猪RBP1和RBP4基因的定位、组织表达谱分析、多态研究及相关分析

类维生素A（维生素A及其代谢产物）在动物的视觉、生长、繁殖、细胞的分化及胚胎发育等方面起重要的作用。利用猪的辐射杂种克隆板，将猪细胞视黄醇结合蛋白基因1（RBP1）和猪血浆视黄醇结合蛋白基因4（RBP4）分别定位在猪13号和14号染色体上。利用半定量RT－PCR方法，对这两个基因在成年五指山猪十二种不同组织（肺、骨骼肌、脾、心脏、胃、大肠、淋巴结、小肠、肝、大脑、肾、脂肪）的组织表达谱进行了分析。在猪的血浆视黄醇结合蛋白基因4中，发现一个单核苷酸多态位点（RBP4-A/G156），并用基于聚合酶链式反应的限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)，对这一多态在莱芜黑猪、五指山小型猪、贵州小型猪、广西巴马小型猪和通城实验猪群中的分布进行了研究。在通城实验猪群中，进行了不同基因型与性状间的关联分析，发现其不同的基因型与胴体直长、胴体斜长、血红蛋白浓度、平均血细胞血红蛋白量、达上市体重日龄高度相关。在猪的生产和育种中，这一多态位点可能会成为有用的分子标记。     

大肠杆菌植酸酶appA2基因联合人MxA基因真核表达载体的构建及表达研究

本研究旨在探讨通过构建同时表达大肠杆菌植酸酶appA2及人抗黏液病毒基因A(Myxovirus resistance gene,MxA)的真核表达载体,比较双基因表达载体和相应单基因表达载体中外源基因的表达效率;从pcDNA-ap-pA2载体上扩增CMV-appA2-BGHpA片段,通过MluI酶切位点连接到pcDNA-MxA载体中,构建重组载体pcDNA-appA-MxA(下称AMP),分别将pcDNA3.1(+)、pcDNA-MxA、pcDNA-appA2及AMP质粒转染猪PK15细胞,经G418筛选后,取细胞通过实时荧光定量PCR测定细胞内appA2及MxA的表达,同时部分细胞通过Westernblot测定细胞内MxA蛋白表达量,采用改进的钼酸铵显色法测定细胞内植酸酶活性;酶切及测序结果表明成功构建了AMP载体;QRT-PCR结果表明,转AMP细胞组MxA表达水平是转pcDNA-MxA组的1.118倍,转AMP细胞组appA2表达水平是转pcDNA-appA2组的1.134倍,上述各组间差异显著(P0.05)。灰度分析结果表明,AMP细胞组细胞内MxA表达量是转染pcDNA-MxA细胞组的1.07倍;植酸酶活性测定试验结果表明,转AMP、pcDNA-appA2细胞组及对照组细胞内植酸酶酶活和对照组平均酶活分别为0.294、0.235及0.082FTU·μL-1,2个试验组间差异不显著,试验组和对照组间差异极显著(P0.01);试验结果表明本研究构建双基因表达载体中外源基因的表达效率比相应单基因表达载体表达效率高,本研究为以后多基因共表达及制备多基因转基因动物奠定了基础。     

猪肌肉发育调控和高瘦肉率基因改良猪的研究进展

猪肉的产量和质量与肌肉发育过程紧密相关。肌肉发育包括胚胎期肌纤维的形成、出生后肌纤维的发育和成年期肌肉的再生等步骤,该过程受到转录水平、转录后水平及通路水平等多层次的网络调控。本文以猪肌肉发育过程为切入点,重点讨论了调控猪肌肉发育的分子基础和高瘦肉率基因改良猪的研究进展,为进一步培育优质猪肉和高瘦肉率猪品种提供了参考。     

五指山小型猪近交系培育与遗传资源创新

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所二十多年来,利用2头五指山小型猪(Sus scrofa)(Wuzhishan mini-pig,WZSP),采用近交繁育,培育出近交系,最高已获得近交F22,并进行开发应用。对WZSP近交系全基因组测序并与人(Homo sapiens)、短尾猴(Macaque mulatta)和大鼠(Rattus norvegicus)比对,初步分析发现,该近交系全基因组具有较高的纯合度和特异的分子遗传特征,不仅证明了我国实现遗传资源创新培育近交系的可靠性,而且证明该近交系猪是人类理想的"替难者"。实现我国小型猪遗传资源创新的培育目标,取得了一定的经济和较大社会效益,有着重要的现实和历史意义。     

