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1.
从海南根瘤菌(Rhizobium hainanense)166提取总DNA,用EcoR I酶进行完全酶切和电泳,然后用苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042B的nodABC DNA片段作探针进行Southern杂交,发现1条含有nodABC基因DNA片段的阳性条带,大小为2.1-2.5kb。通过电泳回收该DNA片段,用pUCl8作载体连接,并转化大肠杆菌(Eschedchia coli)DH5α,从而构建了含有nodABC的部分基因文库。提取该文库的质粒与nodABC探针做菌落杂交,筛选到nodABC的阳性克隆,称为pUER12。将含有nodABC的DNA片段与EcoR I酶切的pBBR-MCS-5连接,转化大肠杆菌DH5α,获得转化子pBER12。用三亲本杂交方法,把pBERl12转入苜蓿中华根瘤菌AK1657,将其接合子进行结瘤实验,验证了pBER12具有nodABC基因的功能。然后将含有166 nodABC片段的DNA与EcoR I酶切的pGEM-7Z( )连接、测序和进行同源性比较,发现166 nodABC编码的蛋白与苜蓿中华根瘤菌具有高度的同源性。  相似文献   
2.
提取金黄色葡萄球菌px—1总DNA经酶切后,与载体质粒Puc18链接,并转化E.coli DH5α,从而构成金黄色葡萄球菌px—1的基因文库。用PCR方法扩增基因文库,所得PER产物点于芯片上,从而制各px—1DNA芯片。分别提取不同盐浓度培养的px—1的总RNA,把不同盐浓度培养的px—1的总RNA反转录为DNA,用Cy3,CY5分别标记反转录的DNA。通过杂交检测芯片,并获得杂交图像。  相似文献   
3.
Ri质粒转化银杏及影响其产生黄酮的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
本研究用R i质粒转化银杏获转化根及转化愈伤组织。通过southern杂交证实为转化愈伤组织,并且研究不同培养条件对转化愈伤组织产生次级代谢物黄酮的作用。  相似文献   
4.
提取假单胞杆菌PsJN总DNA经酶切后,与载体质粒Puc18链接,并转化E. coli DH 5α,从而构成假单胞杆菌PsJN的基因文库.用PCR方法扩增基因文库,所得PCR产物点于芯片上,从而制备PsJN DNA芯片.分别提取不同C源培养的PsJN的总RNA,把不同C源培养的PsJN的总RNA反转录为DNA,用Cy3,CY5分别标记反转录的DNA.通过杂交检测芯片,并获得杂交图像.  相似文献   
5.
从海南根瘤菌(Rhizobium hainanense)I66提取总DNA,用XbaI完全酶切,然后用苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042B的nodDDNA片段作探针进行Southern杂交,杂现2条含有nodD基因DNA征段的阳性条带,分别为4.0和6.0kb,电泳回收含有4.0-6.0kb的DNA片段,用pUC18作载体连接,并转化E.coliDH5α,构建含有nodD的部分基因文库,提取该文库的质粒与nodD探针做点杂交,筛选到nodD的阳性克隆,称为pUOD75。再将pUOD75的nodD片段克隆到pBBR-MCS-5,构建成pBOD75。用两亲本杂交,把pBOD75转入豌豆根瘤菌蚕豆生物型(Rhizobium eguminosarum bv.viciae)根瘤菌I66nodD基因在毛地黄黄酮诱导下得到表达,说明其表达产物可能具有结瘤调节功能。  相似文献   
6.
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