拟南芥LRR-RLK家族蛋白CLV1胞外域的可溶性表达与纯化

大肠杆菌NusA蛋白与拟南芥LRR-RLK家族蛋白CLAVATA1(CLV1)胞外结构域(Ectodomain,ECD)融合表达,实现了蛋白CLV1-ECD的可溶性表达;CLV1-ECD与其配体蛋白CLAVATA3(CLV3)共表达,可以明显提高它的水溶性。该实验方法快速简易地获得了大量纯化的CLV1-ECD蛋白,避免了包涵体变性与复性的复杂过程,为植物CLAVATA信号系统的进一步研究奠定了基础。     

传染性法氏囊病病毒VP5蛋白跨膜区的敲除及可溶性原核表达研究

[目的]构建敲除传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP5蛋白跨膜区序列的原核表达载体，并进行目的蛋白的表达、分离和纯化。[方法]利用PCR技术分别扩增IBDVVP5基因的胞外片段和胞内片段，然后将2个片段及pET-28b（＋）同时相接，即载体一胞内片段一胞外片段一载体，构建了敲除跨膜区基因片段的VP5重组表达质粒pET—VP5-FC及改进后的pET—VP5-SC。将表达质粒转化BL21（DE3），IPrG诱导后经Ni亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组蛋白。[结果]得到可溶性表达的IBDVVP5。[结论]为进一步研究VP5蛋白的结构与功能奠定了基础。     

传染性法氏囊病病毒VP5蛋白跨膜区的敲除及可溶性原核表达研究

[目的]构建敲除传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP5蛋白跨膜区序列的原核表达载体,并进行目的蛋白的表达、分离和纯化。[方法]利用PCR技术分别扩增IBDVVP5基因的胞外片段和胞内片段,然后将2个片段及pET-28b（＋）同时相接,即载体-胞内片段-胞外片段-载体,构建了敲除跨膜区基因片段的VP5重组表达质粒pET-VP5-FC及改进后的pET-VP5-SC。将表达质粒转化BL21（DE3）,IPTG诱导后经Ni亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组蛋白。[结果]得到可溶性表达的IBDVVP5。[结论]为进一步研究VP5蛋白的结构与功能奠定了良好的基础,另外为本文的研究方法对其它跨膜蛋白的可溶性表达及进一步研究也有一定的借鉴意义。     

胡杨CBL1蛋白溶液的DSC研究

胡杨CBL1蛋白是一类重要的钙信号转导蛋白，在植物应对干旱、低温、高pH等环境胁迫中发挥着重要作用。本研究通过差示扫描量热法，研究胡杨CBL1蛋白在-30~0℃与20~95℃的温度条件下的热力学性质。结果表明，虽然胡杨CBL1蛋白在应对低温环境胁迫中发挥作用，但是胡杨CBL1蛋白本身并不具有抗冻性能，且其熔化过程中的冰晶含量与保留温度呈指数对应关系；而在加热过程中，胡杨CBL1蛋白在81.6℃左右不可逆变性，在变性之前胡杨CBL1蛋白的熵与焓增量逐渐减小，在变性之后熵与焓迅速增加，显示出胡杨CBL1蛋白具有较高的热稳定性。