产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌检测方法研究进展

抗生素的不合理使用使得细菌耐药性快速产生及传播，细菌耐药性已然成为重大公共卫生问题。碳青霉烯类抗生素在临床治疗中表现良好，常作为治疗多重耐药菌感染的最后一道防线，碳青霉烯耐药菌的出现对公共卫生安全产生了极大的威胁。产碳青霉烯酶是碳青霉烯耐药菌耐药的主要机制，因此，对产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的检测至关重要。目前，对于碳青霉烯酶的检测手段以表型检测和分子生物学检测方法为主。表型检测一般易于操作，成本低廉，便于在临床进行，但在检测效率和检测用时方面差强人意。分子生物学及其他新型技术在保持高特异性和敏感性的基础上能做到快速、高通量检测，但试验检测的成本高，需专业设备和人员，部分技术在碳青霉烯酶检测领域仍有待开发。当前，多种碳青霉烯酶的检测方法可针对不同的需求和目的，并没有一项检测能满足所有情况。进行检测时，试验所需时间、操作难度、经济成本等都需列入考量，应根据实际情况选择合适的检测方法。笔者通过结合当前背景，归纳总结产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的检测方法，从试验特异性与敏感性、可操作性、检测时间、试验成本等方面分析比较各个方法特点，以期为之后新的检测方法的开发及现有方法的改良研究提供切入点，为临床监测与检测方案的制定和实行提供思路。     

广东屠猪肉样品中大肠杆菌耐药性与毒力特征的分析

为分析广东地区屠猪肉中大肠杆菌(E.coli)药物敏感菌株的血清型、毒力基因和系统进化背景,本研究从屠猪肉样品中分离出112株E.coli,采用玻片凝集法鉴定血清型,琼脂稀释法测定10种抗菌药的敏感性,PCR方法检测7种毒力相关基因,多重PCR方法进行系统进化背景判定。结果显示,112株E.coli中,定型菌株95株,分别属于15种血清型,其中O65、O131、O8和O158为优势血清型。几乎所有菌株对氟苯尼考、多西环素和四环素高度耐药,而对头孢曲松高度敏感,其中多重耐药菌株多数耐5种以上药物,常见的多重耐药表型是氟苯尼考/氯霉素/多西环素/四环素/氨苄西林。PCR鉴定结果表明,含有毒力基因的菌株中38%至少具有两个毒力基因,其中EAST1+Stx2e和hlyF+Stx2e比较常见。比较常见的毒力基因为Stx2e和EAST1,STb基因仅在一株菌中检测到。多重PCR鉴定结果显示,屠猪肉样品中E.coli主要分布为共生型的A组和B1组。本研究为大肠杆菌病的控制和合理使用抗生素提供实验依据。     

质粒介导喹诺酮类耐药机制研究进展

质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因的出现,迅速提高了细菌对喹诺酮类药物的耐药性,给临床细菌性疾病的治疗带来了严重的威胁。目前虽然认为喹诺酮类耐药基因(qnr)只引起低水平耐药,但低水平耐药性可使细菌数量达到出现突变所需的浓度,从而出现高水平耐药。因此,对质粒介导该类药物耐药机制的研究,及耐药基因的分子传播机制的研究不仅能指导临床合理用药,而且有助于控制耐药菌株的产生和传播。     

氟喹诺酮类兽药残留检测方法研究进展

氟喹诺酮类药物是一类广谱高效抗菌药,临床上广泛用于动物和人类的各种感染性疾病的治疗。综述了氟喹诺酮类药物的残留检测方法,为进一步开展该药残留检测的研究和监测提供借鉴。     

宠物源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrD的研究

 【目的】对临床分离的宠物源大肠杆菌进行质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrD的检测,并对该基因进行序列分析和传播机制的研究。【方法】采用微量稀释法对阳性菌株进行15种抗生素的最小抑菌浓度试验;通过PCR对基因克隆,并对克隆产物和菌株阳性质粒进行转化;同时对菌株进行接合转移试验。【结果】从164株宠物源大肠杆菌中检测出1株qnrD阳性菌株(GP2009-036),GP2009-036对14种兽医临床常用抗生素耐药严重,表现为多重耐药(14耐);PCR产物经连接PMD19-T载体后可转化入DH5α感受态细胞中;接合转移试验成功地将质粒转移到大肠杆菌J53中;可从GP2009-036与其转化子中抽提出阳性质粒。【结论】该qnrD阳性菌株对临床常用抗生素耐药严重,且阳性质粒可在病原微生物间进行水平传播,其水平传播机制可能使该基因在宠物临床上进行传播。     

