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1.
建立稳定的精子载体法技术体系对家畜的转基因育种等研究具有重要意义.为获得公猪精子与DNA最佳共孵育时间,优化建立猪精子载体法技术体系,本研究通过定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规分析方法等,研究分析猪精子与DNA不同共孵育时间对猪精子活力、活率、DNA转染率、吸附DNA和内化DNA量的影响.结果表明,多聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)包裹的标记DNA与精子共孵育15、30、60和90 min后,随着孵育时间的延长,精子活力和活率有极显著下降(P<0.01),而精子转染率呈极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)上升,吸附外源DNA量和内化外源DNA量也呈上升趋势,但是30 min后不同孵育时间之间差异不显著(P>0.05).此外,随着共孵育时间的延长,与精子转染率提高幅度相比,精子活力和活率的下降幅度更明显.综合考虑精子活力、活率、转染率、吸附DNA量和内化DNA量等参数,猪精子与外源DNA共孵育时间以30 min为最佳. 相似文献
2.
为优化猪精子载体法技术参数,利用荧光定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规检测方法,分析不同DNA转染剂、不同孵育温度和不同形态DNA对猪精子转染外源DNA的影响。结果表明,PEI和TransFast转染剂能极显著提高猪精子转染效果,且PEI优于TransFast,而NanoFect转染剂包裹DNA不能转染精子。随着转染温度的升高,精子的活力和活率均明显下降,而转染率和内化外源DNA量基本保持稳定,而吸附外源DNA量呈下降趋势。环状DNA和线性化DNA在与精子共孵育后,两者的精子活力、活率、转染率和内化外源DNA量差异均不显著,精子吸附线性化DNA量极显著高于环状DNA量。综合分析表明,外源DNA形态对猪精子转染效果无显著影响;PEI和TransFast能够显著提高猪精子转染效果;共孵育温度以17℃为最佳,本结果为开展精子载体法制备转基因猪研究提供了基础试验依据。 相似文献
3.
精子抗原基因在猪生殖道及成熟精子中的表达特性 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】揭示若干精子抗原基因(SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E)在梅山公母猪生殖道及成熟精子中的mRNA时空表达规律。【方法】利用RT-PCR技术分析各基因在生殖道和精子中组织表达谱,利用半定量RT-PCR分析其在初生至150d梅山公猪睾丸中的发育性表达特性。【结果】5个基因在梅山公母猪生殖道组织中呈现不同的表达特性。其中SPAG1在睾丸中表达丰度最高,在精囊腺、前列腺、附睾体、子宫角和输卵管呈现中等丰度表达,而在附睾尾、子宫颈和卵巢的表达信号较弱。SPAG5在睾丸中表达丰度最高,在前列腺、附睾体和子宫颈中表达信号较弱。而SPAG6在睾丸中高丰度表达,在输卵管中呈现中等丰度表达,在子宫角的表达信号很弱。SPAG11C在附睾体和睾丸中高水平表达,而SPAG11E则在附睾体和附睾尾中低水平表达。在成熟精子中只有SPAG11E有mRNA表达。SPAG1、SPAG5、SPAG6和SPAG11C基因在公猪睾丸中发育性表达分析表明,总体上所检测的4个精子抗原基因的表达水平都随着日龄增加而提高,但存在一些差异。其中SPAG1和SPAG11C呈现相似的表达规律,在初生和30日龄时表达相对较低,但在60、90、150日龄都有显著提高(P0.05)。而SPAG5在初生和30日龄时表达也相对较低,在60和90日龄时均有显著提高(P0.05),但150日龄时略有下降,但差异不显著。SPAG6在初生和30日龄时表达水平很低,至60日龄有显著提高(P0.05),90日龄时维持这一水平,而到150日龄时则有显著下降(P0.05)。【结论】SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E在梅山公母猪生殖道组织广泛表达,在睾丸组织中其mRNA表达水平变化与性发育相一致,SPAG11E在精子中存在低丰度mRNA表达。 相似文献
5.
在大约克夏×姜曲海生长肥育猪的饲粮中,添加氨基酸螯合铜、硫酸铜,饲喂结果表明,饲粮中添加氨基酸螯合铜,促进生长肥育猪增重、改善饲料转化率和经济效益均优于硫酸铜,且肥育前期优于肥育后期。肝脏中Cu,Zn,Fe的含量高于背最长肌含量。血浆中3种徽量元素含量各组差异不显著。 相似文献
6.
13只海门山羊、年龄1-2岁,其中5只在发情周期的0(发情当天)-9、11、13、15、17、19、20天,每天08:00-09:00颈静脉导管采血1次。所得血浆置-20℃冰箱保存。另8只羊在采集血样的同时,于发情后2、3、4、5、6、7天,取出子宫置液氮中保存。分别用放射免疫法、H~317β-雌二醇和H~3孕酮交换法测定血浆、子宫内膜胞浆、胞核内17β-雌二醇(E_2)和孕酮(P)及其受体(E_2R、PR)水平。结果表明,发情前1天外周血浆E_2水平最高,为27.0941±3.9328pg/ml。发情当天为18.8265±1.3710pg/ml。发情后期波动在17-19pg/ml之间。黄体中期(5-13天)较低,平均16pg/ml左右。而血浆P水平则发情当天最低,为0.5289±0.0802ng/ml。发情后的整个黄体期不断升高,峰值出现在发情后的第17天,为6.0406±1.3516ng/ml。17天后急骤下降(p<0.001)。发情后2-3天。胞浆E_2和E_2R分别由2.8441上升到3.3646pg/mg蛋白和83.7005上升到259.9745pg/mg蛋白;P和PR水平,分别由0.0892ng/mg蛋白上升到0.2416ng/mg蛋白和168.8552上升到220.6367±39.3077ng/mg蛋白。3天后,虽血浆E_2水平上升,但胞质、胞核E_2及其受体水平下降,胞质PR水平亦下降,而胞核PR水平不断上升。胞质P水平起初下降,5天后与核PR水平同步上升(r=0.9444,p<0.05)。 相似文献
7.
铜是畜禽生长不可缺少的微量元素,畜禽的造血、神经细胞、骨骼、结缔组织和被毛的生长发育都与铜有密切的关系。铜离子亦是多种酶如铜蓝蛋白(铁氧化酶)、过氧化物酶、歧化酶、细胞色素氧化酶等的重要组成 相似文献
8.
毛九德 《上海畜牧兽医通讯》1992,(4):35-36
1955年Dr.Braude首先发现高浓度铜日粮具有促进猪生长的作用,此后国内外许多研究者对铜的作用及其代谢等进行了广泛的研究.现将铜对猪的日增重、饲料转换效率和胴体品质的影响及其毒性等问题进行综述与分析,便于对此进行深入的研究. 相似文献
9.
仔猪补饲木质素铁的效果观察 总被引:2,自引:0,他引:2
仔猪补饲木质素铁的效果观察毛九德,张牧,经荣斌,陈翱,王华明,陈涌(扬州大学农学院动物科学系,225009)张建生(江苏省常熟畜禽良种场)杨龙寿,朱维良,张端云(扬州大学应用化工研究室)铁是仔猪生长发育不可缺少的微量元素,初生仔猪必须补铁,否则就可能... 相似文献
10.
新型铜饲料添加剂的合成汪世新,陈天,经荣斌,崔恒宓,毛九德(江苏农学院基础部,扬州225009)1试验部分猪血粉由泰州肉联厂生产,其它原料为饲料级或化学纯试剂。仪器采用NicoletFT─IR170SX型红外光谱仪(美国),Perkin─Elmer2... 相似文献