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1.
产毒多杀性巴氏杆菌研究进展   总被引:4,自引:1,他引:3  
产毒多杀性巴氏杆菌 (T Pm)是引起猪传染性萎缩性鼻炎的主要病原菌。对 T Pm的检出及高效疫苗的研制是根除猪传染性萎缩性鼻炎的关键。产毒多杀性巴氏杆菌毒素是一种皮肤坏死毒素 ,也是一种活性很强的有丝分裂原 ,单独就可引起细胞 DNA的合成及分裂。基于此毒素的特性 ,已经建立了诸如豚鼠皮肤坏死实验、小鼠致死实验、细胞促生长实验、胎牛肺细胞毒性实验、EL ISA及 PCR等方法来检测产毒多杀性巴氏杆菌。随着人们对产毒多杀性巴氏杆菌毒素活性的研究 ,猪传染性萎缩性鼻炎的疫苗也逐渐向更安全、有效的毒素疫苗发展。文章主要对 T Pm的检测方法、毒素生物学活性及疫苗的发展进行了概述  相似文献   
2.
猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究   总被引:17,自引:2,他引:17  
用PCR方法配合生化鉴定,从有肺炎症状猪的肺脏及进行性萎缩性鼻炎(Progressive atrophic rhinitis,PAR)症状猪的鼻拭子中分离出66株多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)。然后做了药敏试验,并用PCR方法对这66株Pm进行分型及毒素基因的检测,用豚鼠皮肤坏死试验及小鼠致死试验对产毒素多杀性巴氏杆菌(Toxigenie Pasteurella multocida,T^ Pm)进一步鉴定。结果显示PCR鉴定与生化鉴定Pm结果完全一致;PCR分型表明有46株为D型Pm,18株为A型:Pm,1株为B型Pm,1株无法定型;有8株用PcR检测为T^ Pm;豚鼠皮肤坏死试验及小鼠致死试验对这8株T^ Pm的进一步鉴定也表明均为产毒素菌株。所鉴定的8株T^ Pm都为D型,都分离于有严重PAR症状的猪。  相似文献   
3.
设计了一对用以检测猪多杀性巴氏杆菌的引物。对临床送检的有肺炎症状或萎缩性鼻炎症状的发病猪的病料进行细菌培养,然后挑菌做PCR,同时对可疑菌落纯化培养后做生化鉴定。结果,从不同省(市)送检的病料中分离鉴定出66株多杀性巴氏杆菌,PCR检测结果与生化鉴定结果完全符合;该引物对其他6种猪的常见呼吸道病原菌扩增均为阴性;该PCR检测方法能检测出cfu为10^3的巴氏杆菌模板。  相似文献   
4.
猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因的克隆与表达   总被引:5,自引:0,他引:5  
皮肤坏死毒素(Dermonecrotic toxin,DNT)是产毒素多杀性巴氏杆菌(Toxigenic Pasteurella multocida,T^+Pm)的主要毒力因子和保护性抗原。以猪源D型T^+Pm的基因组DNA为模板,用PCR方法扩增得到了编码DNT的toxA全基因编码序列,共4019bp。将其克隆到pMD18-T载体并测序,结果表明,toxA基因序列与GenBank已报道的5个toxA基因序列的同源性达99.8%以上。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-KG的GST基因下游,转化BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导表达,获得大小约173000的融合蛋白。Western blot结果表明,该融合蛋白具有良好的反应原性。动物试验表明,该重组蛋白可以诱导小鼠产生高水平的抗体,并可抵抗致死剂量的天然DNT毒素攻击。  相似文献   
5.
猪多杀性巴氏杆菌PCR检测方法的建立及其应用   总被引:2,自引:0,他引:2  
设计了1对用以检测猪多杀性巴氏杆菌的引物。对临床送检的有肺炎症状或萎缩性鼻炎症状的发病猪的病料进行细菌培养.然后挑菌做PCR,同时对可疑菌落纯化培养后做生化鉴定。结果,从不同省(市)的送检病料中分离鉴定出66株多杀性巴氏杆菌,PCR检测结果与生化鉴定结果完全符合;该引物对其他6种猪的常见呼吸道病原菌的扩增结果均为阴性;该PCR检测方法能检出CFU为10^3/mL的巴氏杆菌模板。  相似文献   
6.
