西农萨能羊乳腺脂肪酸合酶基因exon 9-15的克隆与序列分析

 【目的】山羊FAS基因exon 9-15编码的乙酰/丙二酸单酰基转移酶（acetyl-CoA and malonyl-CoA transacylases,AT/MT）区域对山羊乳短、中链脂肪酸的合成起重要调控作用。本研究针对西农萨能羊乳腺FAS基因exon 9-15进行克隆和序列分析。【方法】以处于泌乳期28 d的西农萨能羊乳腺组织mRNA反转录的cDNA为模板，通过RT-PCR方法首次扩增出西农萨能羊乳腺FAS基因exon 9-15的cDNA序列全长及exon 8 的3′端和exon 16 的5′端部分cDNA序列（GenBank收录号为DQ 915966），并对其进行了同源性分析和功能预测。【结果】克隆片段全长1 449 bp，其中包括exon 9-15共1 388 bp、exon 8的3′端9 bp和exon 16 的5′端52 bp，编码483个氨基酸，包含编码的AT/MT区域951 bp（454～1404 nt）；西农萨能羊乳腺FAS基因exon 9-15与牛（NM_001012669），人（NM_004104），大鼠（NM_017332）和鸡（NM_205155）核苷酸序列相似度分别为95%、85.7%、82.7%、73.2%，氨基酸相似度分别为92.9%、77.7%、82.3%、64.7%；exon 10较其它物种缺失1个氨基酸。【结论】克隆获得西农萨能羊FAS基因片段全长1 449 bp，外显子9-15大小分别为463、185、190、95、135、204和116 bp；核苷酸及氨基酸序列与牛相应序列的同源性均高于其它物种；AT/MT区域的活性位点在各物种间均为高度保守的丝氨酸，但西农萨能羊exon 10较其它物种缺失1个氨基酸，这可能对AT/MT区域的空间构象及其生理功能产生重要影响。本研究为西农萨能羊FAS基因cDNA全长克隆以及基因功能研究奠定了重要基础。     

共轭亚油酸对奶山羊公羔肉用性能及肌肉和脂肪中脂肪酸组成的影响

研究旨在探讨日粮中添加不同水平的共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)对奶山羊公羔肉用性能以及肌肉和脂肪中脂肪酸组成的影响。选择28只健康、体重相近(25.46±4.37kg)的关中奶山羊公羔,按随机区组试验设计原则等分为4组。每组7个重复,每个重复1只。对照组(C组)饲喂基础日粮,试验组分别饲喂添加1%(CLA1组)、2%(CLA2组)和3%(CLA3组)CLA油的试验日粮。试验期12周。结果表明:日粮中CLA添加水平对奶山羊公羔生长性能无显著影响(P>0.05);除CLA1组的胴体胸深显著高于CLA2组(P<0.05)、CLA1组的胸肌厚度显著高于对照组和CLA3组(P<0.05)外,其他肉用性能指标在各组间差异均不显著(P>0.05);肌肉和脂肪中顺-9,反-11-CLA、反-10,顺-12-CLA和总CLA的含量随日粮CLA添加水平的升高显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01)。由此得出,日粮添加CLA可以提高肌肉和脂肪中CLA含量,改善羊肉品质。     

西农萨能奶山羊gBTN1A1基因的筛选、克隆及序列分析

利用抑制消减杂交技术研究同一只西农萨能奶山羊泌乳中期和末期的乳腺组织差异表达基因,以泌乳中期乳腺cD-NA为测试组,末期乳腺cDNA为驱动组,构建消减文库,得到山羊(Capra hircus)嗜乳脂蛋白基因的部分序列。根据牛(Bos)和绵羊(Ovisaries L.)基因组序列进行电子拼接,并设计引物,得到山羊嗜乳脂蛋白基因的CDs区全序列,应用RT-PCR技术从山羊乳腺组织总RNA中扩增克隆了山羊嗜乳脂蛋白基因CDs区,命名为gBTN1A1,并登录GenBank(EF102891)。gBTN1A1基因开放读码框由1581个碱基组成,编码526个氨基酸,前26个氨基酸为推定的信号肽区域。gBTN1A1基因核苷酸序列与牛(NM-174508)、人(NM-001732)和鼠(AK145168)的同源性分别为97%、88%和84%,氨基酸序列的同源性分别为96%、84%和70%。其二级结构、跨膜区域及信号肽分析均与牛、人和鼠的BTN1A1基因相似。     

