溶藻弧菌生物被膜的特性与相关基因的研究

建立溶藻弧菌（gibrioaigino／yticus）的生物被膜（BF）体外形成模型，用银染法观察检测溶藻弧菌HY9901生物被膜的形成；同时研究温度和消毒剂对HY9901的游离（FC）细菌和具有生物被膜（BF）的细菌的影响。实验结果表明，溶藻弧菌HY9901株可以形成BF，而非致病株ZJ017不形成BF。HY9901株的BF细菌经85℃30min、-20℃80d、0．01％新洁尔灭处理后均有存活，而游离（FC）细菌则无存活细菌。根据已发表的哈氏弧菌Lux R基因核酸序列，设计并合成了一对引物，对溶藻弧菌HY9901株的基因组进行PCR扩增和测序分析，扩增出了520bp的核苷酸片段，该片段与已发表的哈氏弧菌Lux L基因的同源性达95％，而非致病性菌株ZJ017株则扩增不出该基因片段。     

尼罗罗非鱼CD209基因的克隆、表达及功能鉴定

为揭示尼罗罗非鱼模式识别受体CD209的分子结构、组织表达特性并初步了解其免疫功能, 利用聚合酶链式反应 (PCR) 获得尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus (体质量为100 g±5 g) CD209基因的开放阅读框片段 (open reading frame, ORF), 命名为OnCD209; 使用生物信息学软件对其氨基酸序列进行分析,采用RT-qPCR法对健康尼罗罗非鱼的各组织及无乳链球菌刺激后尼罗罗非鱼肝脏、脾脏、鳃和肠道的CD209基因表达量进行分析, 并构建了CD209-pEGFP-N1及CD209-pcDNA3. 1载体, 研究了CD209基因在293T细胞中的定位及在细胞中过表达时对NF-κB酶活性的影响.结果表明: OnCD209的ORF区片段长度为1 383 bp, 可编码460个氨基酸, 预测该蛋白具有一个C型凝集素结构域; 多重氨基酸序列比对及系统进化分析显示, CD209氨基酸序列在各物种间相对不保守, 尼罗罗非鱼与田纹狮子鱼Liparis tanakae的CD209氨基酸序列聚为一支, 亲缘关系最近; RT-qPCR结果显示, 所有组织 (脑、血液、皮肤、肌肉、头肾、肠道、鳃、肝脏、脾脏和胸腺) 中均能检测到OnCD209的mRNA表达, 且在血液中表达量最高; 尼罗罗非鱼在受到无乳链球菌感染后, OnCD209的表达在各组织中呈现相似的变化趋势, 大致呈先在6 h时上调, 后在12、 24 h时下调, 再在48 h后上调的表达模式; 亚细胞定位分析显示, OnCD209定位于细胞膜上; 双荧光素酶报告基因系统检测发现, OnCD209对NF-κB通路的活性显著性激活.研究表明, On-CD209可能参与尼罗罗非鱼对细菌的免疫应答过程及炎症反应过程.     

罗非鱼无乳链球菌传播途径与逃避宿主免疫防御策略

罗非鱼是我国重要的养殖鱼类之一,近年来频繁暴发的链球菌病严重影响了我国罗非鱼养殖业的健康发展。无乳链球菌是罗非鱼链球菌病的主要病原之一,阐明其感染机制和免疫逃避机制,对预防与治疗该病至关重要。对鱼源无乳链球菌的侵染途径、肠道的定植策略以及逃避宿主免疫监视机制等方面的研究成果进行综述,为深入研究无乳链球菌与宿主之间的相互作用提供参考,为罗非鱼链球菌病的综合防控奠定理论基础。     

诺氟沙星盐酸小檗碱预混剂在眼斑拟石首鱼体内的药代动力学和残留消除规律研究

研究诺氟沙星盐酸小檗碱在眼斑拟石首鱼体内的药代动力学和残留消除规律。在水温28±2℃、盐度28条件下,将诺氟沙星(Norfloxacin,NFLX)盐酸小檗碱(Berberine hydrochloride,BBH)预混剂按450 mg/kg的剂量口灌眼斑拟石首鱼后,其血浆、肌肉、肝脏和肾脏中的药物浓度采用HPLC-MS/MS测定,药时数据用DAS3.0软件分析。结果显示:单剂量口灌给药后,眼斑拟石首鱼血浆中NFLX和BBH的药时数据均符合一级吸收二室模型;血药达峰时间(tp)分别为1.20、1.79 h,血药浓度峰值(Cmax)分别为358.40、144.89μg/L,药时曲线下面积(AUC0-∞)分别为8252.80、6454.52μg/(L·h),消除半衰期(t1/2β)分别为43.26、27.30 h;NFLX和BBH在鱼体各组织中的分布较广,灌服给药后,肌肉、肝脏和肾脏中NFLX和BBH的Cmax分别为418.05、230.76μg/kg;1745.94、901.09μg/kg;1143.45、997.09μg/kg,tp分别为1.5和1.5 h、1.5和2.0 h、1.5和2.0 h,AUC0-∞分别为7682.00、5596.30μg/(kg·h);31236.90、19096.85μg/(kg·h);22593.93、37509.17μg/(kg·h);NFLX和BBH在眼斑拟石首鱼体内消除速度较慢,灌服给药后肌肉、肝脏和肾脏的t1/2β分别为33.41、61.81 h;20.44、15.04 h;30.28、23.43 h。按450 mg/kg剂量连续5 d口灌给药后,眼斑拟石首鱼血浆、肌肉、肝脏、肾脏中的NFLX和BBH残留消除半衰期(t1/2)分别为30.24、33.33 h;40.76、61.60 h;38.68、36.96 h;43.77、59.40 h。以10μg/kg为最高残留限量,肌肉作为食用靶组织,在本试验条件下,建议休药期不得少于12 d。     

