南美白对虾设施化养殖水处理技术

正本文通过南美白对虾设施化养殖水处理技术,实现"低能耗、低排放、低污染"。通过一系列的技术措施保持养殖水质的稳定,实施生态防病。整个养殖过程实现无公害养殖,产品绿色环保和无药物残留,生产出优质无公害产品,从而提高水产品品质、保障食品安全。     

锯缘青蟹血清凝集素的特性和盐析提取研究

对锯缘青蟹(Scylla serrate)血清凝集素的凝集特性进行了研究。结果显示:锯缘青蟹血清凝集素对人、兔、鼠、鸽子、中华鳖、鲫红细胞均有凝集作用,其中对小鼠红细胞凝集活性最强,血凝活性可达29;凝集素活性最适pH 6.0~7.4;盐度对凝集活力有较大影响,NaC l浓度在0.4~0.5 mol/L时基本失活;未纯化血清凝集素对Ca2+、Mg2+未表现出依赖性;凝集素活性能被N-乙酰葡萄糖胺特异性抑制。对青蟹血清凝集素进行硫酸铵分级沉淀分离后,发现凝集素活性主要分布在25%饱和度硫酸铵沉淀区,该组分凝集比活比血清高27.44倍,SDS-PAGE结果表明主要蛋白带型为79 ku、75 ku、72 ku。     

中草药免疫增强剂在甲壳动物病害防控中的应用

中草药免疫增强剂具有来源广泛、价格低廉、环境污染较低等优越性,近年来已较多地应用于甲壳类养殖动物的病害防控,产生了较好的效果.本文介绍了中草药免疫增强剂多糖、甙类、生物碱类、有机酸及挥发性油类等免疫活性成分和作用机理,以及在甲壳动物上的应用.总结和分析了中草药免疫增强剂在甲壳动物病害防控中的应用情况、评价指标及目前在研制和应用中存在的主要问题和发展趋势,以期为甲壳动物免疫增强剂的研究和应用提供参考.     

水产常用抗菌药物对锯缘青蟹酚氧化酶的影响

研究了喹诺酮类等17种常见抗菌药物对青蟹酚氧化酶的影响。试验结果表明,药物质量浓度为500μg/ml时,所有抗菌药物对青蟹酚氧化酶(PO)均有明显抑制作用;药物质量浓度为5~10μg/ml时(常规使用剂量),庆大霉素、卡那霉素和丁胺卡那霉素等5种药物的PO抑制率为10%~25%;诺氟沙星、环丙沙星和氧氟沙星等6种药物的PO抑制率为5%~10%,抑制作用较弱;恩诺沙星和红霉素等4种药物的PO抑制率均小于5%,对青蟹PO无明显影响;低剂量阿维菌素和氟苯尼考对青蟹有免疫促进作用。     

锯缘青蟹血细胞酚氧化酶活力及主要影响因子

研究了温度、pH、促进剂、抑制剂、菌体及免疫多糖对锯缘青蟹(Scylla serrata)血细胞裂解物(HLS)酚氧化酶(phenoloxidase,PO)活力的影响。试验结果表明:锯缘青蟹PO的最适作用温度为25℃,最适pH值为7.8;SDS、Ca2 、Mg2 均可提高PO的活力,其中Ca2 和Mg2 的最佳反应浓度分别为50 mmol/L和150 mmol/L,SDS的最佳反应浓度为2.5 mg/mL;叠氮钠、二乙基二硫代氨基甲酸钠、乙二胺四乙酸、Cu2 对PO活力有不同的抑制作用。发现拟态弧菌SS060818、气单胞菌Mr M0602、金黄色葡萄球菌ATCC25923、溶壁微球菌AS1.634对PO有激活作用,其中拟态弧菌和气单胞菌激活作用显著,金黄色葡萄球菌、溶壁微球菌对PO有弱激活作用;肽聚糖、拟态弧菌脂多糖粗提物可显著提高PO活力,肽聚糖、脂多糖的最佳激活浓度分别为2.7mg/mL、0.5 mg/mL。     