不同胎次西农萨能羊鲜乳中链和短链脂肪酸组成的初步研究

以陕西省千阳县萨能羊种羊场的产奶羊群为研究对象,共采集5个胎次87只产奶羊的新鲜乳样,用气相色谱仪和乳成分测定仪分别测定了鲜乳的中、短链脂肪酸组成和乳成分含量。结果表明,不同胎次间丁酸(C4∶0)、己酸(C6∶0)、辛酸(C8∶0)和葵酸(C10∶0)的含量差异不显著(P>0.05);但胎次对月桂酸(C12∶0)和肉豆蔻酸(C14∶0)含量的影响作用达显著水平(P<0.05);长链脂肪酸中除亚油酸(C18∶2)含量在胎次间无显著差异(P>0.05)外,棕榈酸(C16∶0)、硬脂酸(C18∶0)和油酸(C18∶1)含量均存在显著差异(P<0.05)。乳成分中乳糖含量在不同胎次间差异不显著(P>0.05),而乳脂含量、乳蛋白含量、乳中干物质含量、乳中非脂固形物含量在不同胎次间均表现出显著差异(P<0.05)。     

共轭亚油酸对奶山羊公羔肉用性能以及肌肉和脂肪中脂肪酸组成的影响

本研究旨在探讨日粮中添加不同水平的共轭哑油酸(conjugated linoleic acid,CLA)对奶山羊公羔肉用性能以及肌肉和脂肪中脂肪酸组成的影响.选择28只健康、体重相近[(25.46±4.37)kg]的关中奶山羊公羔,按随机区组试验设计原则等分为4组.每组7个重复,每个重复1只.对照组(C组)饲喂基础日粮,试验组分别饲喂添加1%(CLA1组)、2%(CLA2组)和3%(CLA3组)CLA油的试验日粮.试验期12周.结果表明:日粮中CLA添加水平对奶山羊公羔生长性能无显著影响(P>0.05);除CLA1组的胴体胸深显著高于CLA2组(P<0.05)、CLA1组的胸肌厚度显著高于C组和CLA3组(P<0.05)外,其他肉用性能指标在各组间差异均不显著(P>0.05);肌肉和脂肪中cis-9,trans-11-CLA、trans-10,cis-12-CLA和总CLA的含量随日粮CLA添加水平的升高显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01).由此得出,日粮添加CLA可以提高肌肉和脂肪中CLA含量,改善羊肉品质.     

西农萨能羊两个泌乳阶段差异表达基因SAA3的克隆和序列分析

为了研究不同泌乳期乳腺组织中差异表达基因，利用抑制性削减杂交技术构建西农萨能羊泌乳60d乳腺组织及泌乳28d乳腺组织中差异表达基因文库，用Real-Time PCR技术验证阳性克隆血清淀粉样蛋白A3（SAA3）基因，通过RT-PCR方法克隆西农萨能羊乳腺组织SAA3，并进行序列比对和功能预测。结果成功构建了西农萨能羊不同泌乳期乳腺组织中差异表达基因文库，筛选克隆了乳腺组织SAA3基因，GenBank登录号为：DQ839400，编码区长度为396bp，含有131个氨基酸。西农萨能羊乳腺组织中SAA3与牛（GenBank：NM_181016）、兔（GenBank：M64696．1）、人（GenBank：BC020795）、鼠（GenBank：NM_011315）核苷酸同源性分别为95％、84．3％、81.3％和81.9％，氨基酸同源性为93％、76％、72％、72％；在编码区261-287位较人、兔、鼠SAA编码区多27个碱基，连续大于5个氨基酸的保守区域有6个，较人SAA多3个潜在功能基序。     

gBTN1A1基因的筛选、克隆及序列分析

利用抑制消减杂交技术研究西农萨能羊泌乳中期和末期的乳腺组织差异表达基因，构建消减文库，得到山羊嗜乳脂蛋白的部分序列，根据牛和绵羊基因组序列进行电子拼接，设计引物，得到山羊嗜乳脂蛋白的CDs区全序列，应用RT-PCR技术从山羊乳腺组织总RNA中扩增克隆了山羊嗜乳脂蛋白基因CDs区，命名为gBTN1A1,并登录Genbank（EF102891）。gBTN1A1全基因由7个外显子和6个内含子组成，开放读码框由1581个碱基,编码526个氨基酸，gBTN1A1基因核苷酸序列与牛、人和鼠的同源性为97%, 88%, 84%，蛋白质序列的同源性为96%, 84% and 70%。其二级结构、跨膜区域及信号肽分析与牛、人和鼠相似，所以推测gBTN1A1与乳脂肪球的分泌密切相关，根据其在泌乳期表达丰度的差异推测其可能影响山羊产奶量。