自然流产蜕膜组织STAT1表达及其生物学意义研究

为了探讨信号传导子及转录激活子1在胚胎植入过程中的作用, 取正常妊娠(6W～11W)人工流产子宫蜕膜组织30例, 自然流产蜕膜组织30例, 利用RT-PCR, 原位杂交, 免疫组织化学, 蛋白印迹, 免疫荧光化学方法对流产组与正常妊娠蜕膜中STAT1进行定性定量检测. 结果表明: STAT1在正常妊娠6W～11W蜕膜表达呈逐渐降低趋势, 但差异无统计学意义(p＞0.05), 流产组蜕膜STAT1平均表达量显著高于正常妊娠组(p＜0.05). 说明在自然流产子宫蜕膜组织中, STAT1高表达可能通过促进蜕膜细胞过度凋亡和抑制细胞增殖而影响胚胎正常植入, 这可能是诱发流产的原因之一.     

早孕小鼠子宫内膜ICAM-1的表达及意义

探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)基因及蛋白在早孕小鼠子宫内膜的表达及其意义 方法: 收集妊娠1-5 d的早孕小鼠子宫内膜,利用RT-PCR、免疫组织化和Western-blot方法检测ICAM-1基因及蛋白的表达及分布;着床期小鼠单侧宫角注射ICAM-1单抗,观察胚胎着床变化. 结果: 1. ICAM-1 mRNA孕D1到D3逐渐增高,D4达最高,D5开始降低;2. 子宫内膜上皮细胞,基质细胞,血管上皮细胞均有ICAM-1的表达,阳性细胞数量、表达强度和表达时间呈现一定规律性;3. ICAM-1 D1、D2、D3略有升高,D4有强表达,D5略有下降;4. 单侧宫角注射ICAM-1单抗后,该侧胚胎发生流产. 结论: ICAM-1在早孕小鼠子宫内膜的表达变化及分布,提示ICAM-1参与了胚泡着床,ICAM-1可能起调节子宫内膜的局部免疫作用.     

小鼠胚泡围着床期子宫内膜骨桥蛋白的表达

目的：探讨骨桥蛋白（OPN）在小鼠胚泡围着床期子宫内膜组织中的表达情况.方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫印迹（Western Blotting）、免疫组化等方法研究了OPN在孕d3.5、d4.5、d5.5、d6.5及非孕小鼠子宫内膜上的表达.结果：OPN在胚泡围着床期表达较非孕小鼠子宫内膜的表达显著增加,孕d3.5表达升高,d4.5（窗口期）达最高峰,d5.5表达降低、d6.5急剧降低.OPN主要在小鼠子宫内膜的腺上皮和腔上皮表达.结论：OPN在小鼠胚泡围着床窗口期大量表达,提示其可能参与了胚泡着床并起着重要的作用.     

基于森林康养的重庆市大圆洞国家森林公园发展策略

康养型森林公园是一种强调森林保健、养生、休憩功能的森林旅游形式。在我国,康养型森林公园尚处于起步期,缺乏理论与方法指导。以重庆大圆洞国家森林公园为例,进行实地调查,利用中华人民共和国林业行业标准《森林养生基地质量评定》(LY/T 2789—2017)对其质量评价的基础上,分析了大圆洞国家森林公园关于森林康养的软硬件方面存在的问题,提出了主要针对评价得分较低的森林养生活动区、餐饮设施、保健设施、森林养生步道等指标的发展策略,为大圆洞国家森林公园发展提供依据,也为康养型森林公园的规划提供理论和操作指导。     

小鼠胚胎发育不同阶段肝脏差异蛋白质组分析

利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离胎龄12,13,14,16,18d的胎鼠及成鼠肝脏总蛋白,考染显色．PDQuest2DE软件分析获得6个不同发育时期的蛋白质表达谱。从总体看,14,16,18d胎鼠与成鼠肝脏的蛋白质表达谱较为一致,而12d和13d的肝脏蛋白质表达谱则与它们有较明显的差异,其蛋白质表达量显著降低,许多蛋白甚至缺失。以18d的胎肝图谱为参考,14,16d与其匹配率分别为57％,61％,成鼠与其匹配率为69％。与18d胎肝图谱相比,14d表达上调3倍以上的点有27个,16d表达上调3倍以上的点有13个,成鼠表达上调3倍以上的点有15个。并应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对14个差异蛋白质进行分析鉴定,经数据库查询,其中6个蛋白点获得了有意义的结果,分别为细胞周期依赖激酶调节亚基1、凡科尼蛋白、酪氨酸蛋白激酶BLK、通用转录因子3C多肽4、TBC1家族因子13、巨噬细胞受体MARCO。研究结果表明,在小鼠胚胎发育过程中,肝脏合成蛋白的种类和数量均迅速增加,并且细胞的增殖和生长、免疫功能的发育和完善以及蛋白质与核酸的合成和运输在其胎肝发育过程中起着非常重要的作用。     

