玉米黑粉菌CYP51基因的克隆与表达

细胞色素P450甾醇14-a-脱甲基酶(P45014DM或CYP51)是真菌细胞膜麦角甾醇生物合成过程中的一个关键酶,它的缺乏将导致膜结构的破坏和功能消失,最终导致真菌死亡。从玉米黑粉菌中克隆得到一缺失102个核苷酸的玉米黑粉菌CYP51基因,并构建重组表达载体pE30YH1-14DM。玉米黑粉菌CYP51的克隆为研究CYP51结构和功能提供了实验基础,同时也为研究其它植物病原真菌CYP51进而为设计开发新型的具有更强结合作用和更高选择性14 a-脱甲基化酶抑制剂类杀菌剂提供了实验依据。     

纳米二氧化铈对斜生栅藻的毒性研究

实验研究了纳米二氧化铈(CeO2)对斜生栅藻的毒性效应.结果显示,当纳米二氧化铈浓度为5、10 mg·L-1时,对斜生栅藻的生长有促进作用(P＜0.01),其促进作用随着浓度增大而减小;至浓度为50 mg· L-1时,开始变为抑制效应;当浓度达到100、200mg· L-1时,表现出显著的抑制作用(P＜0.01),且抑制作用随着浓度增大而增大.光镜拍照和藻细胞直径的变化表现出,随着处理浓度的增大,细胞有小型化的趋势.处理7d后,纳米二氧化铈对叶绿素和SOD含量的影响和对藻密度的影响一致,而对MDA含量的影响刚好相反,说明细胞膜发生了不同程度的脂质过氧化反应.     

新型含氮化合物对柑桔绿霉菌的离体抑菌活性及其构效关系

为寻找对柑桔绿霉菌具有抑制作用的活性化合物,采用生长速率法并结合光谱法评价两种商品化三唑类杀真菌剂和四种新型含氮化合物对柑桔绿霉菌的抑菌活性及与柑桔绿霉菌CYP51的结合能力。结果表明:7-甲氧基-2-氢-苯并[b][1,4]噻嗪-3-胺对柑桔绿霉菌表现出强抑制作用,EC50值达1.18mg/L,与商品化三唑类杀真菌剂烯唑醇的EC50值(0.09mg/L)接近;而其余三种新型含氮化合物显示出中等程度的抑制作用,EC50值分别为7.88、10.09和38.56mg/L。不同化合物与异源表达的重组柑桔绿霉菌CYP51的结合能力不同,对柑桔绿霉菌生长抑制的EC50越大,结合常数越大,即化合物与靶标酶CYP51的结合能力与抑菌活性呈正相关。     

纳米二氧化铈对斜生栅藻的毒性研究

实验研究了纳米二氧化铈（CeO2）对斜生栅藻的毒性效应。结果显示,当纳米二氧化铈浓度为5、10mg·L-1时,对斜生栅藻的生长有促进作用（P〈0.01）,其促进作用随着浓度增大而减小;至浓度为50mg·L-1时,开始变为抑制效应;当浓度达到100、200mg·L-1时,表现出显著的抑制作用（P〈0.01）,且抑制作用随着浓度增大而增大。光镜拍照和藻细胞直径的变化表现出,随着处理浓度的增大,细胞有小型化的趋势。处理7d后,纳米二氧化铈对叶绿素和SOD含量的影响和对藻密度的影响一致,而对MDA含量的影响刚好相反,说明细胞膜发生了不同程度的脂质过氧化反应。     

玉米黑粉菌cyp51基因上游调控区克隆及生物信息学分析

为探明玉米黑粉菌cyp51基因的表达调控机制,根据玉米黑粉菌cyp51基因cDNA的5'-序列,采用染色体步移技术,获得其5'-上游调控区序列,总长为490bp.利用NNPP分析软件预测转录起始位点,并采用TFSEARCH 1.3软件分析转录因子结合位点.结果显示:转录起始位点位于上游134bp处;上游调控区不仅包含启动子的核心结构序列TATA盒(分别位于-30、-58、-318和-348 bp处)和CAAT盒(分别位于-150、-161和-191 bp处),亦包含多个转录因子结合位点,如AP-4、GATA-1、CdxA、Dfd和Oct-1等;在上游调控序列中嘌呤含量高,而且从-222 bp处开始存在4个连续高嘌呤含量的热激转录因子特异性结合位点(HSE).     

