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1.
奶牛γ-干扰素基因克隆及其在大肠杆菌中表达   总被引:15,自引:2,他引:13  
根据奶牛γ干扰素 ( Bov IFN-γ)基因的 c DNA序列设计 1对引物 ,应用一步法逆转录聚合酶链式反应 ( RT-PCR)技术从奶牛脾淋巴细胞的总 RNA中扩增出特异性片段。将 RT-PCR产物克隆到 Pucm-T载体中 ,经过限制性酶切分析、测序证实扩增得到的 Bov IFN-γ基因序列正确。将该基因片段切下并克隆到大肠杆菌表达载体 PGEX-6P-1谷光甘肽 S 转移酶基因的下游 ,经 IPTG诱导后 ,表达出 42 ku的融合蛋白 ,薄层扫描测定可溶性融合蛋白表达量约占菌体可溶性总蛋白的 2 5 %。通过细胞病变抑制试验证实 ,融合蛋白具有较好的生物学活性 ,在牛肾细胞上抑制水泡性口炎病毒的活性可达到 1 63 84U· mg- 1 ,有望成为预防和控制奶牛疾病的新产品。  相似文献
2.
抗禽流感病毒H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制   总被引:11,自引:4,他引:7  
以H9亚型禽流感病毒免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用血凝抑制试验检测细胞培养上清,结果获得3株阳性细胞株,分别命名为6E6、6B6、5B4。经2次亚克隆后,所有杂交瘤细胞保持了分泌抗禽流感H9亚型特异抗体的能力。特异性试验证明,3株单克隆抗体仅与试验的H9病毒株反应,与H5亚型禽流感病毒、鸡新城疫病毒和鹅源腺病毒等不反应。间接免疫荧光试验(IFA)结果表明,3株单克隆细胞的上清均能与感染H9亚型病毒的鸡成纤维细胞呈特异性绿色荧光反应。实验性病毒检测结果表明,IFA方法检测H9禽流感比鸡胚接种分离病毒的效果好、灵敏度高,是一种经济实用的方法。获得的单克隆抗体可在禽流感流行病学的监测及预警预报中发挥重要作用。  相似文献
3.
转化型桔梗皂甙抗IBDV、AIV和NDV的研究   总被引:8,自引:4,他引:4  
为探索中药桔梗的主要活性成分桔梗总皂甙及其转化型桔梗皂甙的生物学活性和抗IBDV、A IV(H9)、NDV的作用,采用M TT法和间接免疫荧光检测试验,分别研究桔梗总皂甙与转化型桔梗皂甙的细胞毒性、对CEF生长和活性的影响以及抗病毒活性。结果表明:桔梗总皂甙和转化型桔梗皂甙对细胞毒性作用的IC50分别为128.74和53.48μg.mL-1,对CEF细胞生长和活性具有最大促进作用的浓度分别为80和25μg.mL-1。桔梗总皂甙阻断IBDV、A IV(H9)、NDV感染CEF细胞的作用分别为66.3%、55.4%和36.9%,抑制三者增殖的作用分别为69.4%、60.8%和26.2%;转化型桔梗皂甙阻断三者感染CEF细胞的作用分别为84.7%、63.5%和45.5%,抑制三者增殖的作用分别为77.8%、63.5%和41.9%,表明桔梗总皂甙经化学处理转变成转化型桔梗皂甙,可明显提高其生物学活性和抗病毒用。  相似文献
4.
转化型人参皂苷对单克隆抗体生成的影响   总被引:6,自引:0,他引:6  
以转化型人参皂苷的8个组分,按12.50和6.25μg·mL-1的剂量,以培养抗禽流感(AIV)H9亚型血凝素特异性单克隆抗体6E6株杂交瘤细胞和抗新城疫病毒(NDV)血凝素与神经氨酸酶单克隆抗体10B11株杂交瘤细胞,收集细胞培养上清,用血凝抑制试验(HI)和间接免疫荧光试验(IFA)检测单抗水平,探讨转化型人参皂苷对单克隆抗体生成的影响。结果表明;转化型人参皂苷3、4、7号组具有促进6E6单抗和10B11单抗生成的作用,其HI效价为26-27,与对照组(25)相比差异显著;IFA效价为104-105,与对照组(102)相比差异极显著。  相似文献
5.
利用单克隆抗体H19及间接免疫荧光抗体反应(IFA),从经马立克病病毒(MDV)强毒株Mdll的38kd磷蛋白(pp38)基因克隆质粒DNA转染的MDV疫苗毒CVl988株感染的鸡胚成纤维细胞中。筛选到一个点突变株CVI/rpp38(AA)。DNA序列测定结果表明,该点突变株pp38基因ORF的第320位和326位碱基均已从亲本CVl988株的“G”突变为“A”,导致第107和109位氨基酸分别从精氨酸和甘氨酸转变为谷氨酰胺和谷氨酸。这个双氨基酸点突变株在IFA和免疫沉淀反应中与pp38特异性单抗H19都呈现阳性反应。但与另一个pp38特异性单抗T65都完全不反应,表现出与亲本病毒完全相反的结果。本研究发现了MDV的pp38上二个特异性不同的抗原表位,并以确凿的证据证明了第107及109位的谷氨酰胺和甘氨酸分别在这二个抗原表位形成中的关键作用。  相似文献
6.