基于文献计量的抗生素耐药基因(ARGs)传播研究现状及热点分析

为了了解抗生素耐药基因传播研究的整体状况和前沿动态,以WebofScience核心合集数据库集为基础,对20082017年间全球范围内有关该研究领域的文献报道开展计量学分析,从总体情况、研究力量、研究热点等方面进行系统评价。结果表明,10年间有关该领域的研究报道增加显著,自2008年的341篇增加到2017年的1011篇,增加196%。国内学者发文量自2008年的15篇增加到2017年的210篇,文献增长趋势显著高于国外。通过对作者分析表明,主要研究力量持续增加,主要高产作者(第一作者和通讯作者)后5年比前5年发文量增加。通过对论文关键词计量分析表明,四环素是目前关于抗生素耐药基因传播研究热点抗生素,废水则是热点研究基质。研究较多的耐药菌包括鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、沙门菌、铜绿假单胞菌等,其耐药机制主要涉及β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶以及碳青霉烯酶类耐药基因。具体研究内容主要有多重耐药、致病性、流行病学、整合子、共转移、质粒、生物膜、演化、基因水平转移、可移动基因元件等。综合文献计量分析结果,抗生素耐药基因传播仍然是抗生素耐药研究领域的研究热点,在未来的研究发展趋势方面,质粒在抗生素耐药基因传播中所扮演的角色、抗生素耐药性的起源与演化等方向将具有特定的研究价值和发展空间。     

猪肌生成抑制素（MSTN）cDNA的克隆

从猪的肌生成抑制素（MSTN）编码序列中设计引物，以军牧一号猪肌细胞总PNA为模板，利用RT－PCR和嵌套PCR技术，扩增出MSTN cDNA片段。该片段全长1277bp，包含猪MSTN基因的全部编码序列。将所得片段与pMD18-T载体连接，转化到JM109大肠杆菌中，成功地筛选到阳性克隆，其质粒测序结果与文献报道的一致。经EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ酶解分析，cDNA片段与pMD18-T载本之间既有正向插入的克隆，也有反向插入的克隆，所得到的MSTN cDNA可用于原核和真核表达载体的构建。     

氟砜霉素和氯霉素与抗菌增效剂的体外联合抑菌效果比较

应用试管二倍稀释法测定了氟砜霉素、氯霉素、TMP和OMP对15株畜禽常见病原菌的最小柳菌浓度（MIC）。结果表明，氟砜霉素的体外抗菌活性强，优于或等于氯霉素；TMP和OMP的体外抗菌活性偏低，但OMP优于TMP。氟砜霉素和氯霉素与TMP、OMP对14株细菌的联合药敏试验经肉汤稀释棋盘法测定，结果表明，氟砜霉素和氯霉素分别与TMP、OMP体外联合，抑菌效果相同，呈协同作用的均占50%与28.6%，即TMP或OMP对氟砜霉素和氯霉素的增效作用相等，但TMP优于OMP。在14株细菌对氟砜霉素和氯霉素分别与TMP、OMP的总共56组体外联合试验中，呈协同作用的占39.3%，主要为大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌及金黄色葡萄球菌；无关作用的点60.7%；无拮抗现象。故临床联合用药前，仍需进行联合药敏试验，呈协同作用者才可联用。     

绿脓杆菌外毒素A与人组蛋白H4嵌合蛋白基因克隆及其原核表达载体的构建

设计引物以pCDPT2质粒(含PEA全序列)为模板亚克隆获得PEA功能区Ⅰa及功能区Ⅱ基因片段(1100 bp); 提取人染色体DNA作为模板,利用一对设计引物扩增获得了人组蛋白H4基因片段(316 bp);将两基因片段连接,构建了融合基因中间载体pMD-18T-PEA-H4;融合基因经NcoⅠ及XhoⅠ酶切,以正确阅读框架插入相同酶切的pET-28A中,经酶切分析及PCR扩增检测,筛选到阳性克隆,其质粒测序结果表明成功地构建了毒性基因缺失的PEA与人组蛋白H4融合基因的原核表达载体,为进一步表达并获得大量的融合蛋白奠定了基础。     

广东省鸭疫里默氏杆菌流行病学监测及遗传进化关系

【目的】明确广东地区鸭疫里默杆菌Riemerella anatipestifer的血清型、耐药状况及遗传进化关系。【方法】从规模化鸭场分离鉴定鸭疫里默氏杆菌,通过玻片凝集试验鉴定血清型;利用试管两倍稀释法测试抗菌药物的最低抑菌浓度,分析药物的敏感性;采用全基因组测序技术分析序列特征并构建核心基因组遗传进化树。【结果】共分离鉴定鸭疫里默氏杆菌168株,血清1、2、3、5、6、7、8、10型均有流行,血清1型的菌株高达54.17%(91/168),其次为2型,占27.97%(47/168)。48株代表性菌株对庆大霉素、卡那霉素、盐酸环丙沙星表现高度耐药,耐药率均超过80%;对土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素、氧氟沙星、诺氟沙星、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶的耐药率均在60%以上;对阿莫西林、头孢噻肟和大观霉素的耐药率低于30%。受试菌株对5～12种药物耐药,共有44种耐药谱型。成功获得46株菌株全基因组序列,共检出6种耐药基因,其中,耐药基因erm(F)和tet(X)的检出率较高,分别为73.91%(34/46)和82.60%(38/46),同时携带2种以上耐药基因的菌株占95.65%(44...