杜氏盐藻促有丝分裂活化蛋白激酶 DsMAPK的原核表达及纯化

盐藻是研究植物耐盐机制的重要模式生物,而 MAPK基因在植物耐盐分子途径中起重要作用。该试验通过PCR扩增DsMAPK基因的开放阅读框（ORF）,并将其克隆至带有GST标签的原核表达载体 pGS-21a,得到重组表达载体pGS-21a-MAPK。将重组表达载体转化 E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,然后对融合蛋白进行表达形式分析,利用 GST-SefinoseTM Kit进行纯化,所得产物进行 SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果表明,该试验成功构建了重组表达载体 pGS-21a-MAPK,经IPTG诱导后表达的融合蛋白与预期相符,纯化后的上清蛋白经 Western blot检测显示该融合蛋白能与抗 GST单克隆抗体特异性结合,具有良好的免疫学活性, DsMAPK的成功表达为进一步在蛋白质水平上研究其在盐藻耐盐机制中的作用奠定了基础。     

杜氏盐藻磷脂酶C基因DsPLC的克隆及盐胁迫下的表达分析

为了研究磷脂酶C基因的结构与功能,采用RT-PCR和RACE技术从盐藻中克隆出了一种磷脂酶C基因(GenBank Accession No.KF573428),命名为DsPLC,并对其进行了生物信息学分析和盐胁迫条件下的表达分析。结果表明,DsPLC的cDNA全长2 628 bp,开放阅读框1 782 bp,编码593个氨基酸。该蛋白质为亲水性稳定蛋白,没有信号肽,也没有跨膜区域,是一种非跨膜蛋白,存在多个潜在的磷酸化位点,二级结构的主要元件为无规卷曲和α-螺旋。进一步的进化分析结果表明,盐藻与衣藻、团藻的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR结果显示,正常情况下DsPLC的表达量很低,当受到高盐胁迫时表达量急剧升高,且在胁迫4 h时表达量达到最高,是对照组的10倍左右,差异极显著(P0.01),表明DsPLC可能在盐藻抵御外界盐胁迫的过程中起重要作用。这些研究结果为进一步阐明DsPLC的功能及其作用机制奠定了分子基础。     

降胆固醇型干酪乳杆菌的生物学特性研究及培养条件优化

本文选用具有降胆固醇功能的干酪乳杆菌HC12为材料,通过耐酸性、耐盐性、药敏性等指标研究干酪乳杆菌HC12的生物学特性,并优化菌株培养条件,进而提高菌株的生长量以及降胆固醇能力,为进一步发酵培养打下基础。结果表明,在培养环境pH 4.0时,干酪乳酸杆菌HC12生长量最大;干酪乳杆菌HC12的生长量会随着NaCl浓度的增加而降低,但NaCl浓度为6.0%时菌体仍能生长,表明干酪乳杆菌HC12有较强的耐渗透压特性;干酪乳酸杆菌HC12对红霉素和四环素两种抗生素敏感,但对氟哌酸和庆大霉素两种抗生素不敏感;在30℃、pH 4.0的条件下,以MRS培养基配方为基础,调整葡萄糖浓度为2.0 g/mL,酵母粉浓度为2.5 g/mL,牛肉膏浓度为3.0 g/mL,达到最适培养基;在最适培养条件下培养48 h,干酪乳酸杆菌HC12对胆固醇的去除能力最强,清除率可达50%。