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1.
应用 RT-PCR 法快速检测马铃薯卷叶病毒   总被引:19,自引:1,他引:18  
根据马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物,从感染PLRV的马铃薯病叶组织中提取出病毒的RNA,进行cDNA合成及PCR扩增,得到一条长度约620bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致。建立了快速灵敏简便的PLRV检测的新方法,其灵敏度要比PLRV的血清学检测方法高10^4倍,在基因水平上为PLRV的检测提供了更新手段,并在农业部植物检疫实验所马铃薯病毒检  相似文献
2.
为给农业和植物检疫部门提供一种特异性强、灵敏度高,可以快速、直接检测植物病原菌的方法,将玉米细菌性枯萎病菌16S rDNA基因克隆测序,根据该细菌与其他细菌菌株16S rDNA序列差异,设计出对玉米细菌性枯萎病菌具有稳定点突变的特异性探针,除泛菌属3个种和欧氏菌属3个种外,还对假单胞菌属1个种,黄单胞菌属1个种,棒形杆菌属1个种,短小杆菌属1个种以及5种植原体进行了实时荧光PCR检测.结果表明:只有玉米细菌性枯萎病菌产生荧光,其他细菌和植原体都没有荧光产生.检测的灵敏度为10^4CFU/mL的菌悬浮液,相当于4个细菌细胞的基因,灵敏度高,也就是说,反应体系中只要有2个活细菌,实时荧光PCR就能检测到.相对灵敏度为10^7CFU/mL,而且整个检测过程只需2h,由于实验采用独特全封闭反应管及光电传导系统,不用凝胶电泳,降低了污染.  相似文献
3.
将菜豆细菌性萎蔫病菌(Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens)16S rDNA基因进行克隆测序,并依据此序列设计菜豆细菌性萎蔫病菌的实时荧光PCR引物和特异性探针,对所收集的样品进行了检测. 结果表明,该检测方法具有快速、特异、灵敏、重复性好等优点,只有菜豆细菌性萎蔫病菌产生荧光,其他细菌没有荧光产生. 检测的灵敏度为105 CFU/mL的细菌悬浮液,相对灵敏度为106 CFU/mL.  相似文献
4.
桔小实蝇在中国的适生性研究   总被引:8,自引:0,他引:8  
对桔小实蝇Bactrocera dorsalisHendel在中国的适生性进行了研究,结果表明,该虫的世代发育起点温度和有效积温分别为10.675 7℃、501.724 0日度.根据桔小实蝇的致死温度、有效积温和生物气候相似距,构建了桔小实蝇适生性分析计算机模型.用中国670个气象站30年的气候资料运行该模型,将桔小实蝇在中国的定殖风险区划分为高度危险区、危险区、轻度危险区和安全区,分布北界为(30±2)°N,适生区面积占全国的31.64%,1年发生3~11代,以4~8代为主.  相似文献
5.
基于ITS序列的菟丝子PCR鉴定   总被引:7,自引:2,他引:5  
提取了7个药用菟丝子种样品的DNA,采用ITS序列扩增通用引物对其进行PCR扩增,并对PCR产物进行克隆和测序.根据所测得菟丝子ITS全长序列与其常见易混品所在属的代表植物ITS序列比对,设计了一对特异性引物并进行了PCR检测.结果表明,此对引物能将药用菟丝子种子与4种易混品区分开来,可以用于药用菟丝子的真伪鉴定.  相似文献
6.
香蕉细菌性枯萎病菌实时荧光PCR检测方法的建立   总被引:6,自引:0,他引:6  
根据香蕉细菌性枯萎病菌与其它细菌菌株16SrDNA序列差异,设计并合成一对引物和一条具有稳定点突变特异性探针,建立了对香蕉细菌性枯萎病菌的实时荧光PCR检测方法。除烟草青枯病菌和马铃薯青枯病菌外,还对其它属细菌菌株进行了荧光PCR检测。结果表明,只有香蕉细菌性枯萎病菌产生荧光,其它细菌都没有荧光产生。从而证明此方法特异性强,灵敏度高,适合病害的快速诊断和口岸检验检疫应用。  相似文献
7.
核rDNA ITS序列在植物种质资源鉴定中的应用   总被引:6,自引:0,他引:6  
核rDNA 的内转录间隔区ITS序列包含被5.8S rDNA所分隔的ITS1和ITS2两个片段.在裸子植物中,ITS序列长度变异较大,不利于扩增和测序,但长度的变异可以作为一个性状用于裸子植物的鉴定与系统学研究.在被子植物中,ITS序列的长度稳定,而且序列变异较快,可以提供丰富的信息位点,是被子植物鉴定中的重要分子标记.文中对ITS在植物物种鉴定中的应用进行了介绍.  相似文献
8.
从典型的马铃薯卷叶病毒病株中直接提出植物总RNA,根据PLRV外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物,经RT-PCR法扩增出全长的cDNA片段,将其克隆到质粒pGEM-3Zf( )上,并进行了序列分析。结果表明,克隆的cDNA片段由627个核苷酸组成,编码208个氨基酸组成的理论分子量为23k的蛋白,与PLRV外壳蛋白的大小一致;此外克隆片段还含有一个不同于外壳蛋白基因的阅读框架,该框架由465个核苷酸组成,编码155个氨基酸组成的理论分子量为17k的蛋白,与PLRV的17k蛋白大小一致,与国外报道的几个株系相比,PLRV分离和的外壳蛋白基因及17k蛋白基因的核苷酸同源率分别高达97.5%-99.7%和96.5%-99.6%,由此推测的氨基酸同源率高达97.6%-99.5%和96.1%-99.4%,说明所克隆的PLRV外壳蛋白基因和17k蛋白基因具有高度的保守性,本研究克隆了PLRV分离物外壳蛋白和17k蛋白基因的序列,为进一步进行抗PLRV基因工程研究奠定基础。  相似文献
9.
葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ基因的克隆及序列分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
根据葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ美国分离物的GLRaV-3CP基因序列,设计并合成了1对该病毒的PCR引物,利用IC-RT-PCR成功地检查到合适大小的PCR产物;同时将PCR产物克隆到中间载体PGEM-3Zf,转化大肠杆菌DH5α菌株,筛选阳性克隆。通过双酶切以及序列分析表明,扩增样品与美国分离物的同源性为94.1%。  相似文献
10.
冀中南主要西瓜病毒病症状类型与病毒种类   总被引:1,自引:0,他引:1  
对冀中南西瓜主产区西瓜病毒病进行了调查和毒原检测,发现西瓜病毒病普遍发生,复合侵染现象普遍,症状类型复杂繁多。发病程度与气候、地理位置和田间管理有关。用血清学SPA-ELISA方法检测主要西瓜病毒病毒原种类为WMV-2,ZYMV,PRSV,SgMV。  相似文献
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