慢病毒载体及慢病毒介导的RNA干扰

慢病毒载体是高效的基因转导工具,能将外源基因序列稳定导入分裂期细胞和非分裂期细胞.将慢病毒载体与RNA干扰结合能在哺乳动物的各类细胞中特异性抑制同源基因的表达,它将是基因功能研究和基因治疗的有力手段.应用慢病毒载体进行转基因动物的制备,转基因的效率将得到显著提高.慢病毒介导的RNA干扰具有高效、稳定、特异性强的特点,它能在哺乳动物的各类细胞、多种疾病的离体细胞中实现稳定的RNA干扰.该技术被广泛用于基因功能的研究,在疾病的基因治疗上也具有良好的前景.     

人、牛和羊叠朊基因的表达及牛叠朊蛋白抗血清的制备

叠朊（Dpl）是朊蛋白（PrP）的横向同源物，两者的功能密切相关。本研究旨在制备能够特异检测重组表达的或者动物组织中Dpl的抗血清，以用于研究Dpl的功能及其与PrP的关系。根据已克隆的汉族人、中国黄牛、甘肃土种羊的Dpl基因，将其Dpl成熟蛋白编码区分别定向克隆到表达载体pET-30a（4-）上，将重组表达载体转入E.coli BL21（DE3）pLys S，IPTG诱导表达。将表达并纯化的牛重组Dpl免疫4只青紫蓝兔，制备牛Dpl的抗血清，SDS—PAGE分析表明人、牛和羊的重组Dpl在E．coli中获得了高效表达。用Ni—NTA树脂亲和层析和胶洗脱法纯化了上述表达产物，ELISA和West—blot分析表明，制备的牛Dpl抗血清与重组人、牛和羊的Dpl以及牛和羊睾丸组织的Dpl发生了特异性反应，却不与重组人、牛和羊的PrP发生反应。上述结果表明制备的Dpl抗血清可以作为人、牛和羊Dpl的检测试剂和研究材料。     

RNA干扰及其应用进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA介导的基因沉默现象。RNAi主要发生在核外,RNAi具有操作简便快速等特点。RNAi现象自发现至今已逾10年,在此期间,已将研究重点由机理研究转向应用研究。文章以RNAi的应用为重点,从RNAi的起源、可能的作用机制、作用特点、研究方法、应用前景及展望等方面进行了综述。     

猪繁殖与呼吸综合征

猪繁殖与呼吸综合征1987年首次于美国暴发,该病主要经胎盘感染,引起怀孕母猪流产、死胎及木乃伊胎。猪繁殖与呼吸综合征几乎存在于世界上每一个养猪国家。论文就猪繁殖与呼吸综合征的病原特征、基因结构、结构蛋白、流行特征、病理变化与症状、演化、疫苗的应用等方面进行综述。     

口蹄疫病毒基因组的遗传变异剖析

 【目的】明确口蹄疫病毒基因组的结构特征及其变异与结构、功能的关系以及系统发生关系。【方法】利用DNAstar和Clustalx程序进行184个口蹄疫病毒基因组序列的同源性分析、多重排比。【结果】口蹄疫病毒基因组ORF大小有所差异，范围为6 963～7 120 nt，编码2 320～2 339 aa的多聚蛋白。核苷酸和氨基酸序列的同源性，7个不同血清型间＞77.6%和＞78.3%，本研究发现了可能和生物学功能相关的新的保守和变异区域。【结论】口蹄疫病毒RNA的变异类型丰富和多样性程度较高，自然界存在的毒株可能大于血清学和测序发现的FMDV的毒株数目。     

提高核酸疫苗免疫效果的策略

核酸疫苗因能诱导机体产生保护性免疫,且具有安全、热稳定性、价廉等优点而受到高度重视,如何提高核酸疫苗的免疫效果一直是核酸疫苗研究的热点和难点问题。文章主要从优化方法着手,就核酸疫苗研制中质粒载体的构建、抗原加工分子的联合应用、接种途径和剂量以及核酸疫苗在禽病上的应用做一综述。     

口蹄疫病毒3ABC绿色荧光蛋白载体构建及表达

将O型口蹄疫病毒Akesu／58株适应细胞培养。用RT—PCR技术从适应细胞株中克隆了3ABC基因，将其克隆入pGEM-T载体，测序鉴定。然后将目的基因与线性化的绿色荧光蛋白（PEGFPNl）栽体连接筛选阳性质粒命名为PEGFPN1-3ABC。将阳性质粒转入JM109大肠埃希茵增殖。提取PEGFPN1—3ABC质粒转染入BHK细胞，在荧光显微镜下直接观察表达结果。     

慢病毒载体及慢病毒介导的RNA干扰

慢病毒载体是高效的基因转导工具,能将外源基因序列稳定导入分裂期细胞和非分裂期细胞.将慢病毒载体与RNA干扰结合能在哺乳动物的各类细胞中特异性抑制同源基因的表达,它将是基因功能研究和基因治疗的有力手段.应用慢病毒栽体进行转基因动物的制备,转基因的效率将得到显著提高.慢病毒介导的RNA干扰具有高效、稳定、特异性强的特点,它能在哺乳动物的各类细胞、多种疾病的离体细胞中实现稳定的RNA干扰.该技术被广泛用于基因功能的研究,在疾病的基因治疗上也具有良好的前景.     

新城疫病毒Roakin株HN基因的克隆及真核表达载体的构建

克隆新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)Roakin株HN基因,并构建真核表达载体.应用RT-PCR扩增出NDV Roakin株HN基因,将其克隆入pMD18-T载体,并进行了测序鉴定和HN基因的序列分析.然后分别将NDV的HN基因和选择标记基因-二氢叶酸还原酶(dhfr)基因插入到真核表达载体pCI-neo中,通过PCR扩增、酶切分析和测序分析等鉴定所构建的重组真核表达载体.RT-PCR扩增的NDV Roakin株HN序列与GenBank中标准毒株(登录号AY289000)HN序列同源性为99.8%,构建了HN基因的真核表达质粒pCI-HN-D.成功构建了含有NDV Roakin株HN基因和dhfr基因的真核表达载体.