盐酸氯苯胍在眼斑拟石首鱼体内的药代动力学和残留消除规律研究

在水温(28±2)℃、盐度28条件下,采用30mg/kg的剂量口灌法,用HPLC-MS/MS检测研究了盐酸氯苯胍在体质量为(350.15±5.18)g的眼斑拟石首鱼体内的药代动力学和残留消除规律。结果显示,单剂量口灌给药后,眼斑拟石首鱼血浆中盐酸氯苯胍的药时数据符合一级吸收二室模型,药物在血浆中的达峰时间、血药质量浓度峰值、药时曲线下面积和消除半衰期分别为2.39h、958.78μg/L、33 247.57μg/(L·h)和19.24h;盐酸氯苯胍在肌肉、肝脏和肾脏的血药含量峰值分别为156.72、227.68μg/kg和553.44μg/kg,达峰时间分别为2.0、1.5、2.0h;药时曲线下面积分别4664.04、4897.74、17 228.19μg/(kg·h);消除半衰期分别为19.68、24.33、22.81h。按30mg/kg剂量连续5d口灌给药后,鱼血浆、肌肉、肝脏、肾脏中的药物消除半衰期(t1/2)分别为24.46、35.39、39.60、33.94h。若以10μg/kg为最高残留限量,肌肉作为食用靶组织,在本试验条件下,建议休药期不少于7d。     

克螨特农药对斑马鱼急性毒性的研究

[目的]寻找克螨特用于水生动物斑马鱼病虫害防控的安全浓度.[方法]通过室内急性毒性测定试验,设置7个克螨特浓度梯度来检测其对斑马鱼的致死情况,从而计算其半致死浓度(LC50)与安全浓度(SC).[结果]克螨特对斑马鱼在用药96h后的LC50为0.909 mg/L,置信区间分别为0.876～0.943 mg/L.克螨特对斑马鱼的SC为0.091 mg/L.[结论]该研究为克螨特杀灭斑马鱼寄生虫的用药量提供了重要的数据支持.     

HPLC-MS/MS法同时测定水产品中的诺氟沙星、盐酸小檗碱、盐酸氯苯胍残留

建立了一种同时测定水产品中诺氟沙星、盐酸小檗碱和盐酸氯苯胍残留量的HPLC-MS/MS法。样品经1%甲酸甲醇提取,正己烷脱脂,冷冻、离心后,用高效液相色谱-串联质谱仪,选择反应监测（SRM）、正离子模式进行定性和定量分析。结果表明：诺氟沙星、盐酸小檗碱和盐酸氯苯胍在1~100 ng/mL范围内线性关系良好,线性相关系数≥0.9996,检出限为1 ng/g。诺氟沙星、盐酸小檗碱、盐酸氯苯胍在5、50和100 ng/g三个添加水平下,三种水产品肌肉的平均加标回收率在79.83%~104.06%之间,相对标准偏差在2.97%~9.15%之间。本方法重现性好,灵敏度高,能够满足水产品中诺氟沙星、盐酸小檗碱和盐酸氯苯胍的残留检测和药代动力学的研究需要。     

超声波平板法检测溶藻弧菌HY9901生物被膜的研究

以溶藻弧菌为研究对象,对定量检测生物被膜的超声波平板法进行条件优化,对优化的超声波平板法与平板擦拭法进行比较,并采用银染法进行验证.试验结果表明,优化的超声波平板法的最佳条件为:超声波功率120 W,处理14 min,处理温度25 ℃,优于平板擦拭法.     

甲壳动物亲体营养、能量特点及其脂质营养综述

甲壳动物营养学研究始于20世纪60年代Kagoshima大学Akio Kanazawa博士和耶鲁大学Luigi Provasoli博士,他们分别在各自的实验室开展了最早的甲壳动物营养(crustacean nutrition)研究。Kanazawa博士调整和优化日本对虾的饲料配方,进行了日本对虾的营养需求研究。Provasoli博士则定义了不同淡、海水藻的营养需求,进而研究了以藻类为食甲壳动物的营养需求。20世纪70年代,关于甲壳动物营养的研究成果大量涌