 根据胸膜肺炎放线杆菌S4 0 74菌株毒素I的序列 ,设计了 1对引物 ,从本室自己分离的菌株中扩增了猪胸膜肺炎放线杆菌毒素I的结构基因 (apxICA) ,扩增的DNA片段大小为 36 4 0bp(4 6 87~ 832 6bp) ,将其克隆到pMD18 T载体中 ,酶切鉴定和序列测定后 ,进一步将其插入pET 2 8a中构建了原核表达载体 ,SDS PAGE和Westernblotting分析表明 ,该基因在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中获得了表达 ,而且表达的蛋白质具有免疫学活性。利用表达的蛋白作为  相似文献   
7.
猪源多杀性巴氏杆菌ompH基因的克隆、表达   总被引:7,自引:0,他引:7  
利用已分离的菌株030224HB,根据NCBI上的序列(U52208)设计了一对引物,用PCR方法扩增了猪源多杀性巴氏杆菌的外膜蛋白基因(ompH),扩增的片段大小为1114bp(ORF为960bp),并克隆到载体pMD18-T(T-Vector),测序表明该基因相当保守。用pET-28b构建了原核表达载体pET28b-ompH,转化BL21并诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达蛋白约为35ku,与报道大小相近。Western-blot结果表明表达的蛋白质具有生物学活性,然后用所表达的蛋白做了ELISA检测方法的初步探讨。  相似文献   
8.
致仔猪水肿病大肠杆菌的分离、鉴定及生物学特性   总被引:12,自引:0,他引:12  
从不同省份发生水肿病的仔猪的脏器中分离到7株细菌,通过菌体形态、菌落形态、革兰氏染色特性、生化特性、血清型等一系列的鉴定,确认为大肠埃希氏菌。动物致病性试验表明,该菌对小鼠有较强的致病性,可引起小鼠死亡。肉汤培养物无菌滤液能致死小鼠且剖检见相关脏器水肿,引起Vero细胞死亡。对主要毒力基因SLT-lle及F18进行扩增,SLT-lle全部阳性,5株F18为阳性。对LT1及ST1扩增则全为阴性。药敏试验证明,各菌株的耐药谱不同。各菌株攻毒于断奶仔猪,均能复制水肿病。  相似文献   
9.
根据胸膜肺炎放线杆菌S4074菌株毒素Ⅰ的序列,设计了1对引物,从本室自己分离的菌株中扩增了猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ的结构基因(aoxICA),扩增的DNA片段大小为3 640 bp(4 687~8 326 bp),将其克隆到pMD18-T载体中,酶切鉴定和序列测定后,进一步将其插入pET-28a中构建了原核表达载体,SDS-PAGE和Westernblotting分析表明,该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了表达,而且表达的蛋白质具有免疫学活性.利用表达的蛋白作为抗原包被酶标板,建立了检测毒素Ⅰ血清抗体的ELISA方法.临床应用表明,该方法可用于APP强毒株感染的检测.  相似文献   
10.
应用双重PCR检测产毒素多杀性巴氏杆菌   总被引:2,自引:1,他引:2  
参照有关文献设计了2对引物。分别扩增多杀性巴氏杆菌的Kmt及toxA基因。以使同时检测并区分产毒素与非产毒素多杀性巴氏杆菌。该PCR能检出10^3cfu菌量的模板。特异性试验表明。这2对引物都不能从猪的其他6种常见病原菌扩出特异性的带。对扩增的2个PCR产物测序结果表明,2序列都有很高的保守性,从而进一步证明了该PCR方法的特异性及灵敏性。临床应用,从386份病料分离出66株多杀性巴氏杆菌,其中有8株均能同时扩出457bp和864bp的片段,而其他54株只能扩出457bp的片段。  相似文献   
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