非洲菊苯基苯乙烯酮合成酶CHS基因表达模式的初步研究

苯基苯乙烯酮合成酶 (ｃｈａｌｃｏｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ ,ＣＨＳ)是植物体内花色素苷等类黄酮化合物生物合成途径中的一个关键酶 .有关该酶特性及其基因表达调控在花发育过程中已有一些研究 ,大多集中于矮牵牛、金鱼草等模式植物[1] ,而对非洲菊等具有较高观赏价值的花卉研究较少 .非洲菊花序结构复杂 ,是研究花发育、花色素苷合成及花色素苷基因表达调控的理想材料 .非洲菊的头状花序可分为 3种类型的花 ,其最外层花 (ｒａｙｆｌｏｒｅｔｓ,Ｒｆ)大且色泽鲜艳 .本研究以非洲菊Ｒｆ为试材 ,提取不同发育时期Ｒｆ的总ＲＮＡ ,通过测定花色素…     

花色素苷含量高的鸡冠花愈伤组织系的筛选

以凤尾鸡冠花(Celosia cristata var.Pyramidalis)无菌苗下胚轴为外植体,于添加0.1 mg·L-12,4-D和0.5 mg·L-1BA的B5培养基上诱导出产花色素苷的愈伤组织.在愈伤组织的继代过程中,筛选出二种不同颜色的花色素苷含量高的愈伤组织系JSA10(洋红)和JSA25(橙红).比较研究JSA10和JSA25愈伤组织生长及花色素苷的产量,其生长曲线均呈"S"形.花色素苷的积累主要在愈伤组织的缓慢生长期.JSA10的生长及花色素苷的积累能力均强于JSA25.     

蓝猪耳再生系统的建立

采用4因子3水平的正交设计，研究外植体种类、NAA、6-BA和光照处理对蓝猪耳愈伤组织诱导的影响，结果表明，光照下带有根的完整植株生长在MS NAA0．5mg／L 6-BA2mg／L的培养基上能够诱导出大量的愈伤组织。比较了不同外植体在诱导愈伤组织出现的时间、形态、质地和颜色等方面的差别。无菌苗的幼叶在培养基MS NAA0．1mg／L 6-BA2mg／L中不定芽诱导率最高，达到81．3％，在MS NAA0.1mg／L 6-BA0．5mg／L培养基上有效不定芽数最多，在MS NAA0．1～0．5mg／L培养基中无根的植株能够诱导出大量的不定根。     

水杨酸对豇豆枯萎菌的抑制作用

观察了不同浓度的水杨酸(salicylic acid,SA)对豇豆枯萎病病菌的孢子萌发、菌丝生长、感病品种挑战接种后幼苗发病率、-β1,3-葡聚糖酶和几丁质酶酶活性变化的影响。结果表明:大于2.0 mmol/L的SA溶液都能显著地抑制豇豆枯萎病病菌孢子的萌发;在1.0~10.0 mmol/L范围内,SA浓度越大对菌丝的抑制作用越强;在不影响豇豆感病品种幼苗正常生长的情况下,以5.0 mmol/L的SA最为有效,幼苗发病率仅为23.2%;感病品种经SA处理后引起了-β1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性的升高,挑战接种后的酶活性变化比未经SA处理的上升早且快。     

非洲菊愈伤组织诱导和不定芽分化研究

以非洲菊深圳5号为材料,研究了几种因素对非洲菊花托愈伤组织诱导和不定芽分化的影响,结果表明,花托在1/2MS 6-BA 10 mg/L NAA 0.2 mg/L IAA 0.3 mg/L培养基中诱导愈伤组织的速度最快,诱导率达100%;花托在在1/2MS基本培养基中诱导出的愈伤组织较少褐变,且易分化不定芽;将愈伤组织转接到1/2MS 6-BA 3 mg/L NAA 0.2mg/L IAA 0.1 mg/L培养基中进行继代增殖培养可有效降低褐化率,不定芽分化率达67.5%、不定芽平均数为2.3株,指出高效的愈伤组织和不定芽再生频率为非洲菊基因转化体系的建立奠定了基础。     

