寒胁迫诱导灰木相思无性系差异蛋白的表达

本实验提取寒胁迫前后的灰木相思组培苗的水溶性蛋白进行双向电泳和质谱鉴定,分析在寒胁迫条件下蛋白质组的变化。利用ImageMaster 5.0软件分析比较,经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定差异蛋白点的肽质量指纹图谱,通过Mascot软件查询Swiss-Prot等数据库,鉴定得到4个显著差异蛋白点,R7、R15、R20表现为上调表达,R17表现为下调表达。结果表明:在寒胁迫条件下灰木相思组培苗存在明显的蛋白质表达差异。     

甘蔗叶片蔗糖磷酸合成酶基因cDNA克隆及序列分析

蔗糖磷酸合成酶（sucrose phosphate synthase, SPS）是高等植物体内控制蔗糖合成的关键酶之一。根据已报道的甘蔗蔗糖磷酸合成酶基因SoSPE2（GenBank登录号：AB001338.1）序列，采用RT-PCR方法从甘蔗（Saccharum officinarum FN95-1702）叶片中克隆获得SPS基因的eDNA片段。测序结果表明，该eDNA长3013 bp，其中第59-2953位是该基因的开放阅读框（ORF），编码964个氨基酸。与GenBank上已公布的序列比对分析表明，二者序列相似性达99.07％，氨基酸序列相似性达98.86％。     

利用基因芯片筛选甘蔗成熟期叶片差异表达候选基因

利用Agilent甘蔗4×44k(per array)芯片分析甘蔗叶片在甘蔗成熟期的差异表达基因,并通过生物信息学手段对基因芯片杂交结果进行分析。芯片杂交结果符合质控标准,并且杂交数据重复性良好,结果可靠。在甘蔗生长过程中8个时间点上,共筛选出相关差异在2倍以上的基因20个,其中上调表达基因17个,下调表达基因3个。这些候选基因分别涉及不同水平分子进程和多种代谢途径。     

酿酒酵母耐高温提高技术研究进展

本文介绍了耐高温酵母的耐热机制,同时总结了提高酿酒酵母耐热性的技术研究进展,主要包括高温驯化、自然选育、诱变育种、原生质体融合育种及 Genome shuffling技术,重点介绍了 Genome shuffling术的原理及其在选育耐高温酵母应用中的优势,该技术与传统微生物育种技术、现代生物技术相结合,将大大提高耐高温乙醇酵母菌种的选育效率。     

NaCl胁迫下萝卜幼苗根系生理和细胞核形态的变化

以萝卜幼苗为材料,研究了0.15 mol/L NaCl胁迫处理不同时间其根系的生长速度、活力、过氧化物酶(POD)活性和相对电导率的变化,并观察了根尖细胞核形态的变化.结果表明,随着NaCl胁迫时间的延长,萝卜幼苗根系生长速度减慢,根系活力降低,胁迫时间超过48 h时,二者均迅速下降,表现得更为明显;萝卜幼苗根系POD活性和相对电导率则不断增大,胁迫48 h时达到最大,之后POD活性迅速降低,相对电导率随之降低;根尖细胞核由原来规则的圆形转变为各种不规则形状,出现不同程度的凋亡特征.     

海藻酸钠固定化果糖基转移酶的催化特性及其合成低聚果糖的研究

果糖基转移酶是酶法生产低聚果糖的关键催化剂,固定化酶具有催化特性稳定、重复使用及节省用酶成本的优势,开展固定化果糖基转移酶催化特性的研究对其工业化应用提供数据依据。以海藻酸钠为载体,采用包埋法固定化果糖基转移酶,探究其最适催化温度、热稳定性,最适反应pH及pH稳定性、酶催化动力学等催化特性,并对固定化果糖基转移酶催化合成低聚果糖的应用进行初步研究。结果表明：海藻酸钠包埋法固定化果糖基转移酶的最适催化温度为50℃,pH值为5.0,酶学动力学米氏常数K_m值为0.03 mg·mL^-1,采用该固定化酶以蔗糖为底物可制得48.03%纯度的低聚果糖。海藻酸钠固定化果糖基转移酶相对游离酶具备更好的与蔗糖底物的亲和性、更佳的温度与pH稳定性,具备更好的工业应用潜力。     

甘蔗F2KP基因的分子改造及其表达载体的构建

果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酯酶(fructose-6-phosphate,2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase,F2KP)是影响生物碳积累和分配的调控关键酶,同时也是一个具有激酶和酯酶两种催化活性的双功能酶。为筛选出高酯酶酶活性的改造酶分子,本研究通过定点突变与片段缺失方法改造蔗叶F2KP基因,将蔗叶F2KP基因的Asp442、His508和Arg446分别突变为Gly、Ala和Pro,并且将分别缺失F2KP基因的酯酶的大部分和激酶的大部分构建F2KP激酶重组片段和酯酶重组片段,将突变后的基因与表达载体pPIC9K双酶切后进行连接,构建重组质粒。经过菌落PCR和双酶切重组质粒均证明已将目的片段转到酵母表达载体pPIC9K内。     

甘蔗叶片蔗糖磷酸合成酶基因cDNA克隆及序列分析

蔗糖磷酸合成酶(sucrose phosphate synthase,SPS)是高等植物体内控制蔗糖合成的关键酶之一。根据已报道的甘蔗蔗糖磷酸合成酶基因SoSPS2(GenBank登录号:AB001338.1)序列,采用RT-PCR方法从甘蔗(Saccharum officinarum FN95-1702)叶片中克隆获得SPS基因的cDNA片段。测序结果表明,该cDNA长3013 bp,其中第59-2953位是该基因的开放阅读框(ORF),编码964个氨基酸。与GenBank上已公布的序列比对分析表明,二者序列相似性达99.07%,氨基酸序列相似性达98.86%。     

低温胁迫诱导灰木相思组培苗细胞凋亡

利用显微观察和DNA凝胶电泳等技术,研究在低温胁迫诱导下灰木相思组培苗细胞的凋亡和对低温环境的耐受性.显微结构观察表明,随着温度降低,细胞核出现明显的凋亡特征,证实低温胁迫可诱导灰木相思组培苗细胞凋亡,同时灰木相思组培苗对低温的耐受性是有限的,超过某一强度时,细胞会死亡.     

灰木相思离体培养体系的构建

灰木相思Acacia implexa是南方优良的多用途造林树种,但种子繁殖性状分离严重,试图通过组织培养找到新的繁育途径。通过对灰木相思成年优树幼嫩的带腋芽茎段的离体培养试验,探讨了灰木相思茎段不定芽分化、继代增殖和壮苗生根的最佳培养条件。采用正交试验对防止培养过程中出现玻璃化苗的方法进行了探讨。结果表明:适宜灰木相思不定芽诱导的培养基配方为MS(Murashige and Skoog) 1.0 mg.L-16-苄氨基嘌呤(6-BA) 0.2 mg.L-1萘乙酸(NAA) 1.0 mg.L-1玉米素(ZT),适宜继代培养的培养基为改良1/2 MS(NH4 ∶NO3-=1∶2) 1.0 mg.L-16-BA 0.05 mg.L-1NAA,适宜进行壮苗生根的培养基配方为改良1/2MS 0.1 mg.L-1NAA,移栽后成活率可达70%。表3参11