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1.
建立稳定的精子载体法技术体系对家畜的转基因育种等研究具有重要意义.为获得公猪精子与DNA最佳共孵育时间,优化建立猪精子载体法技术体系,本研究通过定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规分析方法等,研究分析猪精子与DNA不同共孵育时间对猪精子活力、活率、DNA转染率、吸附DNA和内化DNA量的影响.结果表明,多聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)包裹的标记DNA与精子共孵育15、30、60和90 min后,随着孵育时间的延长,精子活力和活率有极显著下降(P<0.01),而精子转染率呈极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)上升,吸附外源DNA量和内化外源DNA量也呈上升趋势,但是30 min后不同孵育时间之间差异不显著(P>0.05).此外,随着共孵育时间的延长,与精子转染率提高幅度相比,精子活力和活率的下降幅度更明显.综合考虑精子活力、活率、转染率、吸附DNA量和内化DNA量等参数,猪精子与外源DNA共孵育时间以30 min为最佳.  相似文献   
2.
为了比较SB(Sleeping Beauty)、PB(PiggyBac)和Tol2 3种转座子介导的基因捕获效率,本研究构建了含有3种转座子的启动子捕获载体pT3-PST-Pro-Trap。将此载体分别和SB、PB和Tol2 3种转座酶mRNA按照质量比1.0∶1.5的比例注射斑马鱼(Danio rerio)一细胞胚胎,通过检测绿色荧光蛋白报告基因(GFP)的表达水平比较不同转座子的捕获效率。结果显示,3种转座子介导的启动子捕获载体能够高效率捕获内源基因启动子,进而驱动GFP的表达;注射后培养36 h时的SB、PB和Tol2捕获效率分别为24.32%、30.70%和18.87%,PB捕获效率显著高于SB和Tol2(P0.05);3种转座子在60 h时的捕获效率均高于36 h的,其中SB和Tol2组差异达显著水平(P0.05),而PB组差异不显著(P0.05)。本研究结果表明,SB、PB和Tol2转座子介导的基因捕获技术可以用于脊椎动物高通量功能基因筛选,为功能基因研究提供有效新方法。  相似文献   
3.
为优化猪精子载体法技术参数,利用荧光定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规检测方法,分析不同DNA转染剂、不同孵育温度和不同形态DNA对猪精子转染外源DNA的影响。结果表明,PEI和TransFast转染剂能极显著提高猪精子转染效果,且PEI优于TransFast,而NanoFect转染剂包裹DNA不能转染精子。随着转染温度的升高,精子的活力和活率均明显下降,而转染率和内化外源DNA量基本保持稳定,而吸附外源DNA量呈下降趋势。环状DNA和线性化DNA在与精子共孵育后,两者的精子活力、活率、转染率和内化外源DNA量差异均不显著,精子吸附线性化DNA量极显著高于环状DNA量。综合分析表明,外源DNA形态对猪精子转染效果无显著影响;PEI和TransFast能够显著提高猪精子转染效果;共孵育温度以17℃为最佳,本结果为开展精子载体法制备转基因猪研究提供了基础试验依据。  相似文献   
4.
猪CatSperB和CatSperG基因的克隆、表达及生物信息学   总被引:1,自引:1,他引:0  
 【目的】揭示猪CatSperB和CatSperG基因的存在、蛋白的结构特征、进化关系及时空表达特性。【方法】利用电子和分子克隆技术鉴定猪CatSperB和CatSperG基因全长cDNA,并利用定性RT-PCR和荧光定量RT-PCR进行CatSperB和CatSperG基因的时空表达研究。【结果】①分别获得了3 508 bp CatSperB和3 715 bp CatSperG电子转录子,分别包含3 330和3 483 bp开放阅读框,并经TA克隆测序验证,其CDS序列与人、牛、马和狗等的CatSperB和CatSperG基因的序列相似性在80%以上;②CatSperB分子质量为125.79 kD,为稳定蛋白;CatSperG分子质量为133.40 kD,为不稳定蛋白;③CatSperB和CatSperG 都包含 7 个通道蛋白保守的跨膜结构域,CatSperG蛋白C端含一个超螺旋结构,而CatSperB蛋白无明显的超螺旋结构信号;猪CatSperB和CatSperG与牛、狗和马的CatSperB和CatSperG蛋白同源关系较近,与人和小鼠的同源关系较远;④RT-PCR分析表明,CatSperB和CatSperG基因主要在睾丸中表达,但CatSperB在其它组织也有表达信号;⑤CatSperB和CatSperG基因mRNA表达水平在猪性发育的重要阶段,精子发生(60日龄)、初情期(90日龄)和性成熟(150日龄)前后都有显著提高(P<0.05)。【结论】获得了猪CatSperB和CatSperG基因的cDNA克隆及其一系列生物信息学参数,揭示了CatSperB和CatSperG蛋白含7个保守的跨膜结构域及不同物种间的进化关系,证实CatSperB和CatSperG基因主要在睾丸表达,且其mRNA表达变化与公猪的性发育相一致。  相似文献   
5.