叶蝉散人工抗原中间产物2-异丙基苯甲酰氯的合成

根据叶蝉散分子结构的特点,对叶蝉散人工抗原的合成进行了3步实验设计,即以叶蝉散为原料,在强碱性(pH>12)下水解生成2-异丙基苯酚,再加入三光气反应生成活性中间体2-异丙基苯甲酰氯,然后再与6-氨基己酸合成2-苯异丙基-N-(5-羧基戍烷)氨基甲酸酯。此研究成功地进行2步化学反应,并获得2步化学反应产物:2-异丙基苯酚和2-异丙基苯甲酰氯,从而为叶蝉散多克隆抗体和单克隆抗体的制备提供帮助。     

杂草对作物产量损失的经验模型

本文讨论一个描述杂草为害导致作物产量损失的经验模型。该模型能反映杂草与作物产量损失的关系特征,其参数具有显著的生物学意义。用不同来源的试验资料进行测试,结果表明,模型具有较高的预测可信度,其参数所反映的生物学意义与实际情况基本一致。     

三聚氰胺对斜生栅藻的毒性研究

采用光照培养箱培养斜生栅藻的方法,以甘油为溶剂,研究了三聚氰胺对斜生栅藻的毒性效应.结果显示,当三聚氰胺的浓度在50、200 mg·L-1时,对斜生栅藻生长有促进作用,在750 mg·L-1时则表现出抑制效应,染毒7 d后对叶绿素的影响和对藻密度的影响一致,显示浓度-效应关系,即浓度越高抑制效应越明显.三聚氰胺对斜生栅藻超氧化物歧化酶(SOD)的影响表现为:当三聚氰胺浓度为200 mg·L-1时酶的活性达到峰值,然后开始下降,在750 mg·L-1 SOD的活性与对照相比减少了43.6%,三聚氰胺对斜生栅藻的脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的影响和对可溶性糖的影响效应是一致的,随着浓度的增加均在减少.     

三聚氰胺对斜生栅藻的毒性研究

采用光照培养箱培养斜生栅藻的方法,以甘油为溶剂,研究了三聚氰胺对斜生栅藻的毒性效应。结果显示,当三聚氰胺的浓度在50、200 mg.L-1时,对斜生栅藻生长有促进作用,在750 mg.L-1时则表现出抑制效应,染毒7 d后对叶绿素的影响和对藻密度的影响一致,显示浓度-效应关系,即浓度越高抑制效应越明显。三聚氰胺对斜生栅藻超氧化物歧化酶（SOD）的影响表现为：当三聚氰胺浓度为200 mg.L-1时酶的活性达到峰值,然后开始下降,在750 mg.L-1 SOD的活性与对照相比减少了43.6%,三聚氰胺对斜生栅藻的脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的影响和对可溶性糖的影响效应是一致的,随着浓度的增加均在减少。     

基于柑橘绿霉菌CYP51同源模建的定点突变与抗性机制分析

为阐明杀菌剂与PdCYP51的相互作用及其抗性机制,基于最新解析的真核生物人类的CYP51晶体结构,同源模建了PdCYP51的三维结构,并选取商品化的杀菌剂烯唑醇进行分子对接,预测影响PdCYP51与烯唑醇相互作用的关键氨基酸。采用定点突变技术获得了PdCYP51-Y112H、F120L、F120D和S309A 4种突变体（PdCYP51m）。结果表明,突变体蛋白PdCYP51-Y112H、F120L、F120D和S309A表达量均有不同程度的变化,PdCYP51-Y112H和F120L与未突变蛋白表达量相当,而PdCYP51-F120D和S309A表达量增加。4种突变体与杀菌剂的结合能力降低,其结合常数分别为1.28、0.18、1.03和1.31μmol/L,均大于未突变PdCYP51的0.12μmol/L。表明这些氨基酸是杀真菌剂烯唑醇与PdCYP51结合的关键氨基酸,PdCYP51与烯唑醇形成的疏水性空腔和稳定配体杀菌剂分子的作用力是酶蛋白与杀菌剂结合的重要因素。