五倍子、乌梅等45种中草药提取物对锯缘青蟹致病弧菌的抑菌作用研究

取五倍子、乌梅等45种中草药，分别采用水提取法和醇提取法制备提取液，除菌后滴加至中6mm空白药敏滤纸片上，制成试验用药敏纸片。测试了提取物对拟态弧菌SM060818、梅氏弧菌SM060813、霍利斯弧菌SM060913等3种分离自锯缘青蟹体外抑菌的效果。结果表明：所试验的45种中药提取物中，有28种中药提取物对试验弧菌表现有抑菌作用；其中五倍子、乌梅、秦皮、艾叶中药提取物抑菌作用较好，对3种菌株均有较好抑菌效果；天冬、白头翁、赤芍、金银花、黄精、黄柏、青蒿等11种中草药提取物仅对2种菌株有较好抑制作用，千里光、穿心莲等17种中药提取物对弧菌无抑制作用；大部分中药抑菌活性成份均为水溶性提取物，青蒿存在明显的醇溶性抑菌物质。测定了五倍子等9种中药提取物对致病弧菌的最低抑菌浓度（MIC），五倍子、乌梅和天冬3种药物对拟态弧菌和梅氏弧菌的MIC分别为0．172mg／mL、0．461mg／mL、1．042mg／mL，对霍利斯弧菌的MIC分别为0．086mg／mL、0．922mg／mL和1．042mg／mL，有较好的抑菌作用。     

嗜水气单胞菌BA-ELISA的建立及其在病原检测中的应用

从中华鳖中分离的嗜水气单胞菌致病株T0608经福尔马林灭活后,注射免疫新西兰兔,制备了高价免疫血清,血清的菌体凝集效价可达1/1 280;G蛋白亲和层析纯化兔IgG,将IgG用生物素标记,建立了生物素-亲和素双抗体夹心酶联免疫吸附法(BA-ELISA);其最低检出限为2.5×103cfu,相当于0.5 ng菌体蛋白,其检测灵敏度为ABC-ELISA(4.0×104cfu)和间接ELISA(4.0×104cfu)的16倍;特异性试验结果表明,本法与鱼类气单胞菌、拟态弧菌、海豚链球菌、大肠杆菌等无交叉反应.BA-ELISA可不经细菌培养直接检测人工感染48 h中华鳖的肝、肠道组织中的嗜水气单胞菌.用该方法对湖州市龟鳖养殖场的水样、中华鳖和巴西龟肝、肠道内容物进行检测.结果表明该方法可较好地应用于发病中华鳖的病原早期诊断及养殖中华鳖的病原检测.     

锯缘青蟹凝集素的提取及单克隆抗体制备

凝集素是无脊椎动物非特异性免疫系统的重要组成成份，可凝集外来病原菌、进行非己识别、调理和介导血细胞吞噬。开展了锯缘青蟹血清凝集素的提取、单克隆抗体制备及凝集素定位研究，以N-乙酰基葡萄糖胺（N-Acetyl-D-glucosamine，GlcNac）为配基制备了Sepharose 4B亲和层析柱，可选择性结合青蟹血清凝集素；青蟹血清通过亲和层析柱后，以0.45 mol/L NaCl洗脱，得到有较高凝集活性的单一洗脱峰，该洗脱峰凝集素比活为血清凝集活性的32.6倍，SDSPAGE显示存在87 ku和79 ku主要蛋白成分；以纯化青蟹凝集素免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、单抗筛选获得BF82等7株可稳定分泌抗凝集素单抗的小鼠杂交瘤细胞株，单抗腹水的ELISA效价为1∶10⁴～1∶10⁵；单抗可特异性抑制青蟹凝集素的血凝，血凝抑制效价为1∶32～1∶64，亚型鉴定表明7株单抗均为IgG1型，免疫印迹表明单抗可特异性结合87 ku、79 ku蛋白；采用凝集素单抗间接免疫荧光法进行了青蟹血淋巴细胞染色，结果显示凝集素主要分布于颗粒细胞的细胞质颗粒和透明细胞的细胞膜上。