兽药添加剂喹乙醇的生态毒理学效应研究

采用水生生物斑马鱼(Daniorerio)、鲤鱼(Cyprinuscarpio)和土壤生物赤子爱胜蚓(Eiseniafoetida)作为生物材料,通过斑马鱼急性毒性试验、斑马鱼胚胎发育试验、鲤鱼肾细胞单细胞凝胶电泳试验、蚯蚓急性毒性试验、蚯蚓生化毒性试验以及蚯蚓体腔细胞单细胞凝胶电泳试验,对兽药添加剂喹乙醇分别从生物个体、细胞和分子水平进行了生态毒理学效应研究。急性毒性试验结果表明,喹乙醇实验浓度范围内对斑马鱼和蚯蚓的急性毒性均不大。胚胎发育试验结果表明,喹乙醇对斑马鱼胚胎的72hEC50为221.20mg·L-1,具有明显致畸效应。蚯蚓生化毒性试验表明,喹乙醇能促进蚯蚓体内SOD酶活性,并呈现一定剂量-效应关系,但对纤维素酶影响不明显,单细胞凝胶电泳试验结果表明,喹乙醇具有一定遗传毒性,能引起鲤鱼肾脏细胞和蚯蚓体腔细胞DNA损伤,与空白对照相比有显著差异,并呈现出一定剂量-效应关系。     

不同毒力马耳他种布鲁氏菌体内外诱导细胞凋亡的研究

为探究不同毒力马耳他种布鲁氏菌能否在体内外诱导凋亡以及诱导凋亡程度的差异,本研究将M28(强毒株)和M5-90(疫苗株)以MOI=100感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,利用激光共聚焦显微镜观察和流式细胞术检测凋亡产物caspase3/7。结果显示:M5-90和M28在体外细胞水平均能够诱导RAW264.7细胞凋亡,且M5-90促进细胞凋亡能力高于M28。然后将M28和M5-90以1×10~6 cfu的剂量接种BALB/c小鼠,分别在接种后3 d、7 d和42 d迫杀小鼠,取小鼠脾脏组织制备切片,经HE染色后进行形态学观察,利用透射电镜观察并通过Tunel法检测细胞凋亡。结果显示M5-90和M28感染后均可诱导小鼠脾脏细胞凋亡,凋亡细胞主要为T淋巴细胞。本研究为布鲁氏菌诱导宿主细胞凋亡和布鲁氏菌致病机理研究奠定了基础。     

牛传染性鼻气管炎间接ELISA诊断方法的建立

以牛肾细胞系（MDBK）培养牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）Bartha Nu/67株,经超速离心纯化病毒,再经超声破碎处理后作为诊断抗原,建立了检测牛血清IBRV抗体的间接酶联免疫吸附试验.该ELISA的判定标准为：血清D490 nm值大于0.369的判为阳性,小于0.295的判为阴性,在0.295与0.369之间的为可疑.特异性和重复性试验结果表明,该方法特异性高、重复性好.与法国进口ELISA抗体诊断试剂盒比较,其符合率为96.3%;与中和试验比较,符合率为95.8%,且敏感性更高.应用该诊断方法调查了我国部分地区IBRV的感染情况,结果显示,这些地区的IBRV感染率为67.1%.     

牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立

经DNAstar分析，据牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）全基因序列设计合成gB基因的特异性引物，以构建的pGM-T-gB为模板，PCR扩增IBRVgB蛋白192-266位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆，酶切鉴定并测序鉴定后，定向插入pET32a表达载体中，转化表达菌BL21。SDS-PAGE电泳分析表明，诱导表达产物以包涵体和可溶形式存在，大小约为29．2ku，与预测值相符。亲和纯化后重组蛋白浓度为2．000mg／mL，纯度为79．2％。间接ELISA检测证明，表达蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原，建立了间接ELISA诊断方法。确定的抗原包被浓度为50／zg／mL，血清的最佳稀释度为1：40，阳性标准定为s／e〉0．395。交叉试验表明对牛流热（BEV）、牛肺疫（CBPP）、牛病毒性腹泻（BVD）、牛结核（BTB）、牛副结核（PBB）以及牛赤羽病（BAD）等其它6种疾病阳性血清不发生交叉反应。与中和试验相比较，特异性、敏感性和符合率分别为83．3％、90．9％和88．9％；与进口法国IBRV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较，特异性、敏感性和符合率分别为92％、92．7％和92．5％。上述结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性，显示了良好的应用前景。     

禽致病性大肠杆菌生物被膜的形成及其影响因素

为确定影响细菌生物被膜(BF)的形成条件,本研究采用BF体外定性观察和定量粘附性检测两种方法对1株野生禽致病性大肠杆菌(E.coli)在不同环境(培养时间、培养基类型、引导载体类型、营养条件)下产生BF的差异进行了研究。结果显示野生禽致病性E.coli其宿主体外BF最适形成条件是培养时间为48h,培养基为5%TSB、引导载体为平底96孔聚苯乙烯微孔板(美国Corning Costar)。其生长周期为8h时开始起始粘附、24h形成若干微菌落、36h微菌落粘连、48h形成完整的BF、72h细菌脱落开始下一轮的BF生长。糖分和适量的无机盐都可以在一定程度上促进BF的形成和被膜内细菌的粘附性提高。该研究表明禽致病性E.coliBF的形成周期,并为抑制其形成提供了实验依据。     

牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白研究进展

牛传染性鼻气管炎病毒能引起牛多系统感染,是导致养牛业重大经济损失的一种重要病原。该病毒是有囊膜的双股DNA病毒,病毒囊膜蛋白在病毒致病中发挥了重要作用,其中gB蛋白对病毒的吸附、侵入、复制和细胞间扩散是必需的,可刺激机体产生大量的中和抗体。对gB蛋白的研究不仅是理解病毒分子生物学功能特征的需要,而且在临床诊断和疾病预防中也具有重要意义。文章就gB蛋白的结构特征、生物学功能以及在免疫学和诊断方面的研究做了综述,并对上述方面进行了展望。     

检测马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区抗体间接ELISA诊断方法的建立

本试验以纯化的重组马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区蛋白作为诊断抗原建立了间接ELISA诊断方法，确定其最佳工作条件为每孔包被重组抗原2仙g，兔抗马IgG酶标抗体以1：4000，血清以1：40倍稀释，底物作用时间为10 min；判定标准为P／N值大于2，且OD值大于0．2的血清为阳性，否则判为阴性。本试验所建立的诊断方法与琼扩试验以及以琼扩抗原作为包被抗原的ELISA试验进行了比较，表明该诊断方法敏感性更高。特异性和重复性试验表明该诊断方法具有良好的特异性和重复性。通过对4匹马传贫驴白细胞弱毒疫苗免疫马血清抗体的检测，发现均在接种2周后可产生抗马传贫病毒跨膜蛋白主要免疫决定区相应抗体。此抗体一直持续存在到本试验检测的免疫后17个月，且效价较高。，用此方法检测203份马血清样品，其中161份呈抗体阳性，还检测了马传贫自然感染马血清93份，结果全部为阳性。