农杆菌介导法获得大量转双价抗虫基因水稻植株

构建含Bt杀虫基因cryIA(c)和豇豆胰蛋白酶抑制剂基因CpTI的双价抗虫转基因载体PCAM-Bt-CpTI，并用于农杆菌（Agrobacterium tumefaciens)介导法对粳稻品系“浙大19”遗传转化，约2000块盾片愈伤组织与农杆菌共培养后，得到了约1300块潮霉素抗性愈伤，从中分化抗性再生苗约1500株，对不同抗性愈伤来源的70个T0代再生株进行PCR及PCR-Southern检测，62株为转cryLA(c)和CpTI双价抗虫基因植株，阳性植株比例为88.6%，抗虫鉴定表明，3个转基因T1代株系对二化螟有很高的毒性。     

一种不依赖于无菌培养的拟南芥活体转基因种子筛选方法

    拟南芥活体转基因种子的筛选仍主要采用无菌培养技术,存在操作麻烦,容易污染而造成转基因材料损失等问题.本研究在传统组织培养筛选技术的基础上,通过去除原培养基成分中对种子发芽和筛选不必需的蔗糖和有机成分,降低大量元素的浓度,缩短筛选时间,从而免除了传统转基因种子筛选中培养基和种子消毒的繁琐步骤,建立了一种不依赖于无菌培养的转基因种子筛选方法.与无菌培养筛选比较,筛选效果相同,但简化了试验步骤,提高了筛选操作的可靠性.     

不同倍性水稻植株茎解剖结构比较研究

    为研究倍性变化对水稻植株茎结构的影响,以粳稻FC311和FC322为供试品系,应用流式细胞术从花培后代中鉴定出6份不同倍性的材料(FC311中的单倍体、二倍体及三倍体;FC322中的单倍体、二倍体及四倍体),利用石蜡切片法观察并比较不同倍性植株茎的解剖结构.结果表明:供试材料节间维管束数及大小、茎壁面积、维管束面积通常与倍性的增加有关,显示明显的基因剂量效应;而表皮下和内、外圈维管束鞘的厚壁细胞层数、发育特征及细胞淀粉粒含量等结构和特性,与倍性变化无明显相关;在FC322 四倍体植株第1节间中,还观察到颇为少见的2层厚壁组织结构.     

杂交种在我省烤烟生产上应用前景的探讨

杂交种在我省烤烟生产上应用前景的探讨张宪银（贵州农学院农学系）烟草育种与其他自花授粉作物一样，传统上采用培育纯系品种的杂交育种法，包括常规的品种间杂交育种和抗病育种中采用的远缘杂交。烟草的杂交种利用也早已被尝试过，并在一定程度上取得成功。如美国的白肋...     

NH4＋/NO3-对珍汕胚的愈伤组织诱导和分化的影响

 研究了早籼稻品种珍汕97的七成熟胚和成熟胚诱导愈伤组织及植株再生的条件,通过改变大量元素的配比和培养条件,可较大的提高其愈伤组织诱导及植株再生的频率;发现大量元素对珍汕97的愈伤组织诱导培养有着重要作用,其中氨态氮与硝态氮的比列尤为重要结果表明:7成熟胚和成熟胚在氨态氮与硝态氮的比列在2∶1时诱导效果最好,其愈伤组织的分化能力也最好;在12 h光照条件下愈伤组织的分化能力明显高于暗培养。     

