场饲养天府肉鸭4500只,雏鸭饲养至6日龄开始出现死亡,一个星期内雏鸭死亡1200余只。发病初期雏鸭为突然死亡,后期病鸭表现精神不振,常 相似文献