动物医学专业兽医临床实践教学的创新与思考简

就兽医临床实践课程的教学方法和教学评价体系进行了讨论,提出了利用动物疾病模型教学、多媒体与临床实践结合的教学、建立各种动物疫病的通用教学规范等新的教学方法,探讨了学生自评和相互评价、教师的现场评价、用人（实习）单位的评价3个不同层次的教学效果评价体系,希望对我国农业高校动物医学专业人才培养质量的提升提供借鉴。     

断奶仔猪多系统衰竭综合征

断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS) 是由PCV2引起的多发于断奶仔猪的一种疾病, 常对养猪生产造成重大损失。本文就PMWS的临床特征、病原、病理变化、诊断标准、促发因素、控制等方面进行了综述。     

猪圆环病毒2型诊断技术的研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2),属圆环病毒科圆环病毒属,无囊膜,单股、环状、闭合的DNA病毒,病毒粒子直径17nm~20nm,是已知最小的动物病毒.PCV2是仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,还与猪皮炎肾病综合征(PNDS)、猪繁殖紊乱、增生坏死性肺炎等疾病密切相关.     

鹅副粘病毒血凝谱的初步研究

从新近分离的致病性鹅副粘病毒中,选择ＢＹ（分离自成年鹅）及ＨＪ（分离自雏鹅）作为代表株,对包括两栖类、爬行类、禽类及哺乳类在内的１３种动物的细胞作血凝试验,探讨鹅副粘病毒的血凝谱,并以鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｌａｓｏｔａ株作对照,比较二者的血凝结果。结果表明,两毒株对两栖类、爬行类及哺乳类动物红细胞的ＨＡ效价与Ｌａｓｏｔａ株相近,为２６－２１０,但是解凝速度比Ｌａｓｏｔａ株慢;对鸭、鹅红细胞的ＨＡ效价为２３－２６,低于Ｌａｓｏｔａ毒株（２１１）,且解凝速度比Ｌａｓｏｔａ株快。这些结果表明鹅副粘病毒的血凝谱与鸡新城疫病毒相近,但血凝特性有所不同。     

鸡传染性腺胃病的研究进展

1995年以来 ,江苏、山东等地鸡群相继发生了一种以腺胃肿大、腺胃乳头溃疡为特征的传染病 ,习惯称为“鸡传染性腺胃病”,临床上也经常有类似病例。为了在生产实践中能给予正确的诊断和防治 ,现就有关资料综述如下。1　病　原该病病原 ,至今仍众说纷纭 ,具体有几种观点 :腺胃型传染性支气管炎病毒、呼肠弧病毒 (Reovirus,REO)、网状内皮组织增生病病毒 (Reticuloendotheliosis,REV)等。1 .1　腺胃型传染性支气管炎病毒 (即冠状病毒 )　王永坤 (1 996 )、王玉东 (1 997)等先后从鸡传染性腺胃病的病料中分离到了冠状病毒 ,认为该病原是 IB…     

鸭白细胞介素2全基因组结构分析

依据鸡白细胞介素2（chIL-2）全基因组序列设计引物探针,以简易基因组抽提法获得的鸭外周血单核细胞基因组DNA为模板,用长距离聚合酶链式反应（LD-PCR）扩增出鸭白细胞介素2（duIL-2）全基因片段。经序列测定,得到的duIL-2基因组DNA序列全长为3528bp。运用生物信息学方法对duIL-2的基因、启动子结构和cDNA序列编码的成熟蛋白进行系统分析,结果表明,duIL-2基因具有典型的4个外显子和3个内含子结构,和已知禽类及哺乳类同系物基因总体结构具有明显的相似性。鸭和鸡及其他哺乳动物IL-2基因的启动子序列具有显著的保守性,都具有AP-1、NF-AT、CD28RE、OCT、TATAbox转录起始因子结合位点和预测的转录起始位点。duIL-2cDNA序列编码的成熟蛋白进化分析表明,鸭和鹅的亲缘关系最近,和哺乳动物的亲缘关系较远,显示出明显的种属差异。     

犬瘟热病毒的分子生物学及诊断

犬瘟热(canine d istemper,CD)是由犬瘟热病毒(CDV)引起的犬科、鼬科和熊科动物的一种高度接触性传染病,病死率30%~80%。犬瘟热病毒为副粘病毒科麻疹病毒属,呈圆形或不整形。直径为100~300 nm,含有直径为15~17 nm的螺旋状核衣壳,外覆一层双轮膜,膜上长1.3 nm的纤突。蔗糖中的浮     

猪圆环病毒Ⅱ型Rep基因在PK15细胞中的表达及特性

为研究猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)Rep基因在PK15细胞中的表达特性，通过PCR方法克隆了PCV2杭州株(HZ0201)Rep基因全长945bp片段，与真核表达栽体pCI—neo构建为重组质粒pCI-PCV2-Rep。pCI-PCV2-Rep质粒转染PK15细胞后48h，通过RT-PCR可检测到PCV2 Rep mRNA的转录；用猪PCV2多抗血清作间接免疫荧光试验，可检测到Rep基因表达产物。在表达量低的细胞中，PCV2 Rep蛋白主要位于PK15的细胞浆，在表达量高的细胞中，细胞浆和细胞核中均含有大量的Rep蛋白，表明Rep对PK15细胞的细胞浆和细胞核的亲嗜性没有明显差别。     

猪圆环病毒1型和2型Rep蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化

分别以猪圆环病毒1型基因组和重组质粒pCI-PCV2-ORF1为模板,利用PCR扩增了猪圆环病毒1型和2型的ORF1基因,随后克隆到pET-28a( )和pET-32a( )两种原核表达载体上。测序正确的重组质粒分别转化E.coli BL21(DE3),进行目的蛋白的诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,猪圆环病毒1型和2型的ORF1均能在pET-28a和pET-32a中分别以重组蛋白His-Rep(40 Ku)和Trx-His-Rep(54 Ku)的形式表达。进一步纯化后测定重组蛋白的浓度,推算出猪圆环病毒1型和2型的His-Rep蛋白产量分别为34 mg/L菌液和14 mg/L菌液,Trx-His-Rep蛋白产量则为12 mg/L菌液和10 mg/L菌液。这些纯化的蛋白在Western blot中能够与猪抗猪圆环病毒2型阳性血清发生特异性反应,显示其具有良好的免疫学活性。本研究建立的猪圆环病毒重组Rep蛋白的原核表达系统及其纯化方法,为下一步开展Rep蛋白功能等相关研究奠定了基础。     

狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中的高效表达

为获得狂犬病病毒（RV）核蛋白抗原，采用RT—PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了RV核蛋白基因，分别亚克隆到原核表达载体pET-28a（＋）和pET-32a（＋）中，经PCR和双酶切鉴定以及序列测定，重组质粒构建成功。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达，表达的核蛋白再经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化。结果显示，核蛋白在pET-32a（＋）中的表达量（30．4％）高于在pET-28a（＋）中的表达量（19．4％），培养物中的高纯度核蛋白产量分别为13．6和8．45mg／L。经Western—blotting检测，不同载体表达的核蛋白均可被兔抗RV多克隆抗体特异识别，表明核蛋白具有良好的反应原性。