抗A型禽流感病毒核蛋白特异性单克隆抗体研究   总被引:6,自引:4,他引:2  
利用禽流感H9亚型病毒(AIV-H9)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经免疫荧光试验(IFA)检测,以研制抗禽流感病毒(AIV)单克隆抗体。结果获得了5株特异性抗AIV核蛋白(NP)的单克隆抗体细胞株,分别命名为AIV-NP-2C3、AIV-NP-6A5、AIV-NP-3H9、AIV-NP-7B4、AIV-NP-2H4。这5株单克隆抗体能与所有试验的AIV-H9病毒反应,Western blotting方法鉴定结果表明,单克隆抗体仅识别60 ku的蛋白抗原,而不与新城疫病毒、禽网状内皮组织增殖症病毒、传染性法氏囊病毒等反应。初步应用结果显示,以这些单克隆抗体建立的间接免疫荧光试验或ELISA方法可迅速检测出禽流感病毒,这些单克隆抗体在禽流感的预防监测中将发挥重要的作用。  相似文献
7.
转化型人参皂苷抗MDV及诱导肿瘤细胞凋亡的作用初探   总被引:5,自引:3,他引:2  
以转化型人参皂苷的8个组,按12.5μg·mL-1的剂量,在体外鸡胚成纤维细胞上进行抗MDV-RB1B强毒株空斑减数试验和诱导肝癌7402细胞株、大鼠脑胶质瘤细胞C6株细胞凋亡试验,用光学显微镜观察、琼脂糖凝胶电泳检测分析DNA损伤。结果表明:转化型人参皂苷6、7号组,在感染阻断、增殖抑制、直接杀灭3种方式的抗MDV空斑减数率都达到阿昔洛韦(ACV)抗MDV空斑减数率的80%,转化型人参皂苷4、6号组对MDV-RB1B株的直接杀灭作用与ACV的杀灭作用相同;转化型人参皂苷8号组诱导肝癌7402株细胞48h后,有60%的瘤细胞凋亡,对大鼠脑胶质瘤C6株细胞也有诱导凋亡的作用。  相似文献
8.
禽源性大肠杆菌HPI irp2基因序列的扩增及比较   总被引:5,自引:1,他引:4  
从养殖场发病家禽中分离到多株禽源性大肠杆菌(Escherichia coli),用其中YZG040515、NTLFC040402、CHZ031016菌株提取细菌高致病性染色体DNA,根据耶尔森菌高致病性毒力岛(HPI)irp2基因设计引物,用PCR扩增出278 bp基因片段。将PCR产物克隆到pGEM-T-easy中,经EcoR I酶切鉴定为阳性者进行序列测定。结果表明:该基因片段与GeneBank中公布的耶尔森菌HPI irp2基因的同源性高达98%以上。证明禽源性大肠杆菌中具有耶尔森菌毒力岛HPI基因序列,结合临床发病情况和流行病学,提示该毒力岛与日趋严重的家禽大肠杆菌病可能有一定的相关性。  相似文献
9.
鹅Ⅲ群腺病毒的分离与鉴定   总被引:4,自引:0,他引:4  
采集无临床症状鹅的泄殖腔分泌物或病鹅的肠道、肝脏、脾脏,按常规方法制成接种液接种鸭胚,以血凝和血凝抑制的方法检测病毒。结果表明:从50多个样品中分离到2株腺病毒,分别命名为H5J24和N8J8。这2株病毒均能凝集鸡、鸭、鹅的红细胞,其凝集作用可被抗Y81G4株鹅腺病毒多抗血清所抑制,但不能被抗新城疫病毒单抗、抗H5和H9亚型禽流感病毒单抗所抑制。经形态学观察、理化特性测定和PCR检测,证明这2株病毒为Ⅲ群禽腺病毒成员。  相似文献
10.
MDV CVI988/Rispens弱毒株VP22基因克隆和序列分析   总被引:4,自引:1,他引:3  
血清I型马立克氏病病毒(MDV-1)的UL49h基因编码病毒被膜蛋白VP22在病毒的复制和传播过程中具有非常重要的作用.根据已发表的MDV-1 GA株的序列,从CVI988/Rispens弱毒株感染的鸭胚成纤维细胞中扩增VP22基因片段,结果获得大小为732 bp的PCR产物.将PCR产物克隆T载体并测序分析,结果发现,与经典强毒GA株相比,弱毒株CVI988的VP22存在3个定点突变和一个缺失性突变.缺失的位点亲水性强,并位于VP22主要的抗原决定簇区.结果证明强毒株与弱毒株的VP22存在明显差异,为利用CVI988 VP22的蛋白传导域传导目的蛋白奠定了理论基础.  相似文献
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