OPS法冷冻小鼠胚胎的双重套式PCR性别鉴定

本实验利用双重套式PCR扩增小鼠SRY、ZFX基因序列对OPS冷冻胚胎进行性别鉴定。同一胚胎 4份平行样品性别检验结果均一致则胚胎鉴定准确 ,否则鉴定失败。共检测 6 0枚桑椹胚 ,雄性一致有 35枚 ,雌性一致有 2 3枚 ,鉴定失败有两枚 ,可鉴定率为 96 .7% (5 8/ 6 0 )。并对影响双重套式PCR扩增效率的因素进行了分析     

小鼠4、8-细胞胚胎单卵裂球体外培养体系的研究

以CZB为基础培养液,培养小鼠4、8-细胞胚胎单卵裂球,研究葡萄糖、牛磺酸和猪输卵管上皮细胞共培养在其体外发育中的作用。结果表明:牛磺酸添加与否对4、8-细胞胚胎单卵裂球的囊胚发育率分别为29%、30%和14%、14%,无显著性差异(P>0.05)。添加葡萄糖后,4、8-细胞胚胎单卵裂球的囊胚发育率分别为36%和19%,有显著提高(P<0.05)。含有葡萄糖而牛磺酸的添加与否对4、8-细胞胚胎单卵裂球的囊胚发育率分别为36%、38%和19%、20%,无显著性差异(P>0.05)。各组内4、8-细胞胚胎单卵裂球形成的囊胚细胞数分别为(10.44±1.24～(12.43±1.18)和(7.57±0.97)～(8.48±1.16),均无显著性差异(P>0.05)。4、8-细胞胚胎单卵裂球与猪输卵管上皮细胞共培养,其囊胚发育率分别为47%和26%,囊胚细胞数分别为(17.57±1.13)和(11.43±0.92),均高于单一培养(P<0.05)。     

超低温冷冻对小鼠桑椹胚多能性因子Oct-4表达的影响

本实验旨在探讨昆明白小鼠桑椹胚超低温冷冻后Oct-4表达的变化与胚胎发育潜力的关系。胚胎采用OPS法冷冻,即胚胎于10%EG+10%DMSO溶液中预处理30 s,然后再移入玻璃化溶液(EDFS30)中处理25 s,以OPS为承载器投入液氮中。毒性组胚胎未投入液氮,其他过程与冷冻组相同,新鲜胚胎为对照组。胚胎解冻后,检测Oct-4 mRNA与蛋白的表达,通过观察其形态正常率、囊胚发育率和囊胚细胞数来综合判断其体外发育能力。结果表明:冷冻组和毒性组较桑椹胚中Oct-4 mRNA的表达量对照组相比显著降低(P<0.05),蛋白表达量3组间无显著差异。桑椹胚处理后的形态正常率以及桑椹胚培养48 h后的囊胚发育率(96.67%～100%)和囊胚细胞数(89.67～92.33)3组间无显著差异。结果显示,玻璃化冷冻保存小鼠桑椹胚后多能性基因Oct-4 mRNA表达的变化并未影响其体外发育潜力。     

鸡败血霉形体病的诊断与防治

2005年3月,丰城市某鸡场发生一种慢性呼吸道病,病程可长达一个月以上,生长较快的小鸡发病率较高,附近的几个鸡场也发生类似的情况,经流行病学调查、临床检查及实验室检查,诊断为鸡败血霉形体病。1发病情况该鸡场有小鸡12361羽,产蛋鸡10362羽,发病集中在4～8周龄的小鸡,到4月时,共死亡小鸡3083羽,产蛋鸡518羽,其中小鸡死亡率为24.9%,蛋鸡死亡率为5%,发病后用青霉素、卡那霉素、磺胺类药物等进行治疗,效果不佳。2临床症状小鸡流浆液性鼻涕,打喷嚏,后来出现咳嗽、喘气和气管罗音,小鸡生长停止,逐渐消瘦,产蛋鸡产蛋量减少,病鸡眼睑肿胀,眼部凸出…     

ICR小鼠胚胎干细胞建系初步研究

实验旨在探讨消化方式和胚胎发育阶段对ICR小鼠胚胎干细胞(ES细胞)建系效率的影响。ICR小鼠3.5 d囊胚在饲养层上贴壁后采用单一酶消化或机械化与酶消化法相结合分离隆起的细胞集落,进行传代培养;然后选择二者中较优消化方式对不同发育时期囊胚所形成的细胞集落进行处理。结果表明:采用机械化与胰酶消化相结合的方式,形成的类ES细胞超过7代的比率(85.0%)要显著高于单一的胰酶消化(15.0%)(P<0.05);当用二者相结合的方式对ICR小鼠3.5 d(早期囊胚)、4.0 d(扩张囊胚)和4.5 d(孵化囊胚)所形成的细胞集落进行消化传代培养,三者在贴壁率和形成原代细胞集落率上均无显著差别(P>0.05),但传代超过7代的效率上早期囊胚和扩张囊胚均高于孵化囊胚(P<0.05)。结果提示,采用机械化与酶消化法相结合更适合于3.5～4.0 d ICR小鼠囊胚的ES细胞建系。     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻研究进展