分离缓冲液对水稻细胞核悬液DNA分辨率效应的比较

为制备高纯度水稻细胞核悬液供FACSCalibur流式细胞仪使用,选用6种细胞核分离缓冲液制备样品,对其DNA分辨率效果进行比较,Otto buffers和Marie’s nuclearisolation buffer表现分辨率较高,细胞G0/1峰产生的变异系数较低(CV分别为3.57%和3.41%);其中Otto buffers的组分较Marie’s nuclear isolation buffer简单、成本低,且能在正常室温条件下分析和保存。虽然在细胞核悬液中Tris-MgCl2buffer显示最低的CV值(3.19%),但产生较多的背景碎片。而其余3种缓冲液(Lysis buffer LB01,Galbraith’s buffer和Arumuganathan’sbuffer)的变异系数均较高(分别为4.75%,6.28%和6.73%)。结果表明采用Otto buffers分离缓冲液制备细胞核悬浮液,能实现苗期对水稻花粉植株的不同倍性(单倍体、二倍体、三倍体等)快速鉴定。     

开发实用的染色体加倍体系构建成烟草DH群体

通过对4种染色体加倍方法(烟草浸花药法、浸花培苗法,叶片再生法及浸腋芽法等)的比较研究表明：以4g／L浓度的秋水仙碱浸泡花药法加倍率最高达47．5％～75％,其次为叶片再生法(30％～36．67％)和浸苗法(16．67％～32．35％),而浸腋芽法较低(17．78％)。前两种方法加倍率虽高,但有较高畸形苗比率,叶片再生法工序较繁琐。作者认为烟草加倍单倍体产生,应以采用浸苗法为主。在使用秋水仙碱浸苗加倍时,添加DMSO可明显促进秋水仙碱的加倍效率,且促进作用随时间延长而提高：从高效、快捷和节约等原则考虑,我们开发了烟草有效的染色体加倍体系,以4g／L的秋水仙碱 20g／LDMSO溶液浸苗48h的效果最好。对两个组合烟草单倍体苗浸12h以上,其染色体加倍效率达到对照的2．30-2．93倍。本试验用较低浓度秋水仙碱添加DMSO有利于节约实验费用。通过完善染色体加倍技术程序已构建成2个DH群体,供基因定位研究。     

烟草染色体倍性快速鉴定方法

摘要: 对两个杂交组合(G28 × NC2326和K326 × Coker176) F1烟草 (Nicotiana tabacum) 花药培养诱导出763个不同倍性植株。基于植株的花和种子结实率常规鉴定倍性水平比较，用气孔保卫细胞叶绿体数目预测植株倍性准确率达93.52%。表明采用气孔保卫细胞叶绿体计数法可以在苗期快速、准确地确定植株染色体倍性。同时, 在移栽前间接地鉴定、筛选出叶绿体数<14的单倍体苗，作进一步秋水仙碱加倍处理，以减少对单倍体材料的浪费，加快DH群体构建速度。     

活性碳、微量元素、大量元素对烟草花药培养的影响

以Ｈ（１９６７）为基本培养基，烟草花药为材料，研究了烟草花药培养中影响出苗率的因素。结果是：提高原Ｈ配方中微量元素的倍数或降低大量元素的倍数有利于烟草花培出苗；活性碳的促进作用是主要的。结果说明：活性碳在烟草花药培养中的作用主要是通过其杂质中Ｆｅ和Ｚｎ等增加了培养基中微量元素的含量，使培养基中微量元素与大量元素的比例趋于平衡，促进胚状体的形成和发育，提高出苗率。     

活性炭促进烟草花药培养出苗的作用机制研究

本文以Nitsh H(1967)为基本培养基，烟草花药为培养材料，研究了活性炭影响烟草花药培养出苗率的作用及机制。结果是：在一定范围内，培养基中大量元素与微量元素的比例比绝对含量对出苗率的影响大；活性炭对烟草花药培养出苗的促进作用受培养基中大量元素、微量元素平衡程度的影响；活性炭试剂级别不同对花培出苗率的影响不同；活性炭中促进出苗的物质部分可以被EDTA提取出来；培养基中附加Zn、Fe、P、K等元素能不同程度的促进出苗。结果说明：培养基中元素平衡对烟草花药培养胚状体的形成极为有利；活性炭加入培养基，通过平衡培养基中元素比例和增加促进出苗的微量元素而促进烟草花药培养胚状体的形成。