基于SLAF-seq技术鉴定苹果砧木耐涝候选基因

【背景】苹果（Malus×domestica Borkh）是我国主要栽培果树树种之一,但部分苹果产区由于夏、秋季的大量集中降雨和排水不良等造成果园涝害频繁发生,导致苹果树叶片黄化、脱落,果实品质和产量下降。【目的】鉴定苹果耐涝相关基因,为苹果耐涝分子标记辅助育种和优质高产栽培提供依据。【方法】以耐涝苹果砧木G41和不耐涝苹果砧木新疆野苹果（M. sieverii (Ledeb) Roem.）及其构建的包含495个F₁杂交后代为材料,从F₁杂交群体中挑选出耐涝和不耐涝株系各50株,构建两个极端性状DNA混池,采用简化基因组测序（SLAF-seq）技术,开发SLAF标签和SNP标记,结合苹果基因组信息和遗传关联性分析,对苹果耐涝基因进行定位及候选基因预测,并对候选基因在耐涝差异的株系中进行淹水胁迫下的表达分析。【结果】以‘金冠’苹果为参考基因组,共开发119 072个SLAF标签,其中多态性SLAF有11 133个。通过序列分析和检测SNP位点,共获得6 237 071个SNP,其中高质量SNP有170 617个。通过ED和SNP-index方法关联分析,获得一个与耐涝性状紧密关联的候选区域,位于苹果第10号染色体1.94—3.25 Mb,关联区域大小为1.31 Mb,关联区域内包含120个基因。对该区域内基因进行功能注释,发现一个与呼吸代谢相关的基因—乙醇脱氢酶基因ADH1（MD10G1014500）,在淹水处理后1、2、4和6 d,该基因在耐涝植株中的表达量显著高于不耐涝植株。【结论】将苹果耐涝基因定位于第10号染色体1.94—3.25 Mb处,筛选到可能与苹果耐涝相关的候选基因MD10G1014500,可用于苹果耐涝基因的克隆和功能解析。     

早实核桃的整形修剪

早实核桃具有结果早、分枝力强、花枝率高等生长发育特点，宜选择采用自然开心形、疏散分层形和纺锤形等整形方式。提倡休眠期修剪，但尽可能延期进行以避开严重伤流期，以萌芽前结束修剪为宜。     

银条茎尖玻璃化法超低温保存及其植株再生

 为长期稳定保存银条种质, 建立了玻璃化法超低温保存其茎尖的技术体系。选择继代4次的 银条无菌壮苗, 5 ℃低温驯化14 d; 剥取5 mm的茎尖, 在含有0.5 mol·L ^{- 1}蔗糖的MS (无Ca^{2 +} ) 液体培养基预培养1 d; 25 ℃条件下经改良MS + 2PVS₂装载20 min; 在- 20 ℃, 95%乙醇浴中以PVS₂脱水处理4h; 更换新鲜的PVS₃后投入液氮, 保存24 h后取出冷冻管在40 ℃水浴中化冻1 min; 以含有1.2 mol·L ^{- 1}蔗糖的改良MS (无Ca^{2 +} ) 溶液洗涤2 次, 每次10 min; 冻存后的茎尖相对存活率超过70%。将冻存后的茎尖转接到再生培养基上, 暗培养20 d后转入正常光照条件下培养, 存活率达63.7%; 继续培养得到正常分化和生长的再生植株, 生根后可移栽成活。     

大樱桃丰产栽培技术

总结了大樱桃的丰产栽培技术。     

早实核桃的生长发育特点和整形修剪技术

早实核桃具有结果早、分枝力强、花枝率高等生长发育特点,宜选择采用自然开心形、疏散分层形和纺锤形等整形方式。根据一些地区的试验结果现多提倡休眠期修剪,但尽可能延期进行以避开严重伤流期,以萌芽前结束修剪为宜。在修剪上应按照树体年龄和特点采取不同的技术。最后提出了修剪中应注意的问题。     

猕猴桃低乙烯气调库的性能和贮藏效果

介绍了猕猴桃低乙烯气调库。测定了库体的性能,研究了贮藏方式对猕猴桃贮藏性状的影响。结果表明：库体密封性能达良好级,乙烯浓度脱至０．０２μＬ／Ｌ以下;低乙烯气调可延缓果实后熟软化。在两年１８００００ｋｇ果实商业贮藏中,果实贮期可达１８０天以上,果肉硬度为６．８ｋｇ／ｃｍ^２,好果率大于９８％,货架期大于１５天。低乙烯气调是猕猴桃的最佳贮藏方式     

晚熟桃新品种——‘秋甜’