早孕小鼠子宫内膜MMP10的表达及其意义

目的：探讨基质金属蛋白酶10（MMP10）基因及其蛋白在早孕小鼠子宫内膜组织中的表达规律及意义.方法：采用RT-PCR、原位杂交、免疫组化和Western-blot法分别检测受孕3-7 d的小鼠子宫内膜MMP10基因和蛋白的表达及分布,并以未孕小鼠子宫内膜为对照.结果：①早孕小鼠子宫内膜组织MMP10基因和蛋白的表达较未孕小鼠均显著增加,且表达量从着床前期到着床后期逐渐增强,其中d6、d7表达最强,与其他妊娠各期比较差异有统计学意义;②MMP10基因和蛋白表达主要分布在子宫内膜间质细胞.结论：MMP10在早孕小鼠子宫内膜组织中高表达可能有利于降解细胞外基质,促进胚胎滋养细胞的侵袭,参与着床中子宫内膜的蜕膜化过程以及胚胎的早期增殖与分化.     

抗rmNDPK-B抗体的制备、纯化、鉴定及应用

为制备抗rmNDPK-B多克隆抗体,以纯化后的rmNDPK-B为抗原,改良法免疫新西兰兔,琼脂双向扩散法分析抗体滴度,SDS-PAGE和Western-blot鉴定纯化后的抗体,结果发现,已获得高效价、高纯度的抗rmNDPK-B多克隆抗体;再分别以此抗体和抗rhNDPK-B抗体为一抗,Western-blot和免疫组织化学法检测小鼠子宫内膜组织中的NDPK-B的表达和分布.结果提示,在检测妊娠小鼠子宫内膜组织NDPK-B的表达时,抗rmNDPK-B抗体的特异性明显高于抗rhNDPK-B抗体.妊娠小鼠子宫内膜组织NDPK-B的表达显著高于非妊娠鼠.这表明用改良法制备的抗rmNDPK-B多克隆抗体具有高特异性、高效价和较高的灵敏性.nm23-M2/NDPK-B可能参与了胚泡着床过程.     

从LongSAGE标签获取cDNA长片段的3'-RACE方法的建立

长标签基因表达系列分析和末端快速扩增都是目前人类基因组研究中的重要方法.该文介绍了一种我们改良以后的末端快速扩增方法(3'-RACE),用于从LongSAGE标签扩增基因3'端序列.实验证明该方法技术稳定、重复性好,所获得的3'端cDNA纯度高、完整性好,表明该方法切实可行.     

小鼠胚泡着床期LongSAGE文库中双标签的制备研究

研究探讨小鼠胚胎着床期LongSAGE文库构建过程中总RNA提取、cDNA合成及双标签(D itags)制备方法,优化PCR扩增中双标签PCR的最佳模板稀释度及扩增循环次数。     

小鼠胚胎发育不同阶段肝脏差异蛋白质组分析

利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离胎龄12,13,14,16,18 d的胎鼠及成鼠肝脏总蛋白,考染显色,PDQuest 2 DE软件分析获得6个不同发育时期的蛋白质表达谱.从总体看,14,16,18 d胎鼠与成鼠肝脏的蛋白质表达谱较为一致,而12 d和13 d的肝脏蛋白质表达谱则与它们有较明显的差异,其蛋白质表达量显著降低,许多蛋白甚至缺失.以18 d的胎肝图谱为参考,14,16 d与其匹配率分别为57%,61%,成鼠与其匹配率为69%.与18 d胎肝图谱相比,14 d表达上调3倍以上的点有27个,16 d表达上调3倍以上的点有13个,成鼠表达上调3倍以上的点有15个.并应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对14个差异蛋白质进行分析鉴定,经数据库查询,其中6个蛋白点获得了有意义的结果,分别为细胞周期依赖激酶调节亚基1、凡科尼蛋白、酪氨酸蛋白激酶BLK、通用转录因子3 C多肽4、TBC 1家族因子13、巨噬细胞受体MARCO.研究结果表明,在小鼠胚胎发育过程中,肝脏合成蛋白的种类和数量均迅速增加,并且细胞的增殖和生长、免疫功能的发育和完善以及蛋白质与核酸的合成和运输在其胎肝发育过程中起着非常重要的作用.