HSV-2gD融合gB CTL表位重组蛋白的原核表达及免疫原性评价

为研制具有较强细胞免疫作用的单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)疫苗,将HSV-2糖蛋白D(gD)序列与糖蛋白B(gB)上两种CTL表位序列连接,人工合成重组基因gD-gBCTL,通过PCR扩增,将其克隆后连接至原核表达栽体pET-22b(+),构建重组基因表达质粒pET-22b(+)-gD-gBCTL,转化E.coli B...     

布鲁菌脂多糖的制备及其免疫效果的初步评价

为研究布鲁菌的一个毒力因子脂多糖的免疫保护效果,采用冷酚法提取脂多糖,并用凝胶过滤层析法对其进行纯化,采用滴鼻免疫和皮下注射两种途径免疫Balb/c小鼠,进而检测血清IgG抗体效价和脾中细胞因子IFN-γ的分泌情况。通过上述实验最终制备了较纯的脂多糖,以皮下注射10μg组血清IgG抗体效价最高,由此证明LPS具有一定的免疫原性。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型抗原优势表位与乙肝核心蛋白融合DNA疫苗的构建

提取HSV-2333株的DNA作为模板,用PCR方法扩增编码HSV-2糖蛋白D抗原优势表位的基因(gDt)和乙肝核心蛋白(HbcAg)的基因序列(HBc),再用重叠PCR方法将gDt插入到HBc编码HbcAg刺突部的第81和82位的氨基酸的基因之间,获得融合基因gDt-HBc,将gDt-HBc插入真核表达质粒pcDNA3.1中,构建出真核表达质粒gDt-HBc-pcDNA3.1,转化DH5a感受态细胞后,通过菌落PCR和双酶切鉴定后进行测序鉴定,测序结果与预期结果完全一致,成功构建单纯疱疹病毒Ⅱ型抗原优势表位与乙肝核心蛋白融合DNA疫苗,为下一步的评价工作奠定了基础.     

布鲁菌BMEI1829基因的原核表达、蛋白纯化及动物免疫试验

利用PSORTb及CELLO生物学软件对布鲁菌16M菌株基因组序列进行分析,预测其外膜蛋白基因序列;选取BMEI1829基因进行PCR扩增并与原核表达载体pET32a(+)连接,转入E.coliBL21(DE3)感受态细胞;IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE分析及Western blot鉴定目的蛋白的表达;经His-TrapTMHP纯化,免疫Balb/c小鼠,间接ELISA法检测特异性抗体。结果表明,BMEI1829蛋白在原核表达系统中成功表达,纯化后蛋白免疫Balb/c小鼠可产生特异性抗体,抗体亚型分布以IgG1、IgG2b为主,为进一步研究其功能奠定了基础。     

淋球菌孔蛋白基因与脂寡糖表位融合基因原核表达载体的构建及表达

PCR扩增淋球菌CMCC29400、CMCC29403株孔蛋白(PI)A、B及表位基因,使用linker GSGGSG并通过重叠PCR法将表位基因连接在PIA、PIB上形成融合基因PIA-表位、PIB-表位,分别与克隆栽体pMD-18T连接,测序正确后将目的基因插入表达载体pET32a(+)中,构建pET32a-PIA...     

布鲁菌免疫分子研究进展

布鲁菌病是布鲁菌引起的人兽共患传染病,包括7种21型,其中感染人的主要有牛、羊、猪布鲁菌3种,其免疫涉及体液免疫和细胞免疫.在布鲁菌的免疫过程中,先天性免疫应答主要通过补体、自然杀伤细胞、巨噬细胞、细胞因子等的参与.获得性免疫应答中,CD4 、CD8 、γβT细胞起重要作用.布鲁菌重组亚单位疫苗是近年研究的热点,而且发现的免疫分子也很多.文章围绕布鲁菌免疫机理、免疫相关分子进行探讨,为筛选疫苗候选分子奠定基础.     