1选育过程1980年以‘秋黄’为母本、‘搬口白’为父本进行杂交．获得杂交种子86粒．从中选出76粒发育饱满的种子,经层积、催芽后,播种于苗圃内;1981年获杂种实生苗33株．落叶后定植到杂种园内。经3年果实性状初步鉴定．代号为80.4—8—13的单株果实经济性状优良．被初选为优良单株。1986年以毛桃为砧木。嫁接繁殖芽苗50株．定植于品种对比圃内．经连续3年田间观察、室内果实品质鉴定及果实试销后市场反馈情况调查．     

柱状苹果Co基因的筛选与候选基因分析

【目的】柱状苹果是一种特殊的矮生突变类型,其节间短、短枝多、侧生分枝少、主干粗壮直立,是苹果实行矮化密植栽培的重要资源。本研究在前期Co精细定位的基础上,对定位区间的基因进行筛选,为阐明柱状苹果形成的分子机制和选育柱状苹果新品种奠定基础。【方法】以柱状苹果‘舞佳’和‘润太一号’,普通型苹果‘富士’和‘华硕’的芽、茎尖和叶片为试材,根据最新的苹果基因组以及与柱状相关的转录组信息,对Co精细定位区间27.66—29.05 Mb的基因进行注释分类,选择目标基因,查找其CDS序列,使用RT-PCR技术检测引物特异性,利用实时荧光定量PCR分析预测基因在不同组织器官中的表达特征,筛选出差异基因并将其作为候选基因。【结果】在苹果第10号染色体27.66—29.05 Mb区域内包含67个基因,其中12个为非编码RNA（ncRNA）,其余为编码蛋白质的基因。根据RNA-seq分析,柱状和普通型苹果基因相对表达差异倍数在1倍以上的有25个基因,其中13个基因在柱状苹果中上调表达,12个基因在柱状苹果中下调表达。在预测的14个基因中,发现4个基因MD10G1184100、MD10G1185400、MD10G1185600和MD10G1190500在柱状和普通型苹果的主枝茎尖或侧枝茎尖中相对表达存在显著差异。其中,MD10G1184100和MD10G1185600在两个柱状苹果主枝茎尖中的相对表达量均显著高于两个普通型苹果。MD10G1185400和MD10G1190500在两个柱状苹果侧枝茎尖的表达量显著高于两个普通型苹果,而MD10G1184100在两个柱状苹果中的表达量显著低于普通型苹果。进一步对这4个候选基因进行不同组织或器官的基因表达特征进行分析,发现基因MD10G1184100在柱状苹果根部的表达显著高于其他部位,MD10G1185400和MD10G1185600在柱状苹果的侧枝茎尖中显著高表达,而MD10G1190500在柱状苹果的顶芽中显著高表达。【结论】在柱状和普通型苹果茎尖中筛选到4个表达显著差异的基因,可作为Co候选基因,为该基因的克隆和功能验证及苹果树树型定向遗传改良奠定了基础。     

不同石榴品种抗寒性的研究

为比较不同石榴品种的抗寒性,本试验以10个石榴品种的枝条为试验材料,对其在-4,-8,-12,-16,-20℃等5个不同温度梯度下低温处理,进行相对电导率的测定,并用组织褐变法对枝条的褐变情况进行观察和分析.结果表明,在-4℃时‘重瓣’的抗寒性最强,‘公斤’的抗寒性最弱;在-8℃时‘河阴’的抗寒性最强,‘突尼斯’的抗寒性最弱;在-12℃时‘河阴’的抗寒性最强,‘突尼斯’的抗寒性最弱;在-16℃时,‘三白’的抗寒性最强,‘临选2号’的抗寒性最弱;在-20℃时‘三白’的抗寒性最强,‘临选2号’的抗寒性最弱.组织褐变法观察的结果显示,‘豫大籽’抗寒性最好,其次是‘公斤’、‘三白’、‘临选2号’,与上述结果并不一致,说明判断石榴品种的抗寒性时宜综合分析各种指标.     

桃矮化砧木的组织培养及植株再生

以豫农矮砧1号的茎段和茎尖为外植体,进行组织培养试验.结果表明,茎段芽诱导的适宜培养基为MS+6＿BA1 0mg·L-1+IBA0 1mg·L-1+GA31 0mg·L-1,茎尖芽诱导的适宜培养基为MS+6＿BA0 2mg·L-1+IBA0 01mg·L-1+GA31 0mg·L-1,幼芽形成根的最佳培养基为1/2MS+IBA1 0mg·L-1+IAA1 5mg·L-1,获得了豫农矮砧1号的再生植株,该研究结果为豫农矮砧1号的快速繁育奠定了基础.