猪TAF7基因的克隆、染色体定位和组织表达谱分析

 【目的】通过对猪TAF7基因初步的研究，为猪分子遗传育种提供基础分子生物学信息，为猪的遗传育种提供分子标记。【方法】以五指山猪为研究对象，克隆TAF7基因，分析该基因结构特点，然后利用IMpRH（the INRA-University of Minnesota porcine radiation hybrid，法国农业科学院-明尼苏达大学的辐射杂种克隆板）分析该基因在猪染色体上定位信息，利用半定量RT-PCR方法，分析该基因在成年五指山猪16个不同组织（心脏、背肌、淋巴、脾脏、肝脏、肾脏、肺脏、子宫、睾丸、胃、小肠、大肠、卵巢、胸腺、脑、脂肪）的表达谱信息。【结果】克隆得到长1 701 bp的五指山猪TAF7基因序列，其中包括1 050 bp完整CDS（Coding Sequence，编码序列）区域，分析表明其编码含349个氨基酸的蛋白质。利用IMpRH分析结果表明，猪TAF7基因与分子标记SW1879和IL4（interleukin-4，白细胞介素-4）紧密连锁，LOD（Limit of Detection，检测极限）值分别为6.69和6.15。组织表达谱分析结果显示该基因在大多数组织中均有表达，其中在睾丸表达量较高，而在心脏、背肌中表达很低。【结论】猪TAF7基因5’UTR中有一个短的内含子，而在该基因CDS区域没有内含子。猪TAF7蛋白序列与人TAF7蛋白序列的相似性较高，二者在生物系统发育树中的距离最接近。猪TAF7基因在大多数组织中均表达，在猪睾丸中表达量较高，证实它调节目的基因转录具有广泛性。     

一种自发胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞模型构建

本研究旨在突变3T3-L1细胞葡萄糖转运蛋白4(GluT4)的基因序列,造成GluT4功能障碍,从而获得一种稳定、自发胰岛素抵抗的脂肪细胞模型。利用CRISPR/Cas9技术对3T3-L1细胞的GluT4编码区进行定向切割,通过流式细胞术和基因测序筛选稳定突变的细胞株;使用CCK-8法检测所筛选细胞株的增殖活力;对细胞进行成脂诱导分化,油红O染色以判断细胞成脂分化能力;以胰岛素刺激下葡萄糖摄入量确定细胞对胰岛素的抵抗程度;qPCR和Western blot检测胰岛素抵抗细胞成脂分化过程中关键基因的表达。结果表明:第九外显子处13 bp的缺失导致3T3-L1细胞GluT4蛋白功能障碍,这一突变不影响细胞的增殖活力;成脂诱导分化过程中,该细胞株表现出严重且稳定的自发胰岛素抵抗,葡萄糖摄取受阻,与成脂分化和脂质合成相关的基因表达显著或极显著下调(P0.05或P0.01)。综上所述,GluT4功能障碍阻碍了脂肪细胞响应胰岛素的葡萄糖摄取,从而造成脂肪细胞产生自发的胰岛素抵抗;本研究从多个角度对该胰岛素抵抗脂肪细胞模型进行检测分析,验证了其稳定性和有效性,为脂肪营养代谢和胰岛素抵抗相关研究提供了新材料。     

一个剑白香猪实验群体的遗传多样性

选用荧光标记的19个微卫星DNA标记,通过PCR扩增和ABI3700遗传分析仪基因分型,对贵阳中医学院实验猪场的一个剑白香猪群体进行了遗传多样性研究.结果表明,在19个微卫星位点中,仅S0128位点存在哑等位基因(Null allele),SW951和S0218两个位点极显著地偏离哈德一温伯格平衡,其他位点皆处于哈德-温伯格平衡状态;该剑白香猪实验群体的平均等位基因数、平均多态信息含量和平均期望杂合度分别是3.680、0.452和0.521.在近期内没有发牛过瓶颈效应.并用STRUCTURE软件对所研究的群体进行了群体结构的分析,表明作为实验猪群的剑白香猪群体,虽经多年的培育,仍然保持了较丰富的遗传多样性.     

青年专家文库

杨述林，博士，1975年生，四川省天全县人，2004年6月毕业于华中农业大学。获动物遗传育种专业博士学位，硕士期间主要从事中国地方猪品种遗传多样性研究，研究结果发表在法国杂志《Genetics Selection Evolution》；博士期间通过计算机模拟研究了中国培育猪品种用于QTL精细定位的效率，     

生长因子EGF、bFGF对猪孤雌胚体外发育的影响

在胚胎发育的不同阶段，分别在培养基中添加EGF和bFGF，研究EGF和bFGF对猪孤雌胚体外发育的作用。结果表明：在1细胞阶段添加EGF或bFGF，添加EGF能够显著提高孤雌胚的卵裂率（P〈0．05）；2～4细胞阶段添加EGF和bFGF，添加EGF组和添加bFGF组的囊胚率都显著高于对照组（P〈0．05），而添加bFGF组的囊胚率和囊胚细胞数都略高于对照组和添加EGF组。说明EGF和bFGF有利于猪孤雌胚的体外发育，而且，bF-GF能够通过提高囊胚细胞数而提高猪孤雌胚的质量。     

精子载体法获得转人her2基因猪

将带有外源基因的载体酶切纯化后与去精清的猪新鲜精液按比例混合，17℃静置处理使外源DNA进入精子头部，通过人工授精使受体母猪怀孕后产下20头仔猪，经PCR特异性片段扩增，特异片段序列测定和比对，共4头PCR结果为阳性。初步证明人her2基因已在猪染色体上整合，其整合率约为20％。本研究利用精子载体法成功获得了转基因阳性猪，为大动物的转基因研究提供了理论与实践的参考。