近40年来,利用冷冻保存技术将哺乳动物胚胎长期保存起来,建立"胚胎库"是保护物种资源和拯救濒危动物的有效手段,同时也是加快家畜品种改良、建立动物基因库和实施胚胎移植产业化的重要组成部分,也可以为克隆、转基因等现代生物技术提供丰富的试验材料,使胚胎的供给不受时间和空间的限制。胚胎冷冻保存技术在人类辅助生殖方面也具有广阔的应用前景。本文主要介绍了玻璃化冷冻过程中胚胎冷冻主体承载工具特点和应用,并展望未来哺乳动物胚胎冷冻发展的方向。     

猪孤雌胚胎干细胞建系的研究

以猪孤雌激活囊胚为材料，囊胚透明带消化后采用全胚培养，培养液中添加不同培养成分或因子（如FGF2，LIF，2i等），以及选择不同的初始培养液体积来筛选猪胚胎干细胞（embryonic stem cell，ES细胞）建系的优化培养体系。囊胚内细胞团形成的细胞集落采用胰酶消化传代。结果显示：透明带消化后，囊胚贴壁率显著升高（19．4％VS．8．8％）（P〈0．05）；初始培养液体积比平常培养液体积（0．30mL／孔，24孔培养板）减半条件下，能显著提高其贴壁率（91．7％VS 20．0％）（P〈0．01），而且获得了可传至7代的类ES细胞系2株，碱性磷酸酶染色成阳性；当用2i因子（CHIR99021和PD03025901）去替代培养液中的FGF2，囊胚贴壁率（29．400VS53．3％）和原代集落形成率（20．0％VS 87．5％）反而显著下降（P〈0．01）。这表明培养液添加了FGF2和LIF（不舍2i因子），用24孔板培养，最初培养体积为0．15mL，透明带消化的培养体系比较适合猪孤雌激活胚的ES细胞建系。     

高等农业院校动物繁殖学教学改革问题与思考

动物繁殖学是高等农业院校动物科学专业的主干课程之一，实践性和实用性强。如何对动物繁殖学课程的理论教学和实验实践教学进行科学、有效的教学改革，是当前亟需解决的问题。本文从动物繁殖学理论和实验实践教学中存在的问题着手，分析了当前动物繁殖学的教学现状，并提出进一步教学改革的建议和措施。     

小鼠孵化囊胚细管法和OPS法玻璃化冷冻保存技术的研究

利用小鼠孵化囊胚为模型 ,为猪孵化囊胚的冷冻保存摸索适宜的方法和条件 :在 2 5和 37℃条件下 ,用不同含量的玻璃化溶液 (EFS和EDFS) ,对小鼠孵化囊胚实施细管法和OPS法冷冻保存。在 2 5℃条件下 ,细管一步法冷冻保存后的囊胚恢复率仅为 32 5 %～ 74 4 % ,与对照组 (10 0 % )差异极显著 (P <0 0 1) ;而细管二步法冷冻组用方法C解冻后 ,孵化囊胚恢复率达 87 0 % ,为细管法最佳组 ,但仍与对照组有显著差异 (P <0 0 5 )。在 37℃条件下 ,改用OPS法冷冻后 ,以方法A脱出抗冻保护剂 ,孵化囊胚恢复率最高值为 87 2 % (P <0 0 5 )。当采用EDFS30和EDFS4 0对孵化囊胚冷冻保存后 ,以方法C脱出抗冻保护剂 ,恢复率分别高达 97 8%和 93 3% (P >0 0 5 )。利用细管法和OPS法 2种最佳冷冻 -解冻组获得的 133和 15 4枚胚胎 ,分别移植给 12和 10只假妊娠 3～4d的受体母鼠。使 2种冷冻方法均有 6只妊娠 ,各产仔 2 2和 36只 ,产仔率分别为 35 5 %和 39 1% ,与对照组(39 8% )差异均不显著 (P >0 0 5 )。证明 2种方法对胚胎冷冻后均起到了保护作用。     

公鸡生殖器官组织结构及其IL-1β和IL-6在生殖器官中的定位

【目的】IL-1β和IL-6在公鸡生殖器官免疫保护中发挥着重要的作用,研究拟揭示公鸡生殖器官的组织构造,以及定位IL-1β和IL-6在其生殖器官中的表达部位。【方法】通过苏木精-伊红染色方法,制作正常生理状态下公鸡生殖器官切片,观察公鸡生殖器官的组织构造以及生殖管道上皮细胞变化规律;同时采用免疫组化定位IL-1β和IL-6在生殖器官的部位。【结果】实验表明,附睾中的管道在公鸡生殖管道中占有很大比例,且生殖管道的上皮细胞的变化特征与其输送精液高度适应;IL-1β和IL-6主要定位于附睾近端输出管上,且IL-1β主要定位于短皱褶的近端输出管,IL-6主要定位于长皱褶的近端输出管上。【结论】结果表明附睾的输出管,尤其是近端可能是清除生殖道中的异常精子、脱落细胞等异物的主要部位。