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1.
为实现袋鼠临床样本中疱疹病毒1型(Macropodid herpesvirus 1,MaHV-1)的出入境快速检测,基于MaHV-1的gB基因序列设计特异引物和TaqMan探针,建立了一种MaHV-1荧光PCR检测方法。试验结果显示,该方法只对MaHV-1 gB基因呈现特异性扩增,与禽传染性喉气管炎病毒、伪狂犬病毒和牛传染性鼻气管炎病毒不发生交叉反应,对阳性标准质粒对照(pCR-MaHV-1-gB)的最低检测限为8个拷贝数/反应。该方法的组内和组间试验的Ct值变异系数介于0.17%~0.96%之间,具有良好的重现性。试验结果表明,本研究建立的实时荧光PCR方法可用于袋鼠MaHV-1的病原学检测。 相似文献
2.
猪德尔塔冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
根据GenBank登录的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)毒株序列设计特异性引物,建立了检测PDCoV的实时荧光PCR方法。该方法在标准品浓度2.49×10~8~2.49×10~2 copies/μL范围内线性关系良好;特异性试验显示,其他几种常见猪病病毒未见典型扩增曲线;敏感性试验显示,最低检测下限为24.9 copies/μL;重复性试验显示,批内和批间变异系数小于3%。用该方法检测62份猪腹泻粪便样品,相比常规PCR方法,前者的检出率更高;两种方法检测1 168份进境活猪粪便拭子样品,结果均为阴性。结果表明,本研究所建立的方法适用于国内猪场的PDCoV的检测和进境活猪的监控检测,也可作为PDCoV的诊断及分子流行病学调查的技术手段。 相似文献
3.
为建立一种检测赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)抗体的ELISA方法,对Gc蛋白从407位至614位氨基酸的编码序列,经密码子优化后进行基因合成,然后克隆至重组表达载体PET-32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用1 mmol/L IPTG在37℃进行诱导表达。用Ni~(+2)-NTA树脂亲和层析方法纯化重组蛋白(trGc_(aa407~614)),以Western blotting检测其抗原性;用纯化trGc_(aa407~614)建立间接ELISA方法(trGc_(aa407~614)-ELISA),并评价该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示:重组蛋白trGc_(aa407~614)以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达,经Ni~(+2)-NTA树脂亲和层析纯化后的浓度2.4 mg/mL,纯度为94%,对山羊抗AKAV阳性血清呈现较好的抗原反应性;所建立的trGc_(aa407~614)-ELISA方法的最佳抗原包被浓度为4.0μg/mL,血清稀释度为1:80,血清阴阳性的OD450临界值为0.318;该方法对AKAV阳性血清呈特异性反应,组内试验和组间试验的变异系数均小于10%。用该方法对273份进口牛血清进行AKAV抗体检测,发现10份血清为阳性。总之,本研究建立的trGc_(aa407~614)-ELISA方法为血清样品中赤羽病病毒抗体的检测提供了有效手段。 相似文献
4.
随着农业种植业结构调整,朝阳市被国家列入镰刀湾地区,成为国家杂粮主产区。由于玉米价格的下滑,农民对种植杂粮的积极性越来越高,谷子的种植面积逐年扩大。但是传统方法种植谷子需工时很多,一旦遇阴雨天不能及时间苗会造成大幅度减产,为解决这个难题,近几年建平县引进地膜覆盖机械穴播种植谷子技术。 相似文献
5.
调查松材线虫Bursaphelenchus xylophilus侵害马尾松Pinus massoniana林不同时间的4个群落和邻近的1个常绿阔叶林群落,利用群落净谱系亲缘关系指数(NRI)和净最近种间亲缘关系指数(NTI)等,分析松材线虫侵害马尾松林后群落谱系结构和谱系多样性动态。结果表明:松材线虫侵害后,群落物种和谱系多样性下降,侵害12 a后与常绿阔叶林的多样性最接近,侵害4,8 a群落内的物种和谱系与常绿阔叶林相似性最高,侵害0 a的与常绿阔叶林相似性最低;松材线虫侵害0,4,8 a的整个群落的谱系结构发散,侵害12 a与常绿阔叶林的谱系结构聚集。松材线虫侵害后,马尾松林群落向常绿阔叶林演替,同时,环境过滤对整个群落物种的组成起主要筛选作用。 相似文献
6.
