溶菌酶的分离纯化与活性测定方法的研究进展

溶菌酶是能够溶解细菌细胞壁的天然碱性蛋白质的总称。弗雷明首次在人的眼泪中发现溶菌酶,在近90年的发展历程中,它的结构、性质和功能被逐个认清。1936年,莫尔首先对溶菌酶进行了分离、纯化。随后在研究者的不断努力下,溶菌酶的分离、纯化和活性测定方法得到不断完善。文章综述了溶菌酶的分离、纯化和活性检测方法,以期对本领域的研究者提供该方面的概貌。     

藏绵羊溶菌酶1基因的克隆、原核表达及生物信息学分析

试验旨在研究藏绵羊溶菌酶(lysozyme,LZM)1基因在瘤胃、瓣胃、皱胃、气管、肝脏和肾脏各组织中的表达情况、进化关系及抑菌活性。采用RT-PCR技术克隆藏绵羊LZM1基因,定量PCR检测LZM1基因在瘤胃、瓣胃、皱胃、气管、肝脏和肾脏中的表达情况,并将该基因的氨基酸序列与普通牛胃LZM等氨基酸序列进行比对,根据邻位连接法构建系统进化树;将该基因插入pET-32a质粒后构建得到pET-32a-LZM1重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并诱导表达,SDS-PAGE法鉴定表达产物;采用比浊法测定LZM1蛋白的活性;采用琼脂糖平板扩散法研究异源表达蛋白的抑菌活性。结果表明,从藏绵羊瘤胃、瓣胃、皱胃、气管、肝脏和肾脏各组织中成功克隆藏绵羊LZM1基因,其在瘤胃、瓣胃、皱胃、气管、肝脏和肾脏中均有表达,在皱胃中表达量最高;其氨基酸序列与普通牛胃LZM(GenBank登录号:NM_001080339.1)序列的同源性最高(96%);重组蛋白LZM1分子质量约为35ku;其比活力约为400U/mL;该重组LZM1对金黄色葡萄球具有良好的抑菌活性。     

基于DPSIR模型湖南省生态安全评价及安全格局分析

运用驱动力—压力—状态—影响—响应（DPSIR）模型，通过构建湖南省生态安全指标评价体系，系统研究了1989-2012年间湖南省各区域生态安全状况，探讨诱发其变化的各种因子及其相互作用机制。结果表明，湖南省生态安全状况整体呈现从安全状态降为轻度预警状态的趋势，生态安全指数由0.550降至0.420，其中驱动力指数由0.140降至0.052，压力指数由0.204降至0.007，状态指数由0.092降至0.044，影响指数由0.074上升至0.220，响应指数由0.057上升至0.098。就安全格局而言，处于轻度预警状态的城市比例增大，13个城市中处于轻度预警状态的城市达9个，湘中、湘南与湘西地区生态安全度要高于长株潭地区与湘北平原湖区。生态安全状况的变化是自然与人为因素双重作用的结果，城市扩张、工农业污染、自然灾害及对资源不合理的开发是影响湖南省生态安全的关键性因素。因此，针对当前生态安全现状，从城市规划，耕地保护，经济结构调整和矿山管理4个方面提出了提升该区域生态安全的对策。