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1.
根据CyclinE(细胞周期蛋白E)基因序列,设计siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带U6启动子真核表达载体,构建针对CyclinE基因的shRNA真核表达载体.酶切和测序鉴定确认载体构建成功后,脂质体法转染宫颈癌HeLa细胞,观察绿色荧光蛋白表达检测转染效率,RT-PCR法检测载体对CyclinE基因的表达抑制效果.实验结果显示CyclinE基因的RNAi真核表达载体构建成功,转入HeLa细胞后可以特异抑制细胞中CyclinE基因的表达.其中靶向(+797~+819)位点的质粒干扰效果较好,基因表达抑制率为59%.这些结果为利用该载体抑制CyclinE基因进行宫颈癌基因治疗研究奠定了基础.  相似文献
2.
在包括食管癌在内的多种肿瘤中,Plk1呈现过表达且具重要预后价值,表明该分子是一个潜在的肿瘤治疗靶点.为了探讨Plk1作为分子靶点用于食管癌治疗的潜在价值,采用siRNA技术抑制Plk1的表达,并观察了其对3株代表性食管癌细胞生长的影响.结果表明:合成的特异性短链Plk1 siRNA在mRNA和蛋白质水平上均能高效、特异性地抑制3株代表性食管癌细胞系中Plk1的表达.同时,siRNA介导的Plk1表达沉默显著抑制了食管癌细胞的生长,细胞活力同时显著下降.另外,Plk1表达被抑制后,大量细胞有丝分裂受到阻滞,并进而发生大规模细胞死亡.这些结果表明,siRNA介导的Plk1表达沉默能显著抑制食管癌细胞的生长,Plk1是一个潜在的用于食管癌治疗的新靶点.  相似文献
3.
以夏芳蚕品种为材料,对其不同蚕期、不同龄期间肠道好氧微生物种群构成及其变化情况进行了系统的研究。结果表明:春蚕肠道氧菌数量较多,以肠杆菌、微示菌科菌和芽胞杆菌科菌为主;秋蚕肠道好好氧菌只有少量微球菌科菌和芽胞杆菌存在;人工饲料育场道好氧菌数量较少,以芽胞杆菌为主。  相似文献
4.
用连接PCR合成出甜味蛋白Brazzein的基因,克隆到PUC57质粒中测序后,用EcoR I和Not I双酶切,连接到pPIC9k,电转化毕赤酵母GS 115,经MD和MM平板筛选,获得His^ Mut^ 重组子。0.5%甲醇诱导表达96h后,对发酵液和细胞进行SDS—PAGE分析,在发酵液中没有蛋白带出现,在细胞裂解液中出现相对分子质量约6.0kd的特异性甜味蛋白条带,与预期的相对分子质量大小相符。用BCA蛋白定量试剂盒测定,Brazzein在毕赤酵母中的表达量可达329mg/L。  相似文献
5.
用连接PCR合成出甜味蛋白Brazzein的基因,克隆到PUC 57质粒中测序后,用EcoR I 和Not I双酶切,连接到pPIC 9 k,电转化毕赤酵母GS 115,经MD和MM平板筛选,获得His+Muts重组子.0.5%甲醇诱导表达96 h后,对发酵液和细胞进行SDS-PAGE分析,在发酵液中没有蛋白带出现,在细胞裂解液中出现相对分子质量约6.0 kd的特异性甜味蛋白条带,与预期的相对分子质量大小相符.用BCA蛋白定量试剂盒测定,Brazzein在毕赤酵母中的表达量可达329 mg/L.  相似文献
6.
根据CyclinE(细胞周期蛋白E)基因序列,设计siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带U6启动子真核表达载体,构建针对CyclinE基因的shRNA真核表达载体.酶切和测序鉴定确认载体构建成功后,脂质体法转染宫颈癌HeLa细胞,观察绿色荧光蛋白表达检测转染效率,RT-PCR法检测载体对CyclinE基因的表达抑制效果.实验结果显示CyclinE基因的RNAi真核表达载体构建成功,转入HeLa细胞后可以特异抑制细胞中CyclinE基因的表达.其中靶向(+797~+819)位点的质粒干扰效果较好,基因表达抑制率为59%.这些结果为利用该载体抑制CyclinE基因进行宫颈癌基因治疗研究奠定了基础.  相似文献
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