Cdh1和Num1过表达菌株的构建

[目的]研究Cdh1和Num1之间是否存在相互作用,构建用于Cdh1和Num1免疫共沉淀试验的过表达菌株。[方法]首先在酵母菌株YWL630中用GAL1和3HA对CDH1进行标记,构建GAL1-3HA-CDH1 NUM1-GFP菌株,再利用酵母四分体解离的方法使菌株YWL63和YWL490分别与该菌株杂交并进行四分体解离,从而得到所需菌株。[结果]成功构建不同基因型和配型的重组酵母菌株,其中YT52成功过表达了约340 kD的Num1,YT53成功过表达了340 kD的Num1和75 kD的Cdh1,YT57成功过表达了75 kD的Cdh1。[结论]经过同源重组的方法成功标记CDH1并诱导蛋白过表达,通过酵母四分体解离的方法构建用于Cdh1和Num1互作试验的过表达菌株,为揭示APC/C是否介导Num1的降解及机制奠定基础。     

柿品种‘禅寺丸’未减数花粉分离体系的建立

对柿品种‘禅寺丸’未减数花粉（2n花粉）的鉴定、筛选及其生活力恢复进行了研究，结果表明：（1）经0．9mol/L甘露醇CPW溶液吸胀2h后，正常花粉直径为50μm左右，而未减数花粉为65μm左右，未减数花粉直径是正常花粉的1．3倍。（2）未减数花粉比率约为3．8％，通过61μm的不锈钢细胞筛筛选，纯度可达84％。（3）禅寺丸花粉经吸胀处理后，花粉发芽率有所下降，利用20％的蔗糖溶液洗涤可基本恢复其生活力。     

甜柿2n花粉形成的细胞学机理研究

 研究了甜柿品种‘禅寺丸’2n花粉形成的细胞学机理 ,检测到导致 2n花粉形成的异常减数分裂现象 :(1)中期Ⅱ和后期Ⅱ的小孢子母细胞中发生异常的纺锤体定位 ,表现为平行 (ps)、融合 (fs)和三极纺锤体 (tps) ;(2 )末期Ⅱ4个子核呈两极分布 ,每极 2核 ,或呈三极分布 ,其中一极 2核 ,另两极单核 ;(3)四分体时期观察到二分体和三分体。二分体最终发育成 2个 2n配子 ,三分体则形成 1个 2n配子和 2个n配子。经二分体和三分体的发生频率估算出的2n花粉频率与当年以花粉直径为指标测得的 2n花粉的实际发生频率基本一致。因纺锤体定位异常而产生的 2n配子遗传上等同于FDR(第 1次分裂重组 )型 ,因而在有性多倍化中具有重要的利用价值。     

部分中国柿品种及其胚培养后代的染色体倍性研究

对原产中国的２０个无核或少核柿品种和６个有核品种（类型）及日本无核品种‘平核无’和有核品种‘正月’成年树的茎尖进行了染色体数目检测,同时观察了其中的３个中国无核或少核品种和另２个日本有核品种‘西村早生’、‘前咱次郎’胚培苗根尖的染色体数目。结果表明除‘平核无’为九倍体（２ｎ＝９Ｘ＝１３５）外,其余品种均为六倍体（２ｎ＝６Ｘ＝９０）。可见供试中国柿品种的无核性状与染色倍性变化无直接关系。     

柿品种‘禅寺丸''''未减数花粉分离体系的建立

对柿品种‘禅寺丸'未减数花粉(2n花粉)的鉴定、筛选及其生活力恢复进行了研究,结果表明(1)经0.9mol/L甘露醇CPW溶液吸胀2h后,正常花粉直径为50μm左右,而未减数花粉为65μm左右,未减数花粉直径是正常花粉的1.3倍.(2)未减数花粉比率约为3.8%,通过61μm的不锈钢细胞筛筛选,纯度可达84%.(3)禅寺丸花粉经吸胀处理后,花粉发芽率有所下降,利用20%的蔗糖溶液洗涤可基本恢复其生活力.     

罗田甜柿幼胚培养条件的研究

利用 5因素 4水平的正交试验对‘罗田甜柿’幼胚培养条件进行了探讨 ,结果表明 :(1)培养基以MS(1/ 2N)最适 ;(2 )蔗糖浓度以 7%为宜 ;(3)抗褐化剂以活性炭效果最好 ;(4 )最佳激素配比是IBA 0 .3mg/L +Zeatin0 .44mg/L ;(5 )激素种类生长素类以IAA为好 ,细胞分裂素类以Zeatin效果较好 ;(6 )MS(1/ 2N) +IAA 1mg/L +暗处理 4d生根率最高     

基于“三个一”的生物育种人才实践创新能力培养探索与实践

为解决国家经济社会发展特别是战略性新兴(支柱)产业中培养高素质创新应用型专门人才的迫切问题,以高等院校生物育种人才培养为研究内容,以实践创新能力培养为中心,有机融合了理论教学与实践教学,将实践环节覆盖了培养全过程,构建并实施了“三个一”的实践教学方式,持续改进并切实提升了人才培养质量,对于提高战略性新兴(支柱)产业生物育种人才培养质量以及缓解人才培养与产业需求脱节问题具有现实的指导意义和推广价值。