根癌农杆菌介导蓝猪耳转化系统的建立

 通过对影响根癌农杆菌介导蓝猪耳转化效果各种因素的研究, 建立了蓝猪耳高效稳定的遗传转化系统。研究结果表明, 农杆菌侵染叶片外植体效率最高; 外植体预培养不利于农杆菌的侵染; 乙酰丁香酮能大大提高根癌农杆菌转化蓝猪耳的效率。另外, 菌液浓度、侵染和共培养的时间及再生的途径等均对转化效率有一定的影响。叶片外植体与农杆菌共培养后, 经过抗性芽的诱导、根的再生, 70 d左右就可以获得抗性苗。抗性植株经GUS染色、PCR分析和Southern blot检测, 外源基因已经整合到蓝猪耳基因组中, 转化频率为7%～8%。     

过量表达tMEK2基因的大岩桐植株对温度胁迫的反应

 构建番茄中MAPKK基因tMEK2的过量表达载体并转化到大岩桐中,通过PCR和Southern blot鉴定出转基因株系并对其进行抗性分析。结果表明,转基因植株与对照相比叶片变小,叶片的叶绿素含量显著增加,在4 ℃低温和40 ℃高温胁迫之后的恢复能力明显比对照增强。     

豇豆枯萎病抗性与水杨酸互作关系

研究了不同浓度的水杨酸(SA)对豇豆枯萎病病菌孢子萌发、菌丝生长,以及对感病品种浸根处理后再接种(挑战接种)的幼苗发病率和对β-1,3-葡聚糖酶、几丁质酶活性变化的影响。结果表明:与对照相比,浓度大于1.0mmol·L-1的SA处理4h后能显著地抑制豇豆枯萎病病菌孢子萌发;在1.0~10.0mmol·L-1范围内,随浓度的升高SA对菌丝生长的抑制作用增大;在不影响豇豆感病品种幼苗正常生长的情况下,以5.0mmol·L-1的SA减轻幼苗发病率最为有效;豇豆感病品种经SA处理后β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性升高,挑战接种后的酶活性变化比未经SA处理的上升早且快。     

光和糖对非洲菊花色素苷积累及CHS、DFR 基因表达的影响

 探讨了光和糖对非洲菊(Gerbera hybrida) 花序最外轮舌状花( ray floret) 花瓣着色的影响。P2期花序和舌状花先在含有3%蔗糖和无蔗糖的固体培养基(8 g·L^-1琼脂) 上进行3 d暗培养, 光照处理不同时间后, 继续暗培养, 第9 天取样, 采用分光光度计法测定舌状花花瓣花色素苷积累; 照光后立即取样, 以Northern-blot检测CHS、DFR基因表达的变化。研究结果表明, 短暂光照提高花色素苷积累; 光照明显诱导CHS、DFR基因表达, 光照时间越长, 基因表达水平也越高。暗培养7 d和9 d, 光诱导基因表达效应明显减弱。培养基中含有蔗糖时, 光强烈诱导花色素苷积累和CHS、DFR基因表达。     

非洲菊花序的离体培养及其舌状花花色素苷积累的调控

为建立非洲菊花序离体培养系统,以便进一步深入探讨外界环境因素对花生长和着色的调控,对影响非洲菊花序离体培养的关键因素进行了研究．结果表明：P2花序离体后,以体积分数为1％的NaClO消毒10min,在30g/L蔗糖 8g／L琼脂的培养基中培养,先暗培养3d再转至光培养,花序可生长并着色．光培养过程中,舌状花(ray floret,rf)花色素苷积累水平不断增加,在第9d达到最高水平,而黑暗下,离体花序不能生长、着色．证明光和代谢性的葡萄糖、果糖、蔗糖是离体花序生长和花色素苷积累的必需条件．