云南烟草害虫天敌种类   总被引:5,自引:0,他引:5  
 1993~1996年,云南在全省烟区开展了烟草昆虫的系统调查研究,近年又调查补充,共查到烟草害虫天敌126种。其中天敌昆虫类涉及到8个目23个科114种,蛛形纲蜘蛛目有7个科11种,两栖纲1目一种。简述各种类。供科研和生产应用。  相似文献   
6.
针对王草在干热区的种植优势,在云南元谋开展了利用王草经过加工、发酵试验,通过3种粒径3种处理和3种反应程度组合,得到27种不同的人工草粉基质。并测定了基质的相关特性。这些基质在育苗生产中具有一定的影响力:即资源的可持续利用性,它在一定程度上缓解了不可再生资源泥炭的负面影响。  相似文献   
7.
<正> 血凝抑制反应(HI试验)是监测鸡新城疫抗体水平的有效方法.由于设备简单,技术操作方便,只要掌握判定标准,乡兽医站也能应用自如.对指导专业养鸡户合理安排鸡新城疫免疫及控制该病的发生起  相似文献   
8.
斯美地熏蒸土壤防除烟草苗床杂草和病虫害研究   总被引:5,自引:1,他引:4  
田间试验示范和室内外测定证明:32.7%斯美地50ml/m^2能够有效防除烟草苗床常见杂草,其除草效果达86.1%(与溴甲烷效果相当),比手工除草节约用工率84.3%,斯美地50.75,100ml/m^2的除草效果差异不显著,其用药量以50 ̄75ml/m^2为宜。  相似文献   
9.
为了比较和探索SB(sleeping beauty)、PB(piggyBac)和T012 3种转座子介导下的细胞质显微注射法在小鼠(Mus musculus)和斑马鱼(Danio rerio)上的转基因效率,本研究将包含3种转座子的重组载体pT3-PST-CAG-GFP分别与3种转座酶表达载体以1:1质量比混合,显微注射至小鼠和斑马鱼受精卵细胞质,经体外培养后在胚胎发育不同时期用荧光显微镜检测报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性率,结果显示,在培养至4 Ed(96 h)(Ed: embryo day,胚胎发育的天数)的小鼠胚胎中,PB转座子介导的GFP转基因阳性率最高,达52%(N=281),显著高于SB的47% (N=328)和To12的36% (N=273)(P<0.05);而受精后36和60 h (hour past fertilization,hpf)斑马鱼胚胎中,荧光显微镜检测表明,To12的GFP阳性率分别为36%(N=677)和37%(N=685),显著高于SB(28% N=691和27% N=708)和PB(30% N=687和32% N=675)(P<0.05);转座子介导的细胞质显微注射可获得较高的转基因效率,且转座子活性具有物种差异性,在哺乳动物胚胎中PB转座子的基因转移效率最高,而在鱼类胚胎中To12转座子的基因转移效率最高.本研究为提高动物转基因效率研究提供重要参考资料.  相似文献   
10.
<正> 我乡盛产油菜,春暖花开之际蜜蜂齐拥采蜜。但天气突然变化,特别是天气闷热欲下雨时,蜜蜂常对有异汗臭味的耕牛刺蜇,引起中毒。作者曾遇三例,经治疗均获得满意效果。现介绍如下: 症状被刺蜇局部出现疹样肿块,特别是头、脸、眼、耳根、尾部有时连成较大面积的肿块。初期病畜表现烦躁,起卧不安,食欲减少,呼吸促迫30次/分,心跳加快65次/分,体表温度增温,疼痛明显。中、后期精神不振,流涎,流泪,腹泻,小便发黄,肚腹虚胀,食欲、反刍停止,肌肉颤抖,步态不稳,心律不齐,肿块部有淡红色浆液渗出。  相似文献   
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