鸡传染性支气管炎病毒HH06株膜蛋白多克隆抗体制备及生物学功能研究

文章通过RT-PCR方法扩增传染性支气管炎病毒（IBV）HH06株M全长基因，经抗原性和亲水性分析，将M部分序列成功亚克隆于pET-30a（+）和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET30a-M转化E. coli Rosetta （DE3）感受态细胞，诱导表达获得20 ku重组M蛋白。Western blot检测表明，重组蛋白能够与IBV参考阳性血清反应。以纯化重组M蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体，其ELISA效价达到1??218；Western blot结果证实，其具有良好的反应性和特异性。间接免疫荧光试验表明，抗M蛋白多克隆抗体可检测到PVAX-M1转染BHK-21细胞表达的M蛋白，与IBV HH06毒株具有很好的特异性反应。病毒感染抑制试验表明，多抗血清对IBV Beaudette株的抑制率可达到25.9%。为IBV检测及M蛋白功能的研究奠定基础。     

葡萄渣和甜菜粕在妊娠母猪料中的应用效果

正给妊娠母猪料添加纤维素有助于改善母猪妊娠期间因限饲而产生的采食量下降的问题,同时提高妊娠母猪料中纤维的含量不仅对母猪哺乳期间的采食量有积极的促进作用,还可以明显改善产房仔猪的存活率。以下试验进一步验证了使用甜菜粕的意义,并且让我们对一种新的原材料——葡萄渣在饲料中的应用有了一个新的认识。在DESIALIS公司的支持下,我们在Trinottieres的实     

高致病性FAdV-4分离株fiber2结构蛋白表达 和细胞内定位的分析

初步鉴定一株高致病性4型禽腺病毒（fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4）并研究其生物学特性。应用PCR、动物实验、免疫印迹技术和激光共聚焦鉴定其致病性和传播途径,分析fiber2蛋白的表达特性及其在细胞内定位。结果显示,所分离的毒株为FAdV-4型强毒株,对鸡的致死率达100%,对鸭无明显致病性;病毒可以经过滴鼻点眼感染而非经过口腔感染;PCR扩增的fiber2基因的大小为1 440 bp,所构建的含fiber2基因的重组真核和原核表达质粒均可正确表达;共聚焦结果显示,fiber2蛋白主要定位于细胞核。结果可为进一步研究安徽省地区高致病性禽腺病毒的感染和疫苗制备提供基础。     

鸡氨肽酶N蛋白多克隆抗体制备及其生物学功能研究

试验参考Gen Bank上鸡氨肽酶N(g APN)基因序列(登录号为NM_204861.1)设计多对特异性引物,利用RT-PCR分段克隆g APN基因各段克隆产物并利用SOE-PCR将其进行连接,得到大小为2 906 bp的全长基因。利用原核表达载体p ET-30a(+)构建重组质粒p ET-g APN并转化E.coli Rosetta,经诱导表达得到大小为113 ku目的条带。以纯化g APN重组蛋白为免疫原制备兔抗g APN多克隆抗体,间接Elisa方法检测多抗血清效价为215。Western Blot试验证明,此多克隆抗体可以与原核表达的蛋白产生特异性条带,同时与18日龄鸡肾组织中获得的天然g APN蛋白样品有良好的反应性。间接免疫荧光试验显示,多克隆抗体可检测到pc DNA-g APN转染HELA细胞所表达的g APN蛋白。上述结果可为g APN蛋白的深入研究奠定基础。     

鸡痘DNA疫苗pVAX-env的构建及其体内外表达

利用PCR技术将鸡痘病毒env基因亚克隆到pVAX1真核载体上，构建了含有该基因的真核表达质 粒pVAX-env。将质粒pVAX--env体外瞬时转染BHK21细胞通过间接免疫荧光检测蛋白表达。将pVAX-env质粒肌肉注射免疫14日龄雏鸡，通过RT-PCR和组织免疫荧光检测体内质粒表达。结果表明，成功构建了真核表达质...     

动物外用止血剂的制备

为提供外用止血剂用于兽医临床，本试验利用凝血酶原、凝血因子Xa、凝血因子V，采用正交试验设计确定了凝血酶原酶复合物各种成分的最佳浓度,从猪血中制备凝血酶，并根据兽医临床上的需要制成适合动物外用的止血剂型。该止血剂可以应用于兽医临床，是国内外兽医临床的新型外用止血剂。     

高致病性FAdV-4传代中的毒力和Fiber2基因的比对分析

为筛选禽腺病毒疫苗株和制备亚单位疫苗提供科学依据，探明高致病性禽腺病毒C亚型4血清型（FAdV-4）毒株在传代中的毒力变化以及不同感染方式对雏鸡死亡率的影响，首先制备2 ~ 15代的高致病性FAdV-4尿囊液，用LMH细胞检测第2、4、8和15代尿囊液的半数细胞感染量（TCID₅₀）；其次选取的4个代次尿囊液分别通过黏膜（点眼）和颈背部皮下途径接种SPF雏鸡，观察动物的死亡率；最后应用PCR方法扩增主要结构蛋白Fiber2基因序列并进行比对分析。结果表明：所有制备的2 ~ 15代FAdV-4毒株均在5 ~ 7 d内致鸡胚死亡（100%），4个代次毒株的TCID₅₀为10^6.5±0.2/0.1 mL，不同代次毒株间的毒力差异不显著（P＞0.05）；选取的4个代次毒株经颈背部皮下接种雏鸡的死亡率为100%，死亡雏鸡出现典型的心包积液综合征。而经黏膜接种的雏鸡死亡率呈下降趋势，分别为80%、50%、30%和30%；不同代次毒株Fiber2基因序列没有发生变化。总之，不同代次毒株通过皮下接种后对雏鸡的致病力没有差异，但黏膜接种的死亡率则逐代下降，而主要结构蛋白Fiber2基因则没有出现碱基变异。