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mRNA差异显示技术的研究进展 总被引:6,自引:0,他引:6
针对mRNA差异显示技术中的假阳性高和放射性污染等缺陷.文章从改进引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定等方而进行了综述。①采用4种兼并或单碱基引物作锚定引物;用特异和长序列(≥20bp)专一性引物作为随机引物.可增加特异性;在锚定引物之前加上了一段T 启动子序列.在随机引物前加上一段M 重复序列.可使DDRT—PCR的体系的扩增特异性更一致。②针对放射性同位素检测法的缺点。文章提出并比较了几种常用的非放射性同位素标记方法。③保证起始(模板)mRNA质量和浓度,降低dNTP浓度,选择最适的反转录和PCR退火温度.可优化PCR参数。④用两种不同的反转录酶进行反转录平行实验,很容易区分出RNA制备过程中造成的假阳性.目前假阳性鉴定大多还是以Northern印迹为基础,再作些适当的改进。 相似文献
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