仔猪传染性胸膜肺炎母源抗体消长规律的研究

为制定合理的猪传染性胸膜肺炎免疫程序和确定仔猪的首免日龄,试验检测产前接种猪传染性胸膜肺炎多价疫苗(Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型)母猪所产仔猪传染性胸膜肺炎母源抗体消长的规律。结果显示,仔猪Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型传染性胸膜肺炎母源抗体整体上随日龄的增加而逐步降低,在42~50日龄(Ⅰ型)、28日龄(Ⅶ型)处于抗体保护临界值,抗体阳性率低于合格率;至70日龄(Ⅰ型)、60日龄(Ⅶ型)、35日龄(Ⅱ型)全部转阴。由结果得出,仔猪Ⅰ型传染性胸膜肺炎疫苗的首免时间应在42~50日龄,Ⅶ型在28日龄左右为宜。而仔猪Ⅱ型传染性胸膜肺炎母源抗体的水平和阳性率较低,不能对仔猪产生较好的保护,且多价猪传染性胸膜肺炎疫苗的首免时间不统一,提示还需深入研发猪传染性胸膜肺炎多价疫苗,才能使其达到更好的免疫效果。     

Toll样受体的研究进展

Toll样受体(TLRs)在机体的先天性免疫和获得性免疫中作为重要的调节器对病原体的识别发挥着非常重要的作用.TLRs作为一类病原模式识别受体在免疫应答和炎症反应中发挥着重要作用,TLRs信号失调会引起多种疾病.在机体的免疫系统中,先天性免疫作为免疫应答的始动环节,通过抗原递呈细胞（APC）主要以MHC2抗原肽复合物的形式递呈给T细胞来启动获得性免疫应答.获得性免疫应答的启动需要双信号,即特异性抗原的刺激和来自APC的共刺激信号.通过疾病模型发现,TLR信号级联的靶向作用将会给传染性疾病带来新的治疗方案.文章就TLRs与先天性免疫的关系、TLRs的配位子及TLRs在传染性疾病治疗中的靶向作用进行了简单概述.     

五指山猪和杜洛克猪全基因组选择信号差异分析

旨在探究五指山猪和杜洛克猪免疫和脂质代谢相关基因的选择信号差异。本研究从海南国家级五指山猪保种场采集30头4月龄健康(10公,20母)五指山猪的耳组织进行全基因组重测序(whole genome sequencing,WGS),从NCBI数据库下载29头杜洛克猪全基因组重测序数据(SRA：PRJNA378496);通过生物信息学方法分析59个样本WGS数据的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNPs),进行SNPs过滤,定位SNPs在基因组的位置,分析其结构特征和基因型频率,并注释对应基因的功能;使用XP-CLR方法筛选五指山猪基因组受到强烈选择的区域,分析两个品种相关通路基因的功能差异。结果表明,五指山猪平均每个样本共筛选到36 961 902个SNPs位点,内含子区域分布最多,平均每个样本16 729 364个,约占45.26%,编码区(起始、终止密码子)平均有2 073个SNPs;五指山猪受选择的基因组区域主要集中在免疫、代谢和神经功能相关通路;免疫反应通路中,9个基因(TGFBR2、IL26、IL15、BMPR2、TNFSF15、TNFSF4、TNFSF8、ACKR4、TNFRSF11B)功能区域SNPs位点在五指山猪中只存在一种突变纯合基因型,而在杜洛克猪大部分个体中存在3种基因型(野生纯合基因型、杂合子、突变纯合基因型),其中野生纯合基因型比例最高;脂类代谢通路中,关键调节基因IRS2、PRKG1、ADCY5的基因型频率与免疫反应基因类似。在五指山猪中突变纯合基因型比例为100%,在杜洛克猪中野生纯合基因型所占比例为48%~93%(14/29-27/29)。本研究筛选出与五指山猪免疫性状相关的候选基因9个、与脂类代谢相关的候选基因3个,发现五指山猪免疫、代谢和神经功能相关基因的受选择程度强于杜洛克猪,为揭示五指山猪特色性状形成的分子机制提供参考。     

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因串联表达载体的构建

为了构建Ⅰ型鸭肝炎病毒双拷贝VP1基因的原核表达质粒,试验采用RT-PCR技术扩增鸭肝炎病毒VP1基因,将其连接到克隆载体pGEM-T Easy中得到重组克隆质粒pGEM-T-VP1,阳性克隆质粒经鉴定正确后,分别用BamHⅠ、XholⅠ、BglⅡ进行酶切,重组后得到pGEM-T-2VP1,然后将双拷贝VP1基因亚克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,得到重组质粒pET-30a(+)-2VP1。结果表明:得到了含有目的基因的阳性克隆。说明Ⅰ型鸭肝炎病毒双拷贝VP1基因原核表达质粒构建成功。     