黄土旱塬区平衡施肥下不同土壤耕作模式的蓄水纳墒及作物增产增收效应研究 总被引:4,自引:0,他引:4
【目的】黄土旱塬半湿润易旱区是典型的雨养农业区,多数一年一熟或两年一熟制,冬小麦和春玉米是该区主要的粮食作物,平衡施肥是主要的施肥方式。多年研究和生产实践证明,建立与不同作物轮作方式相配套的土壤轮耕技术体系,可以为作物生长发育创造良好的土、 肥、 水、 气、 热的土壤环境条件,保持农田生态健康发展,促进作物增产增收。本文在当地平衡施肥条件下,通过多年耕作模式定位试验,研究在平衡施肥条件下,不同土壤耕作模式对休闲期和作物生育期0200 cm土层蓄水纳墒状况、 作物产量及其经济效益的影响,为黄土旱塬半湿润易旱区建立在一定肥力水平下与作物轮作体系相配套的土壤轮耕模式提供理论依据。【方法】选择位于黄土旱塬半湿润易旱区腹地的陕西省合阳县甘井镇一年一熟旱作冬小麦春玉米轮作田为试验区,采用免耕、 深松和翻耕3种土壤耕作方法组成4种土壤轮耕模式,即: 翻耕免耕翻耕免耕(RT1); 深松翻耕深松翻耕(RT2); 免耕深松免耕深松(RT3); 免耕翻耕深松免耕(RT4); 以连年翻耕(CK1)、 连年深松(CK2)和连年免耕(CK3)为对照,通过连续4年(2007~2011年)定位试验,研究平衡施肥条件下的7种土壤耕作模式对冬小麦春玉米轮作田0200 cm土层土壤贮水量、 土壤水分含量、 作物籽粒产量、 水分利用效率(WUE)和经济效益的影响。【结果】 1)在土壤休闲期,RT3模式下0200 cm土层土壤贮水量最高,其次是RT2。与对照组相比,4种轮耕模式0200 cm土层土壤贮水量均高于CK1; RT3显著高于CK3,但与CK2差异不显著。0200 cm土层土壤剖面含水量,亦以RT3模式最高。2)在冬小麦生育期,0200 cm土层土壤贮水量和土壤含水量,RT3和CK2模式的较高。3)在春玉米生育期,0200 cm土层土壤贮水量和土壤含水量RT3和CK3较高。4)不同耕作模式的作物籽粒产量、 水分利用效率(WUE)和经济效益,以RT2和CK2模式最高。四年平均结果RT2处理较CK1、 CK2和CK3处理增产10.2%、 3.6%和17.1%,增收23.6%(P0.05)、 6.8%(P0.05)和28.3%(P0.05),提高WUE 9.7%(P0.05)、 4.3%和18.6%(P0.05)。【结论】年际间轮流进行深松和翻耕(RT2)处理,虽然其在土壤蓄水保墒效应方面略低于年际间轮流进行免耕和深松(RT3)和连年深松(CK2)处理,但可获得最佳增产增收效果和最高水分利用效率; 连年深松能够增加水分入渗,保护土壤,增加蓄水能力,但产量和经济效益不如RT2处理,也是该区比较适宜的耕作方法。根据实际状况,在平衡施肥条件下的一年一熟作物轮作区,应推荐深松翻耕的轮耕或连年深松的耕作模式。 相似文献
7.
刺槐EST-SSR标记PCR反应体系的优化 总被引:2,自引:0,他引:2
为建立一套适用于刺槐EST-SSR标记的 PCR反应体系,采用L16(45)正交试验设计结合单因素试验,对刺槐EST-SSR PCR反应体系中的5个主要因素:引物、DNA模板、dNTPs、Mg2+和Taq DNA聚合酶进行优化试验。结果表明:在20 μL反应体系中,各反应因素的最佳水平为0.5 μmol/L引物、30 ng模板DNA、0.15 mmol/L dNTP、0.5 mmol/L Mg2 +、1.0 U Taq DNA聚合酶。利用随机挑选的3个刺槐优良无性系品种和7对EST-SSR引物对优化体系进行验证,结果均能获得稳定、清晰的条带,证明该体系稳定可靠。此优化体系的建立为刺槐EST-SSR标记的开发以及利用EST-SSR标记深入研究和利用中国刺槐种质资源奠定基础。 相似文献
8.
以切花月季为材料,采用烘箱干燥法,研究不同保形剂、不同包埋材料和不同干燥温度、干燥时间对月季干花的保形及干燥效果。结果表明,以20%的蔗糖溶液为保形剂,以变色硅胶、石英砂各一半为干燥包埋材料,置于温度为60℃的烘箱内干燥48 h,可获得质量较好的月季干花。 相似文献
9.
根据A型猪流感病毒(SIV)的基质蛋白(M)编码基因保守序列设计合成一对特异性引物和一条Taq Man探针,建立了一种检测A型SIV的荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法对H1N1、H3N2和H9N2亚型SIV均呈特异性扩增,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒等猪的其他常见病毒无交叉扩增反应;该方法对M基因RNA对照(SIV-M-RNA)的最适线性检测范围为3.8×10~1~3.8×10~8拷贝数/反应,标准曲线方程为Y=-3.4365X+40.091,相关系数(R~2)为0.999 8,最低检出限为38个拷贝数的SIV-M-RNA。对3个不同浓度(3.8×10~3~3.8×10~5 copies/μL)的SIV-M-RNA进行组间和组内重复试验,每个浓度的Ct值变异系数均小于1.5%,具有良好的重现性。用该方法对860份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪场猪鼻拭子样本进行SIV检测,结果进口猪鼻拭子样本的SIV检测均为阴性,17份国内猪场猪鼻拭子样本SIV检测为阳性。本研究提供了一种快速、敏感和特异的A型猪流感病毒检测方法。 相似文献
10.