4种蛙皮肤活性肽的提取及生物活性比较

利用80%甲醇和乙醚刺激方法,分别提取了4种两栖类动物皮肤粗提物和分泌物,并进行了生物学活性的测定.结果表明,4种蛙皮肤粗提物具有广谱抗菌活性,其中中国林蛙有轻微的溶血性,牛蛙与美国青蛙粗提物具有胰蛋白酶抑制剂活性;而4种蛙皮肤粗提物均无胰蛋白酶活性,牛蛙、美国青蛙与东北林蛙具有很强的凝集素活性.利用MTT法检测到4种蛙皮粗提物具有抗肿瘤细胞与抗病毒活性.     

新疆部分地区牛结核病PPD监测与分析

2001年-2003年对新疆部分地区（巴州、阿克苏、博州、伊犁、昌吉、塔城和石河子）牛结核病用“提纯结核茵素皮内变态反应”进行调查，调查数据用SPSS软件统计建立模型，显示2001年-2003年七地州检测牛只分别为16793，21153头和43951头，阳性率分别为0．46％，0．33％和0．57％。其中，巴州地区阳性率明显偏高。昌吉和石河子地区2001年-2002年保持一个较低的水平，2003年牛结核病的阳性率较前两年升高了1％。     

中国鲎(Tachypleus tridentatus)基因工程抗菌肽的制备及其抗菌活性

从中国鲎血细胞RT-PCR扩增抗菌肽tachyplesins基因,经改造构建原核和真核表达载体pET-KRN、pPIC9-KRY,并分别在大肠杆菌DE3和毕赤酵母GSll5中诱导表达.用Tris-Tricine SDS-PAGE检测并进一步电洗脱纯化表达产物,经体外生物活性测定表明,表达产物KRN对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、伤寒沙门菌的抑菌环为25、22、25、16mm;MIC值为3.57、7.14、3.57、14.28mg/L.表达产物KRY对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、伤寒沙门菌和李氏杆菌的抑菌环为26、22、25、18、16mm;MIC值为1.57、3.14、1.57、6.28、6.28mg/L,对水霉的抑菌效果尤其显著,抑菌环达35mm.     

牛蛙(Rana catesbeiana)蛙皮抗菌肽基因的克隆、测序及其表达

利用RT—PCR的方法从牛蛙皮肤组织中克隆到大小为270bp的片段RCABP，将其克隆到pGEM—T载体，测序获得1个新的碱基序列。将此基因克隆到原核表达载体pQE一80L，获得融合表达质粒pQE一80L／DHFR／ABP，在1％IPTG诱导下进行表达。SDS—PAGE检测表明，重组蛙皮抗菌肽蛋白的表达量占菌体总蛋白的24％，以包涵体形式存在。体外抑菌试验表明，所构建的质粒能在大肠杆菌中表达具有体外抑菌活性的蛙皮抗菌肽，该融合蛋白具有良好的应用前景。     

牛蛙(Rana catesbeiana)皮肤cDNA文库的构建与鉴定

以牛蛙皮肤组织为材料获得总RNA,用偶联Oligo(dT)的磁珠纯化mRNA后,利用含Sfi Ⅰ酶切位点的CDSⅢ引物在逆转录酶的作用下合成cDNA的第1链,以含Sfi Ⅰ酶切位点的CDSⅢ引物和SMART引物,利用LD-PCR合成双链cDNA,双链cDNA经Sfi Ⅰ酶切,通过T4DNA连接酶连接到经过相同酶切的λTripIEx2载体,体外包装后转染E.coli XLI-Blue 宿主菌,进行滴度测试和文库扩增.结果构建的牛蛙皮肤cDNA 文库原始库容量为1.42×106 PFU/mL,插入片段长度在0.5～1.5 kb,重组率为89.5%,扩增后的文库滴度为1.35×109 PFU/mL,构建的文库质量符合要求,可用于大规模的功能基因分析.     

质粒DNA拓扑学结构对基因疫苗生物学特性的影响

利用不同拓扑学结构的质粒 ,分别转化 E.coli感受态细胞、转染 SK6 - 6细胞和免疫小鼠 ,比较了不同拓扑学结构质粒对转化效率、转染率和对免疫应答水平的影响。结果显示 ,超螺旋占 5 0 %比例的猪瘟病毒 E2基因表达质粒p CDSW转化 E.coli感受态细胞的效率比开环的 p CDSW高 8倍 ,超螺旋比例占 80 %的 p VAXE2 IL- 2质粒比酶切线性化质粒转化率高 2 2倍 ;以荧光蛋白基因为报告基因 ,超螺旋比例占 80 %的荧光蛋白真核表达质粒转染真核细胞的效率是线性化质粒的 12倍 ;以猪瘟病毒主要保护性抗原 E2基因表达质粒 ,分别制备成超螺旋和开环形式占优势的质粒 ,免疫昆明鼠 ,抗体检测结果显示 ,超螺旋比例高的基因疫苗免疫效果明显好于开环质粒的基因疫苗     

限制性内切酶Bgl I、Bam HI、Pst I、Eco RI的分离纯化

自60年代末期,人们提出第一个限制性内切酶之后,越来越多的限制性内切酶被发现和纯化,其已成为基因重组、基因物理图谱绘制、DNA核苷酸序列分析、微生物的分离鉴定等不可缺少的工具.本实验参照并改进了国内外的一些方法,对Bgl I、Bam HI、Pst I、Eco RI等限制性内切酶进行了分离和纯化.     

中国林蛙抗菌肽基因在毕赤酵母中的表达及其活性检测

将中国林蛙皮肤抗菌肽基因(RC)克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,使之准确融合于а交配因子分泌信号,然后通过电击转化毕赤酵母宿主菌GS115/His-,构建pPIC9K/RC。将筛选出的高效表达的重组转化子用甲醇作诱导剂进行小瓶发酵,28～30℃诱导后,经Tricine SDS-PAGE检测,表达产物在а信号因子引导下分泌到培养基中。分泌到培养基中的表达产物能够抑杀细菌和抑制肿瘤细胞生长。对酵母重组子用酵母染色体DNA的通用引物和目的片段的引物进行PCR扩增。结果表明,中国林蛙皮肤抗菌肽基因能以单拷贝整合到毕赤酵母染色体基因组中并形成转录产物。     

大肠杆菌耐药性中药抑制剂的初步研究

采用琼脂挖孔培养法、琼脂平板点种培养法和药敏纸片法，研究了中药对人源和动物源性10株耐药大肠杆菌体外耐药特性的抑制作用。结果表明：中药中3种物质(分别命名为：ITl、IT2、IT3)对大肠杆菌的耐药性有不同程度的抑制，ITl对氟喹诺酮类、卡那霉素、氯霉素的耐药性有较好的抑制作用；IT2、IT3对氯喹诺酮类、庆大霉素、强力霉素的耐药性有较好的抑制作用；有的中药抑制率达到90％，但对四环素、氨苄青霉素的耐药性没有抑制作用。     

蛋鸡大肠杆菌与多杀性巴氏杆菌混合感染的诊断

1 发病情况及临床症状 2007年5月,乌鲁木齐市五一农场某养殖户饲养的2月龄鸡只出现死亡,1周内死亡300余只,第65天注射新城疫Ⅰ系苗,当天死亡60余只,1000余只发病鸡翅膀下垂、羽毛松乱、缩颈闭眼、厌食、饮水增加,口、鼻有黏液性分泌物,呼吸困难,肉垂稍肿,体温升高到43～44℃.