检测猪戊型肝炎病毒的荧光定量PCR方法的建立

根据GenBank中猪戊型肝炎病毒的ORF2核苷酸序列的保守区域设计合成一对特异性引物,建立了一套SYBRGreen Ⅰ荧光定量PCR检测猪源戊型肝炎病毒(swHEV)的方法,并评价了该方法的灵敏度、稳定性和特异性,同时与常规的RT-nPCR进行对比分析.结果表明,建立标准曲线的相关系数为0.998,斜率为-3.039,Ct值变异系数(CV)在0.17％～1.41％之间,有良好的稳定性.同时在检测猪群常见病中显示出很好的特异性,并且比RT-nPCR更灵敏,适合于swHEV的检测.     

PCV2海南株全基因组的克隆与序列分析

为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)海南株的分子特征,采用PCR方法从疑似PCV2感染的猪组织病料中扩增基因并进行序列分析.结果表明:8株PCV2海南株均属于PCV2b型,其中7株为PCV2b-1C亚型,1株为PCV2b-1A/1B亚型.PCV2海南株的ORF2基因的长度均为705 bp,编码234个氨基酸.Cap蛋白的抗原表位区发生了一定的变异.8个PCV2海南株的ORF2基因之间核苷酸序列相似性及推导的氨基酸序列相似性分别为95.3％～99.7％和93.6％～100％.海南株与国内分离株(AY682994,AF381175,JX945577,JX682407,AY180397)的核苷酸序列相似性为91.0％～99.9％,推导的氨基酸相似性为91.0％～99.6％.海南株与国外分离株(NC_005148,JQ994268,KJ187306,AF201307,AF454546,AY754020)的核苷酸序列相似性为90.0％～97.0％,推导的氨基酸相似性为88.0％～97.9％.海南株与疫苗株SH的核苷酸序列相似性为98.2％～100.0％,推导的氨基酸相似性为94.9％～100.0％.海南株与疫苗株LG的核苷酸序列相似性为90.6％～91.7％,推导的氨基酸相似性为89.7％～91.0％.这些数据为海南地区PCV2的防控和疫苗株选择提供了理论依据.     

LAMP技术在鸭病原微生物检测中的应用

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近年来新出现的一种核酸扩增技术,具有敏感性高、特异性好、视觉直观检测、对仪器要求低、价格便宜等优点。目前,已被广泛应用于多种病原微生物的检测。本文综述了LAMP技术在9种鸭病原微生物检测中的应用,以供鸭病原微生物的快速检测借鉴。     

4株PRRSV GP5蛋白编码序列的序列测定和特性分析

针对PRRSV ORF5基因组设计了1对特异性引物,利用RT-PCR的方法,对在南方地区分离的4株PRRSV ORF5基因进行了基因扩增,克隆到pMD18-T载体后测序,获得了4株PRRSV ORF5基因全长603bp的核苷酸序列。利用生物信息学软件对4株PRRSV ORF5基因序列进行了遗传进化分析,结果显示GD1、GD2、GD3、GD4株与美洲型参考株(VR-2332)的核苷酸序列同源性分别为87.1%、87.2%、87.1%和86.9%。利用系统进化树分析表明GD1、GD2、GD3、GD4株均属于美洲型。进一步采用序列分析软件对病毒结构蛋白推导糖基化位点比较,结果表明不同毒株GP5糖基化位点在基序和位置上均有所不同,这可能与毒株的毒力、免疫原性的差异相关,这些为更好地了解PRRSV的分子流行病学特征和抗原变异规律提供依据,同时为研制基因工程疫苗奠定了基础。     

浅谈鹅病的综合防治

目前制约养鹅业发展的主要病害有小鹅瘟和鹅的鸭瘟等.这些疫病严重影响了鹅的健康和养鹅业的生产效益,对规模化饲养鹅的影响尤为严重.由于养鹅户所在的环境各不相同,养殖的规模大小不一,加上鹅只还存在着个体体质和免疫能力上的差异,有时单靠其中的一种或几种方法很难达到理想的防治效果.因此,要预防各类疾病的发生,就必须坚持"预防为主、防重于治"的原则,采取综合性防治措施,才能取得预期效果.具体应做好以下几个方面:     

FMD、CSF、PRRS3种疫苗不同组合对定安黑猪的免疫效果评价

为探索科学免疫接种方法,确定合理有效的免疫程序,以减少生猪的疫苗接种次数及应激反应,笔者设计了相关试验,以验证多重免疫同时进行的可行性。结果表明：采用猪口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病三种疫苗同时分点注苗组的效果到达了预期目标,可以推广应用。