口蹄疫灭活疫苗质量控制和检测技术的研究进展

口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触传染性的动物疫病。口蹄疫对各国的畜牧业有着巨大的危害。目前,口蹄疫的防控措施主要是以广泛的大面积免疫预防为主,配合以扑杀疫区内的病畜和易感动物并在疫点周围一定区域内进行环形预防接种。     

猪瘟病毒石门株E2基因4个抗原结构域的原核表达

【目的】对猪瘟病毒石门株E2基因进行原核表达，以期获得可溶性表达产物，为检测猪瘟抗体的ELISA试剂盒的研制奠定基础。【方法】用PCR技术扩增了重组S21质粒载体上的猪瘟病毒石门株E2基因的4个主要抗原结构域ABCD，A1A2，B和C。分别将4个片段克隆于pMAL－p2X载体中，经PCR、双酶切和测序鉴定，E2基因的4个主要抗原结构域片段的位置、大小和读码框均正确。将4个片段分别转化到表达菌TB1、BL21、BL21－CodonPlus(DE3)-RP和BL21(DE3)中，共得到16株重组表达菌，用IPTG进行诱导表达，对表达产物进行SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析。【结果】E2基因的4个主要抗原结构域均可在这4种表达菌中表达，但以BL21－CodonPlus(DE3)-RP的表达效果最好，可表达出可溶性并且产量较高的目的蛋白。免疫印迹结果表明，表达的目的蛋白可以被猪瘟阳性血清和针对E2蛋白的单克隆抗体所识别。【结论】只表达目的基因的抗原结构域，可以缩短表达片段的长度，有利于获得可溶性目的蛋白，并且具有良好的血清学反应的特异性。     

实时荧光定量PCR技术

荧光定量PCR技术是一种目前国内外应用较为广泛的定量PCR技术,是通过始点定量和荧光检测系统实时监测累积荧光强度而实现的,具有灵敏度高、特异性强、线性关系好、操作简单等优点,不但能够用于基因定量检测,还能准确定量疾病相关基因的表达,现已广泛应用于人类和动物疾病的快速检测、定量分析、早期诊断、基因分型等方面。它可以采用绝对定量和相对定量2种方式实现定量检测,但都有各自的优缺点,需根据具体的试验选择合适的定量方式,从而得到更准确的试验结果。提高荧光定量PCR技术的特异性和灵敏度需从多方面着手,主要指特异性探针及引物的设计,选择合适的Mg2 浓度、引物和探针浓度、循环数等。     

多联干粉菌苗的研究 Ⅷ.梭菌干粉菌苗保存期试验

我们在试验破伤风梭菌毒素时发现,干燥后的毒素在普通冰箱保存十二年,毒力无明显减弱,209碱性蛋白酶在干燥后,耐热性显著增强,据此推理,干粉菌苗中的毒素已变成干燥类毒素,其性质要比毒素稳定,再加上耐热性可能增强,其保存期要更长些。据此,我们就保存五年左右的干粉苗进行试     

多联干粉菌苗的研究 Ⅴ.随需配合多联菌苗

根据快疫、羔羊痢疾、猝狙、肠毒血症、黑疫、肉毒中毒和破伤风七联菌苗试验结果,以普遍应用的快疫、羔羊痢疾、猝狙和肠毒中毒血症四联菌苗为基础,剔出其中黑疫、肉毒中毒、破伤风一种或两种成分,配制成快疫、羔羊痢疾、猝狙、肠毒血症和黑疫五联苗;快疫、羔羊痢疾、猝狙、肠毒血症和肉毒中毒五联苗;快疫、羔羊痢疾、猝狙、肠毒血症和破伤风五联苗;快疫、羔羊痢疾、猝狙、肠毒血症、黑疫和肉毒中毒六联苗;快疫、羔羊痢疾、猝狙、肠毒血症、黑疫和破伤风六联苗;快疫、羔羊痢疾、猝狙、肠毒血症、肉毒中毒和破伤风六联苗。用绵羊试验了这些菌苗的免疫效力用上述六种菌苗免疫羊血清对各种相应细菌毒素的中和滴度测定了各种菌苗的效力。根据试验结果,可以根据防疫需要,以快疫、羔羊痢疾,猝狙和肠毒血症四联菌苗为基础。随意与黑疫、肉毒中毒,破伤风菌苗配成各种多联菌苗供用     

多联干粉菌苗的研究——Ⅲ.羊快疫猝狙肠毒血症三联干粉菌苗

1.研制成快疫猝狙肠毒血症三联干粉菌苗。在三联干粉菌苗中,这三种成分对家兔和绵羊的免疫剂量分别为2.5mg、0.5mg、0.5mg 和8mg、2mg、2mg,比相同的三联液体菌苗剂量大为减少,效力显著提高。2.在三联菌苗中,快疫、猝狙和肠毒血症各种菌苗对绵羊的免疫剂量分别为对家兔免疫剂量的3.2、4和4倍。3.在生药厂大批量试产成功,主要原材料成本比相同的液体菌苗节省去70～80%,经济效益显著。4.经大剂量安全试验和一般剂量区域试验,未观察到不良反应,防疫效果较好。5.绵羊于注射菌苗后七个月仍具有良好的免疫力,再长的免疫期在继续试验中。     

新春祝辞

值此农历乙酉年新春佳节之际,我谨代表中国兽医药品监察所,向工作在全国兽药科研、生产、检验、销售一线的全体同仁,以及所有关心、支持和帮助我们工作的各位领导和朋友们拜年,并致以新春的祝贺!衷心地祝愿大家在新的一年里,工作顺利,身体健康,阖家幸福,万事如意!     

认清形势明确任务努力开创兽药质量监督检验工作新局面--王泰健副所长在全国兽药监察所所长工作会议上的讲话(2004年1月7日)

为贯彻落实刚刚闭幕的中央农村工作会议、全国农业工作会议和全国农业工作会议畜牧专业会议精神,新年伊始,我们就相聚辽宁,召开全国兽药监察所所长工作会议.这次会议的中心议题是:总结工作,交流经验,进一步认清全国兽药质量监督工作面临的新形势,明确任务,努力开创兽药质量监督检验工作新局面.     

在农业部兽药评审中心揭牌仪式上的讲话

尊敬的尹成杰副部长、尊敬的各位领导，各位来宾，同志们：今天中国兽医药品监察所加挂农业部兽药评审中心牌子，标志着农业部兽药评审中心正式成立。这是我国兽医管理体制改革的又一件大事，也是兽药行业的一件大喜事。首先，我代表中国兽医药品监察所向出席今天揭牌仪式的各位领导、各位来宾和各新闻媒体的朋友们表示热烈的欢迎和衷心的感谢!     

羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）肠毒血症灭活疫苗复合培养基的研究Ⅰ、培养基配方的选择、产毒素试验及疫苗的制备和检验

研制出一种适用于羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）和肠毒血症灭活疫苗生产的复合培养基。该培养基配方简单，配制方便，省时省力，不需要肝和肉，原材料来源广泛，若用该培养基替代现用的培养基，可大大地降低这类疫苗的生产成本。经过产毒素试验和最适培养条件的试验，证明该培养基替代现用培养基生产疫苗是可行的。用该培养基在实验室制备的疫苗，经效力和安全性检验，均达到了《规程》的标准。