东北红豆杉内生真菌的鉴定-----新种和已知种及其代谢产物

从长白山自然保护区原始森林200多年生的东北红豆杉(TasxuscuspidateSiebetZucc.)的树皮中分离出94株内生真菌,鉴定出19种。其中,除10个新记录属种外,还包括2个新种:长线孢拟茎点(PhomopsislongiscoleosporuY.XiangetLuAnGuo,WuWenFang)和大孢盾壳霉(ConiothyriummacrospoumY.Xiang,LuAnGou,WuWenFang);1个新变种为紫杉链格孢[Alternariaalternata(Fr.)Keisslervar.taxiY.XiangetLuAnGuo];还有6个国内已知种:阿姆斯特丹散囊菌(EurotiumamstelodomiMgngin),匐散囊菌原变(EurotiumrepensdeBary),葡萄孢(Botrytissp.),桔青霉(PenicilliumcitrinumThom),黑附球孢(EpicoccumnigriumLinK),镰刀孢(Fusariumsp.)。用薄层层析技术,测定了各菌种发酵代谢产物,经筛选发现紫杉链格孢[Alternaria(Fr.)Keisslervar.taxiY.XiangetJ.X.Cui],葡萄孢(Botrytissp.),阿玛姆斯丹散囊菌(EurotiumamsteloodomiMgngin),匍匐散囊菌原变种(EurotiumrepensdeBary)4种内生真菌的代谢产物可与紫杉烷类物质显色剂——香草试液发生较明显的颜色反应,其中紫杉链格孢[Alternariaalternata(Fr.)Keisslervar.taxiY.XiangetJ.X.Cui]菌种的代谢产物中有一种含量较大的组分,还可与稀碘化铋钾生物碱试剂发生反应,该组分化合物经过光谱分析,为紫     

两株东北红豆杉内生真菌的生理特性

采用接种法，对两株东北红豆杉内生真菌散囊菌（Eurotium sp.,1001)和曲霉（Aspergillus sp.,1003)在不同温度、pH、碳源、氮源、培养基及糖质量浓度下进行了生理实验研究。结果表明：温度对两种菌株的生长和孢子的产生具有明显的影响；pH6－7时菌株生长良好，且可以保持较高的菌液质量浓度；两种菌株均以蔗糖为主要碳源，菌丝干质量与培养基质量浓度呈正向关系。     

东北红豆杉内生真菌的分离和筛选

从长白山自然保护区原始森林200多年生东北红豆杉（Tasxus cuspidata Siebet Zucc.)树皮中分离出21种内生真菌，经鉴定：1种属于子囊菌，20种属于半知菌。用薄层层析技术，测定了各菌种发酵代谢产物，经筛选发现：链格孢（Alternaria sp.,1011)、葡萄孢（Botrytis sp.,1014)、散囊菌（Eurotium sp.,1001)、曲霉（Aspergillus sp.,1003)4种内生真菌的代谢产物可与紫杉烷类物质显色剂－香草试液发生较明显的颜色反应。其中，链格孢（Alternaria sp.1011)菌种的代谢产物中有一种含量较大的组分还可与烯碘化铋钾生物碱试剂发生反应，经过光谱分析，该组分化合物I为紫杉烷类二萜Ⅲ型化合物，说明该菌能高产紫杉烷类物质。     

番茄灰霉病菌拮抗菌D2-4发酵条件的研究

对拮抗番茄灰霉病菌的 D2 - 4菌株培养基成分和发酵条件进行研究。结果表明 ,在 2 8℃ ,180 r· min- 1 振荡培养条件下 ,最佳发酵时间为 96 h左右 ,培养 2 0～ 2 4 h的种子液以 7%的接种量转接有利于提高抑菌活性 ,装液量为6 0 m L· 2 5 0 m L- 1 三角瓶 ,均匀设计试验得出 ,最佳培养基配方为 (10 0 m L发酵培养基中含 ) :黄豆饼粉 1.10 g、葡萄糖 2 .71g、蔗糖 1.0 0 g、Na Cl0 .10 g、酵母膏 0 .10 g、p H6 .6 1。     

慢生大豆根瘤菌与竞争结瘤相关的lrp基因的克隆

 通过对重组质粒 pGXN30 0中的 2 .3kbEcoRI片段测序分析发现 ,其中含有一完整的lrp基因和部分 putA基因 ,与King等报道的B .japonicum的lrp基因DNA序列有 88%同源性。应用Tn5gusA5定位诱变的方法获得了gusA基因表达的根瘤菌lrp基因突变体GX2 0 10 8。植株试验表明 ,突变株结瘤时间明显推迟 ,竞争结瘤能力也显著下降     

产紫杉烷类物质的链格孢1011菌种的培养和发酵条件

用真菌学方法对产紫杉烷类物质的链格孢1011菌种培养和发酵条件进行了研究，结果表明：该菌易培养，生长发育迅速。用固体培养基培养，划破菌落或变温交替培养，可促进大量产孢。发酵条件优化结果：种子培养的最佳时间为3d,发酵最佳培养时间为8d，前体物苯甲酸纳可促进化合物I的合成，通过氮、碳源优化组合，发酵培养基的最佳氮、碳源每100mL萄糖2．2g,花生饼粉2．6g,黄豆饼粉0．2g,淀粉2．2g,蛋白胨0．48g,酵母膏0．5g,氯化铵0．58g,硫酸镁0．3g,磷酸二氢钾0．3g。采用最佳发酵条件优化培养，可使发酵产物化合物I的组分比原始培养条件下产量提高了262％。     

抗番茄灰霉病菌农用抗生素D2-4发酵条件的研究

对拮抗番茄灰霉病菌的D2 -4菌株培养基成分和发酵条件进行了研究。经研究发现在28℃ ,180r·min -1条件下 ,最佳发酵时间为96h左右 ,培养20～24h的种子液以7 %的接种量转接有利于提高抑菌活性 ,装液量为60mL/250mL三角瓶 ,均匀设计试验得出,最佳培养基配方为:黄豆饼粉1.10 %、葡萄糖2.71 %、蔗糖1.00 %、NaCl0.10 %、酵母膏0.10 %、pH值6.61。     

慢生型大豆根瘤菌putA基因的功能分析

重组质粒pGX300上的putA基因是从慢生型大豆根瘤菌GX201中克隆到的编码脯氨酸脱氢酶的基因。通过Tn5gusA5定位诱变方法构建了putA基因的突变株GX20120，实验表明，GX20120的结瘤时间推迟，竞争结瘤能力降低。     

慢生大豆根瘤菌与竞争结瘤相关的lrp基因的克隆

通过对重组质粒pGXN300中的2.3kb EcoRI片段测序分析发现,其中含有一完整的lrp基因和部分putA基因,与King等报道的B.japonicum的lrp基因DNA序列有88％同源性。应用Tn5gusA5定位诱变的方法获得了gusA基因表达的根瘤菌lrp基因突变体GX20108。植株试验表明,突变株结瘤时间明显推迟,竞争结瘤能力也显著下降。     

辅酶Q10高产菌株的选育

以根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)1．1416为出发菌株，考察了紫外线(UV)、1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(NTG)和硫酸二乙脂(DES)对该菌株产生辅酶Q10能力的诱变效应，并结合辅酶Q10合成途径设计了快速筛选辅酶Q10高产菌株的模型。结果表明：NTG和DES交替诱变处理根癌土壤杆菌1．1416具有较好的诱变效果，筛选到的突变株AGR0619和AGR0610的辅酶Q10总产量分别提高了137．49％和156．07％。