布鲁氏菌pcDNA3．1-omp17．3基因疫苗的研制

采用PCR方法扩增了布鲁氏菌17．3ku外膜蛋白编码基因，并将该基因克隆至真核表达载体pcDNA3．1（＋）中，成功构建了真核表达质粒pcDNA3．1-ompl7．3。pcDNA3．1-omp17．3转染coS-7细胞后，通过Western—blotting检测到了17．3ku蛋白的瞬时表达。将pcDNA3．1-ompl7．3免疫小鼠，三免后经ELISA、流式细胞仪以及ELISPOT技术检测到pcDNA3．1-omp17．3在小鼠体内诱导产生了以Th1型为主的细胞免疫应答。结果表明，构建的基因疫苗可作为潜在的布鲁氏菌新型疫苗，有进一步研究的意义。     

呼吸道合胞病毒黏附蛋白G在昆虫杆状病毒表达系统中的表达

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是在世界范围内引起婴幼儿下呼吸道感染的重要病毒之一,首次感染多发生于1岁以内的婴儿,2月龄婴儿的发病率最高.感染该病毒后不能产生持久的免疫力,可以反复感染,是造成婴幼儿住院的主要原因,也是青少年、老年人以及免疫缺陷人群呼吸道感染的重要病原,因此世界卫生组织要求对其严加监控.呼吸道合胞病毒在我国不但有散发流行,而且还曾引起数次大规模的流行.在南方,呼吸道合胞病毒流行高峰主要在炎热的夏秋季,而北方则发生在寒冷的冬春季.用单克隆抗体对我国部分地区呼吸道合胞病毒分离株亚型监测的结果表明,目前我国流行的呼吸道合胞病毒主要为A亚型.     

鼠疫DNA疫苗pVAX1/F1-V安全性初步研究

为了研究鼠疫DNA疫苗pVAX1/F1-V质粒的安全性,试验运用SDS-PAGE电泳和琼脂糖电泳等方法检测了鼠疫DNA疫苗pVAX1/F1-V质粒的纯度,并以小鼠为动物模型进行了质粒pVAX1／F1-V的急性毒性和长期毒性试验,用PCR方法检测外源基因在小鼠组织中的分布情况,用ELISA、EIISPOT方法检测了其自身的免疫反应。结果表明,提取的质粒pVAX1/F1-V未检测到核酸及菌体蛋白污染;注射初期质粒pVAX1/F1-V 主要分布于注射部位的肌肉组织,其他组织有散在分布;小鼠接种4周后,质粒pVAX1/F1-V仅分布于注射部位。小鼠注射pVAX1/F1-V质粒后未产生明显的毒副反应及自身免疫损伤,也未检测到自身抗体。初步证明鼠疫DNA 疫苗pVAX1/F1-V安全性良好,为鼠疫菌新型DNA疫苗的应用奠定了基础。     

以霍乱毒素重组B亚单位为佐剂的流感抗原滴鼻免疫效果研究

研究霍乱毒素重组B亚单位（recombinant cholera toxin Bsubunit，rCTB）为佐剂的流感抗原滴鼻免疫小鼠后，小鼠的体液免疫和局部黏膜免疫反应。三价流感病毒灭活抗原及裂解抗原按比例与rCTB配伍，滴鼻免疫小鼠，分析血清中IgG和IgM的动态变化，二免三周后，分析血清中HAI的变化，收集鼻、肺冲洗液，分析kG和slgA的变化。结果表明：全病毒组及rCTB＋裂解抗原组各项指标变化较明显，小鼠血清kG和IgM在二免三周后仍维持在较高的水平，而其他两组均呈下降趋势；全病毒组鼻、肺冲洗液IgG和sIgA抗体滴度以及血清HAI抗体滴度均高于rCTB＋全病毒组（P〈o．01），而rCTB＋裂解抗原组鼻、肺冲洗液kG和sIgA抗体滴度以及血清HAI抗体滴度明显高于裂解抗原组（P〈0．01）。研究表明：以全病毒抗原及rCTB＋裂解抗原滴鼻免疫小鼠，均可诱导小鼠产生较强的系统免疫反应和局部黏膜免疫反应。rCTB与流感裂解抗原配伍滴鼻，可提高抗原的免疫原性，增强机体的黏膜免疫应答反应。