桃蚜乙酰胆碱酯酶基因克隆及我国多地区桃蚜S431F突变频率检测

克隆我国桃蚜乙酰胆碱酯酶基因(ace1、ace2)cDNA。我国桃蚜ace1经与NCBI(Gen Bank:AF287291.1)比对未发现氨基酸替换,ace2基因经c DNA末端快速克隆技术得到全长(NCBI已注册的ace2 GenBank:AY147797.1缺失3'端182 bp),ace2全长为2 022 bp,编码674个氨基酸,序列已提交NCBI(GeneBank:KJ561353)。与NCBI(Gen Bank:AY147797.1)比对发现,我国桃蚜ace2除已报道的与桃蚜抗药性有关的S431F突变(氨基酸序列431位丝氨酸变为苯丙氨酸)外,在氨基酸序列55位处发现亮氨酸突变为丝氨酸(L55S)。利用突变检测技术,对2015、2016年采自我国河北、辽宁、江苏、青海等多个地区的桃蚜种群单头乙酰胆碱酯酶基因突变(S431F)频率进行检测。结果表明,2015、2016年各种群桃蚜单头乙酰胆碱酯酶基因突变(S431F)频率均大于85%,均已处于高水平突变,突变频率与生物测定抗性水平趋势一致。     

不同番茄品种对番茄黄化曲叶病毒的抗病性分析

【目的】番茄黄化曲叶病毒病(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)是一种影响全世界番茄生产的病害,培育抗病品种是最有效、经济和持久的防控手段。目前生产上应用的抗病品种繁多,但存在对TYLVC不同抗性基因的抗性水平研究甚少、了解不够全面的问题。为了解带有不同抗性基因的番茄品种对番茄黄化曲叶病毒病的抗性,对北京市农林科学院蔬菜中心培育的番茄品种抗病性进行检测,并利用半定量RT-PCR方法分析抗病基因和抗病蛋白的表达水平。【方法】选取携带有Ty3a/Ty3a的番茄材料秋光285(Ty3a纯合)、棚137×246(Ty3a杂合),携带Ty1+Ty3a纯合的秋光120、携带Ty1+Ty3a杂合的秋光81和感病对照M82为试验材料,观察番茄植株自然条件下发病情况。通过调查发病率和病情指数,考查这些番茄品种的抗病性,并利用RT-PCR方法分析抗病基因Ty1和Ty3a以及病程相关蛋白葡聚糖酶和几丁质酶基因的表达水平。【结果】携带抗性基因的杂合体、纯合体抗病性差异不明显,含有两个抗性基因和含有单一抗病基因品种的抗病性稍有差异,但差异不显著。半定量RT-PCR结果显示不同番茄品种在感染TYLCV后,体内抗性基因表达量随着发病时间的增加,Ty-3a和Ty-1的表达量逐渐增强。Ty-3a在4个番茄品种中表达水平由弱到强依次为秋光285(Ty-3a纯合)、棚137×246(Ty-3a杂合)、秋光120(Ty-1+Ty-3a纯合)和秋光81(Ty-1+Ty-3a杂合),Ty-1在秋光81中的表达显著高于在秋光120中的表达。同时,植株体内葡聚糖酶和几丁质酶基因表达量均比对照显著增加,并随着发病时间的增加逐渐增强。在发病20 d和30 d后,携带Ty-1+Ty-3a杂合的秋光81的葡聚糖酶基因表达显著强于其他几个品种。【结论】几个番茄材料对TYLCV的抗性由弱到强依次为秋光285(Ty3a纯合)、棚137×246(Ty3a杂合)、秋光120(Ty1+Ty3a纯合)和秋光81(Ty1+Ty3a杂合)。不同番茄抗病品种感染TYLCV后,体内抗性基因表达量随发病时间增加而增强,葡聚糖酶和几丁质酶基因表达量均比感病对照显著增加,表明番茄抗病品种在感染TYLCV后的抗病性除了与抗性基因的表达有关外,同时也与抗病相关蛋白表达增强有关。     

藜科植物S.L多糖抗病毒作用机理初步研究

对从藜科植物中提取的、具有诱导抗病毒作用的S.L多糖的作用机理做了初步的研究。首先将S.L多糖抽提液喷施烟草,探究S.L多糖诱导烟草对烟草花叶病毒(TMV)产生抗性的最佳时间。结果表明,用S.L多糖诱导植株产生的抗性在5 d左右达到最大,5 d之后抗病性随着时间的推移而减弱。在接种病毒前用S.L多糖对烟草幼苗进行喷施,然后于接种当天及接种后不同时间对各处理的同位等量叶片测定在总蛋白含量、过氧化物酶活性及同工酶图谱上的差异。研究发现,各处理的总蛋白含量均有所增加,且高于对照,并都于接种后的第9 d达到最大值。各处理的过氧化物酶活性在接种病毒初期均高于对照,但5 d后对照的酶活性超过处理,高峰较处理提前到来,且峰值略大于处理。在同工酶谱上,病毒接种后5 d,处理的酶带比对照浓且多了1条。5 d之后,二者的酶谱变得基本相同。到接种后10 d测定,结果相反,对照比处理的酶带浓。     

