猪精子和睾丸组织RNA的初步分析

试验采用Trizol一次法提取猪精子和睾丸组织的总RNA,然后通过RT-PCR扩增的方法,检测精子和睾丸组织中Protamine-1(PRM-1)、Protamine-2(PRM-2)、Clusterin、Heat shock protein 90(HSP90)、C-myc基因的mR-NA是否存在;通过不同精子数量的使用,检测在本试验条件下扩增出清晰PRM-1带所需要的适宜精子数量;通过琼脂糖电泳检测精子与睾丸组织RNA的电泳特征.结果,猪睾丸组织中有PRM-1、PRM-2、Clusterin、HSP90、C-myc的mRNA,而射出的猪精子(上游处理)本试验只检测出PRM-1的mRNA;在使用RNA沉淀剂时,3.0×107～6.5×107精子可得到清晰的PRM-1条带;本试验首次得到猪精子总RNA的普通琼脂糖胶电泳图.初步研究的结果表明:射出猪精子中存在的RNA种类与睾丸组织中存在的RNA种类差异大;猪精子RNA的18S和28S片段与睾丸组织无明显差异.猪精子的RNA需要更多的研究.     

猪精子RNA提取的初步研究

实验采用Trizol一次法或试剂盒提取猪精子的总RNA,然后通过RT-PCR扩增的方法,检测精子和睾丸组织中鱼精蛋白(PRM-1)的mRNA;使用不同数量的精子,检测在本实验条件下能扩增出PRM-1带所需要的最小精子数量;通过OD260/280的测算,判断不同提取方法所得RNA的纯度;通过琼脂糖电泳得到精子RNA与睾丸、卵巢组织RNA的电泳图。实验结果表明:在使用RNA沉淀剂时,1.51×107精子可检测到PRM-1的mRNA,不使用沉淀剂则需要3.02×107精子才检测到;使用Trizol一次法提取的精子总RNA纯度较常规Mini试剂盒(W6221)高;本实验首次得到猪精子总RNA的普通琼脂糖凝胶电泳图。初步研究的结果表明,Trizol一次法可用来提取精子总RNA供进一步研究;猪精子RNA的28S和18S片段与睾丸、卵巢组织无明显差异。     

Ki67、PCNA蛋白在犬乳腺肿瘤中的表达

乳腺肿瘤细胞的增殖及其预后具有一定相关性.Ki67、PCNA是最常用的衡量肿瘤增殖指数(Proliferation Index)的标记物[1].Ki67是一种非组蛋白核蛋白质,分子质量在345～395 kD之间,表达于细胞周期的G1、S、G2和M期,但在静止期不存在[2-3].Ki67蛋白半衰期很短,在有丝分裂后很快消失.有研究表明,Ki67蛋白的高表达与肿瘤的转移、预后密切相关.PCNA是一种分子量为36kD的蛋白质,为DNA聚合酶δ的辅助蛋白[4].PCNA在细胞周期的G1晚期开始升高,在S期达到最大值,由于PCNA与细胞DNA合成关系密切,在细胞增殖的启动上起重要作用,所以被作为反映细胞增殖状态指标[5],也成为近年来肿瘤研究的热点.     

昆明小鼠胚胎干细胞建系的初步研究

以昆明小鼠（Mus musculus）为材料，利用超数排卵获得小鼠扩展囊胚、孵化囊胚。为了研究小鼠胚胎干细胞（Mouse Embryonic Stem Cells，mESC）分离和传代的影响因素，设计两个实验：（1）不同孕期（3．5d或4．5d）的囊胚对胚胎干细胞分离效率的影响；（2）第5代后，不同传代方法（机械法或酶消化法）对mESC传代的影响。结果显示：在3．5d孕期时，胚胎为扩展囊胚，在4．5d时为孵化囊胚，扩展囊胚在贴壁率、原代克隆形成率差异不显著，从在继代培养上显著高于孵化囊胚（P〈0．05）；第5代后用机械法或胰酶消化法传代对mESC的维持没有明显差别，但从克隆的形态上看，酶消化法优于机械法。最后，本研究从扩展囊胚组中成功获得了一株mESC，该mESC碱性磷酸酶染色呈强阳性，经RT-PCR分析显示表达Oct4、Sox2，核型为正常40XY。     

不同洗卵液对猪卵母细胞体外成熟和

探讨不同洗卵液对猪卵母细胞体外成熟和体外受精后早期发育的影响,以便开发出简易、经济的洗卵液.结果表明,使用TL-Hepes液、DPBS液、TCM-199 (Ⅰ) 液和TCM-199 (Ⅱ) 液作为洗卵液,对猪卵母细胞体外成熟和体外受精后的早期发育没有显著影响,说明4种洗卵液均可用于猪卵母细胞的洗涤,但DPBS液配制较简易且价格便宜,是最佳的选择.     

不同洗卵液对猪卵母细胞体外成熟和体外受精后早期发育的影响

探讨不同洗卵液对猪卵母细胞体外成熟和体外受精后早期发育的影响,以便开发出简易、经济的洗卵液。结果表明,使用TL-Hepes液、DPBS液、TCM-199()液和TCM-199()液作为洗卵液,对猪卵母细胞体外成熟和体外受精后的早期发育没有显著影响,说明4种洗卵液均可用于猪卵母细胞的洗涤,但DPBS液配制较简易且价格便宜,是最佳的选择。