黄瓜花叶病毒番茄蕨叶分离物外壳蛋白基因的克隆和序列分析

在北京延庆的番茄上分离到1株黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)分离物CMV-YQ,该分离物在番茄上造成严重的蕨叶、矮化,在烟草上表现花叶、矮化和畸形,表现出很强的致病性。根据黄瓜花叶病毒外壳蛋白(coat protein,CP)基因的保守序列设计引物,利用RT-PCR技术对其CP基因片段进行了扩增并克隆,获得了含该基因全长657 bp的cDNA片段。序列测定与比较分析结果表明,北京地区造成番茄蕨叶的CMV分离物CP基因片段核酸序列与GenBank上CMV亚组Ⅰ其他分离物同源性高达90%～99%,属于CMV亚组Ⅰ。该分离物与分离于我国芭蕉的另一亚组Ⅰ分离物GB同源性为94.37%,两分离物之间存在寄主适应性变异。     

番茄黄化曲叶病毒病的室内外检测鉴定方法

番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）2002年传入我国南方,随后由南到北蔓延开来,2009年在北京地区已经普遍发生。该病是由双生病毒科病毒侵染所致,主要危害番茄、烟草等茄科植物,造成植株叶片枯黄、植株矮化、产量降低、品质变差,甚至绝产。本文对该病毒病的检测鉴定技术作了简要介绍。     

蔬菜病毒病的无公害防治

<正> 植物病毒病素有“植物癌症”之称,防治上十分困难。寄主植物染病后,其光合作用受到抑制,生长困难,并产生畸形,黄化等症状,严重时甚至造成奇主植物死亡。为了有效地控制植物病毒病,人们采用了各种措     

小链霉菌Ynl68发酵产物抗植物病毒活性的研究

本文对1株小链霉菌StreptomycesparvusYnl68发酵滤液的抗植物病毒活性进行了研究。结果表明,该菌株的发酵滤液对烟草花叶病毒（TMV）、黄瓜花叶病毒（CMV）、马铃薯Y病毒（PVY）都有一定的预防和治疗效果。经枯斑试验测定,发酵滤液对TMV的钝化、预防和治疗效果分别为84．2％、68．7％和52．3％;酶标记免疫吸附测定法（ELISA）测定发现,发酵滤液对CMV和PVY的增殖抑制率分别为56．0％和46．4％;盆栽试验结果表明,发酵产物对TMV弓l起的青椒病毒病的预防和治疗效果分别为55。30％和41．49％。     

小链霉菌Yn168抗病毒活性组分的分离及其稳定性研究

为进一步了解小链霉菌Yn168代谢产物中抗病毒活性物质的化学本质,为其作用机理的研究和产品开发提供依据,对该小链霉菌产生的抗病毒物质的活性组分进行了分离纯化及稳定性研究。经过乙酸乙酯萃取、三氯乙酸沉淀、Sephadex G-75柱层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),证明小链霉菌Yn168发酵液中的活性成分为2个组分的蛋白质Ⅰ168和Ⅱ168,分子量分别为34,22 k Da。稳定性研究表明,抗病毒蛋白在温度超过60℃、p H值小于6或大于8以及紫外线照射时间超过8 h的条件下,抗病毒活性均明显下降。所以,该小链霉菌的抗病毒活性成分为2个组分的小分子蛋白质,适于在较低温度、酸碱度接近中性及避光条件下保存和使用。     

放线菌Ⅲ-61和A-21对蔬菜枯萎病和灰霉病的控制作用

为了明确拈抗性放线菌Ⅲ-61和A-21在植物病害生物防治中的实用价值，并为其后续的生防制剂的研发提供科学依据，对其在蔬菜枯萎病和灰霉病上的抗病活性进行了研究。其活菌体的抑菌活性检测采用平板对峙法；菌体代谢物的活性测定利用摇瓶发酵后经微孔滤膜过滤制备无菌发酵液，然后用滤纸片扩散法测定抑菌圈，用生长速率法测定对菌落扩展的抑制，用稀释药液凹玻片静置培养法测定对孢子萌发的抑制；温室防病试验采用盆栽接种法。结果显示，两菌株的平板菌落对黄瓜枯萎病菌和番茄灰霉病菌的抑菌带宽达17．5—20．9mm；27℃，120r／min摇瓶培养6d的发酵液抑菌效果最好。其稀释倍数≤5的无菌滤液处理后经120h对病原菌菌丝生长的抑制率仍达76．5％-100％。对分生孢子萌发的抑制率为100％；100倍稀释液对孢子萌发后的芽管具有致畸作用，使其顶端膨大或呈粗栉齿状而不再继续伸长；平板对峙培养中受抑病原菌菌落边缘的菌丝细胞壁崩解，原生质体外泄，表现出溶菌现象；其4倍稀释液对黄瓜枯萎病的温室盆栽防效分别为65．15％和60．61％，对番茄和辣椒灰霉病的防效为62．49％-89．76％。此研究结果表明这2个菌株具有很好的开发应用前景。     

桃树红叶病毒病在我国的发生&#183;危害及研究现状分析

桃树红叶病是20世纪90年代初由我国首先研究报道的新的病毒病害。近年来，随着我国桃树种植业的不断扩大，桃树红叶病有进一步扩散和加重的趋势，严重影响了桃树生长及桃果品质，对我国桃产业的发展构成了很大威胁。就桃树红叶病目前在我国的发生、危害、研究现状进行了总结分析并就未来的研究和防治提出了建议。